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海洋球石藻病毒(Coccolithovirus)硫氧还蛋白(Trx)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达及其活性分析 被引量：1
1
作者 蔡艺钦 张稚兰 +1 位作者 罗邦彬 刘静雯 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期905-910,共6页
从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编... 从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编码197个氨基酸;在毕赤酵母GS115中成功诱导表达重组EhV-Trx,经SDS-PAGE分析目的蛋白分子量约为27.8kDa;重组EhV-Trx具有二硫键还原酶的活性,能有效打开胰岛素A、B两条链的二硫键,有望开发成一种新型的硫氧还蛋白脱敏制剂应用于食品安全领域。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 硫氧还蛋白 毕赤酵母 分泌表达 活性分析
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海洋球石藻(Emiliania huxleyi)通用表达载体的构建与电转化
2
作者 王薛婷 郭强强 +3 位作者 蔡艺钦 陈志福 李健 刘静雯 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期103-114,共12页
海洋球石藻Emiliania huxleyi是一种全球广泛分布的真核浮游植物,该种不仅是海洋碳、硫循环和全球气候变化的重要指示物种,而且能够产生丰富的次级代谢生物活性物质,在生物技术领域也具有很好的应用前景。本文通过分析氨苄青霉素、卡那... 海洋球石藻Emiliania huxleyi是一种全球广泛分布的真核浮游植物,该种不仅是海洋碳、硫循环和全球气候变化的重要指示物种,而且能够产生丰富的次级代谢生物活性物质,在生物技术领域也具有很好的应用前景。本文通过分析氨苄青霉素、卡那霉素、G418、氯霉素、链霉素、新生霉素及嘌呤霉素等7种常用抗生素对海洋球石藻生长的影响,确定G418可作为该藻阳性转化藻株的抗性筛选试剂,其对应的抗性基因neo则作为该藻表达载体构建中的抗性筛选标记。在此基础上克隆了绿色荧光蛋白基因gfp、抗性标记基因neo及E.huxleyi BOF92内源性岩藻黄素-叶绿素a/c结合蛋白基因的启动子fcp,以pUC18为基础载体,构建了pUC18-fcp-gfp和pUC18-fcp-neo两个重组表达载体,以电转化方法共转化球石藻细胞并结合选择性固体培养基筛选,成功获得了被转化的球石藻细胞。海洋球石藻遗传转化系统的建立为进一步开展该种相关的基础生物学研究及其在生物技术领域的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 海洋球石藻 通用表达载体 riCO标记基因 电转化
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钢筋翻样与加工课程仿真教学探索
3
作者 刘惠雅 蔡艺钦 《南方农机》 2020年第2期112-113,共2页
在实际施工中,钢筋翻样与加工课程的内容涉及建筑产品的质量、安全、寿命、造价等,是非常重要的,但学生普遍觉得该课程比较难学,平法施工图的使用对工程技术人员有更高的要求。文章阐述了如何在该课程中采用仿真教学方法,让学生经历一... 在实际施工中,钢筋翻样与加工课程的内容涉及建筑产品的质量、安全、寿命、造价等,是非常重要的,但学生普遍觉得该课程比较难学,平法施工图的使用对工程技术人员有更高的要求。文章阐述了如何在该课程中采用仿真教学方法,让学生经历一个完整的仿真钢筋施工工作过程,令课程不再抽象难懂,从而提高教学的有效性。 展开更多
关键词 仿真教学 行动导向 钢筋翻样与加工课程 平法施工图
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谈工学结合一体化在钢筋工程课程的应用
4
作者 蔡艺钦 《课程教育研究（学法教法研究）》 2018年第18期125-126,共2页
在传统的中等职业教育的教学中,多以输入式教学为主,学生的学习是被动接受的,是无趣、枯燥、单一的.工学结合一体化教学是以学生为中心,让学生参与其中,化被动学习为主动学习,化无趣为有趣,通过完成学习任务,每一位学生都能积极参与,掌... 在传统的中等职业教育的教学中,多以输入式教学为主,学生的学习是被动接受的,是无趣、枯燥、单一的.工学结合一体化教学是以学生为中心,让学生参与其中,化被动学习为主动学习,化无趣为有趣,通过完成学习任务,每一位学生都能积极参与,掌握了钢筋工程施工的相关技能,并在完成任务的过程中逐步养成了良好的职业习惯,教学目标得以较好地实现. 展开更多
关键词 工学结合一体化 学生 钢筋模型 教学评价
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一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析 被引量：1
5
作者 李丽华 邱健健 +2 位作者 蔡艺钦 于鹏 刘静雯 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期101-110,共10页
从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重... 从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重组 Sp。结果表明：EhV99B1-Sp 基因的 ORF 为1110 bp，编码368个氨基酸，蛋白相对分子质量为39．5 kDa；该基因片段与 GenBank 中 EhV86-Sp 的同源性很高，核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为95％和97％，而与其他物种 Sp 序列的同源性仅为28％～32％，说明其可能是丝氨酸蛋白酶家族中的一个新成员；预测的二级结构特征显示EhV99B1-Sp 的蛋白结构域中具有典型的 LTAGHC （组氨酸活性位点区域）和 AICNGDSGGPLF（丝氨酸活性位点区域）两个丝氨酸蛋白酶催化活性位点的氨基酸基序，是一个两次跨膜蛋白；将该基因在大肠杆菌中进行低温诱导表达，得到分子量为60 kDa 的重组蛋白，经鲤鱼肌肉丝氨酸蛋白酶（MB-SP）抗体检测证实为 Sp，且重组蛋白在大肠杆菌细胞中具有明显的生物学活性。本研究结果为进一步探讨 EhV99B1-Sp 在病毒与宿主相互作用过程中的调节作用及其功能与应用奠定基础。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒 丝氨酸蛋白酶 基因克隆 重组表达 活性分析
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病毒介导的海洋球石藻(Coccolithophores)鞘脂类代谢调控 被引量：1
6
作者 马亚瑞 刘旭宏 +2 位作者 蔡艺钦 李健 刘静雯 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1555-1564,共10页
海洋球石藻(Coccolithophores)是一种全球广泛分布且具有重要生态功能的真核浮游植物,有些种类是大洋和近岸常见的赤潮种。自然海域中,病毒感染是导致球石藻死亡和赤潮消亡的一个关键因素。基于一株海洋球石藻Emiliania huxleyi及其特... 海洋球石藻(Coccolithophores)是一种全球广泛分布且具有重要生态功能的真核浮游植物,有些种类是大洋和近岸常见的赤潮种。自然海域中,病毒感染是导致球石藻死亡和赤潮消亡的一个关键因素。基于一株海洋球石藻Emiliania huxleyi及其特异性裂解病毒全基因组测序注释的结果,研究者们发现病毒可能通过基因横向转移从宿主基因组中获取了一系列与鞘脂类代谢相关的关键酶基因,进而在一定程度上掌控了宿主鞘脂类代谢,大量合成、积累病毒性鞘脂类物质,并最终诱导宿主细胞以凋亡的形式死亡。因此,病毒介导的宿主鞘脂类代谢在调节病毒与宿主间相互作用中具有重要意义。本文着重综述海洋球石藻病毒与宿主间的基因横向转移、病毒介导的宿主鞘脂类代谢特点及其生态学意义,以期深入了解海洋球石藻病毒与宿主间复杂的相互作用关系。 展开更多
关键词 海洋球石藻 海洋球石藻病毒 基因横向转移 鞘脂类代谢 生态学意义
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