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人表皮生长因子的基础和应用研究 被引量:14
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作者 黄秉仁 +1 位作者 向绪传 Xiang-Xu-zhuan 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期176-180,共5页
本文报道了有关人表皮生长因子( hEGF)及其受体( EGFR)的基础研究结果,以及在此基础上进行新药开发的有关工作: hEGF的基因合成、表达载体的构建和转化宿主细胞、表达产物的纯化和中试规模三批样品的生产和检验等的有关研究结果、... 本文报道了有关人表皮生长因子( hEGF)及其受体( EGFR)的基础研究结果,以及在此基础上进行新药开发的有关工作: hEGF的基因合成、表达载体的构建和转化宿主细胞、表达产物的纯化和中试规模三批样品的生产和检验等的有关研究结果、 hEGF滴眼液的动物实验和临床实验等新药研制过程。有关基础研究表明,编码 51个氨基酸的 hEGF可以在α因子前导肽的引导下在酵母体系中分泌性表达,表达产物可促进角膜缘上皮细胞的增殖,可促进角膜碱烧伤的愈合,可用于口腔溃疡和皮肤烧伤的治疗,可对大鼠十二指肠溃疡有预防作用等 ,并用之制备了抗血清以测定血尿中 EGF的浓度。研究表明 EGF在大于 10 ng/ml浓度下对神经胶质瘤细胞株 BT325和人阴道上皮癌细胞株 A431的生长具有抑制作用,并用差异显示方法对此现象进行了分子机制的探讨。研究肾癌 EGFR表达和 DNA含量检测具有临床意义。对 EGF的晶体进行了初步的结构分析。中试产品检测表明 hEGF相对分子质量为 6000、等电点为 4.6、氨基端 15个氨基酸顺序正确、具有 EGF的免疫原性和生物活性。产品中无酵母细胞的残余 DNA。动物实验表明 EFG在体内无蓄积,有明确的促进角膜上皮细胞增殖的作用,无急毒和长毒副作用,对眼无刺激和局部毒性作用。在四家医院进行的多中? 展开更多
关键词 表皮生长因子 受体 重组蛋白 滴眼液 基因工程药
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甲基营养型酵母系统表达的重组人表皮生长因子的纯化及其性质 被引量:15
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作者 黄秉仁 +11 位作者 王欣 马雪梅 马晓骊 李旌军 李红卓 韦忠明 梁青 郑华军 唐琪浩 唐申秀 廖洪涛 向绪传 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期106-110,共5页
目的 获得可用于动物试验和临床试验的人表皮生长因子原料药。方法 化学合成的人表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中表达并分泌到培养基中的人表皮生长因子蛋白经 Phenysepharose 6 Fast Flow( high sub)柱、 Q-sepharose High Perfo... 目的 获得可用于动物试验和临床试验的人表皮生长因子原料药。方法 化学合成的人表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中表达并分泌到培养基中的人表皮生长因子蛋白经 Phenysepharose 6 Fast Flow( high sub)柱、 Q-sepharose High Performance柱、 Superdex 30柱纯化后进行生物学性质检测。结果 纯化后的蛋白产物纯度达 98%,是无热源、无内毒素、无甲基营养型酵母染色体 DNA污染的,有正确的分子量、等电点、氨基末端氨基酸顺序、肽图、紫外光谱、及生物活性性质的重组蛋白。结论 纯化蛋白符合动物试验和临床试验的要求,为制备多种人表皮生长因子制剂进行动物实验和临床试验打下了基础。 展开更多
关键词 重组人表皮生长因子 纯化 化学性质研究 生物活性 甲基营养型酵母系统
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胶质细胞衍生的神经营养因子与神经退行性疾病 被引量:9
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作者 马雪梅 黄秉仁 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1996年第4期157-160,共4页
胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)是多巴胺神经元及运动神经元的营养因子,对由于损伤引起的多巴胺神经元及运动神经元的变性有保护及修复作用,因而可能用于临床治疗PD和ALS这类神经退行性疾病。
关键词 神经退行性疾病 神经营养因子 胶质细胞衍生
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人表皮生长因子基因在酵母系统中的表达 被引量:6
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作者 黄秉仁 张岱 +1 位作者 迟来顺 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第5期331-337,共7页
酵母细胞被含有α启动子调控下的人工合成的hEGF基因的表达质粒转化.表达出的蛋白能被有效地分泌到培养液中,并被证实为具有生物活性的hEGF。
关键词 表皮 酵母细胞 表达 生长因子
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表皮生长因子与纤维连接蛋白联合应用治疗兔角膜碱烧伤的研究 被引量:8
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作者 王京 孟忻 +3 位作者 齐立平 张新建 黄秉仁 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期378-379,共2页
表皮生长因子与纤维连接蛋白联合应用治疗兔角膜碱烧伤的研究王京,孟忻,齐立平,张新建,黄秉仁,蔡良婉角膜碱烧伤后反复性上皮糜烂及溃疡是治疗的难题之一。为促进角膜损伤的愈合,我们将表皮生长因子(epidermalgrow... 表皮生长因子与纤维连接蛋白联合应用治疗兔角膜碱烧伤的研究王京,孟忻,齐立平,张新建,黄秉仁,蔡良婉角膜碱烧伤后反复性上皮糜烂及溃疡是治疗的难题之一。为促进角膜损伤的愈合,我们将表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)与纤维连... 展开更多
关键词 角膜烧伤 表皮生长因子 纤维连接蛋白
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ThioFusion表达系统──大肠杆菌中表达可溶性蛋白的重大突破 被引量:5
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作者 马雪梅 黄秉仁 《生命的化学》 CAS CSCD 1995年第3期35-37,共3页
ThioFusion表达系统──大肠杆菌中表达可溶性蛋白的重大突破马雪梅,黄秉仁,蔡良婉(中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,北京100005)在细菌中生产重组蛋白快速、简便,可以产生大量目的蛋... ThioFusion表达系统──大肠杆菌中表达可溶性蛋白的重大突破马雪梅,黄秉仁,蔡良婉(中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,北京100005)在细菌中生产重组蛋白快速、简便,可以产生大量目的蛋白。然而,在大肠杆菌中表达异源蛋白... 展开更多
关键词 细菌 大肠杆菌 ThioFusion表达 可溶性蛋白
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RT-PCR法扩增的人溶菌酶cDNA的克隆及其核苷酸顺序分析 被引量:4
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作者 黄秉仁 赵崇 +1 位作者 雷小虹 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第3期269-273,共5页
本文以人胎盘全RNA为底物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),制备出了人溶菌酶的cDNA片段。在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系内,将此cDNA克隆入载体pUC12的Sma Ⅰ位点。用重组质粒双链DNA的末端终止法测定了其全部的核苷酸顺序,证明... 本文以人胎盘全RNA为底物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),制备出了人溶菌酶的cDNA片段。在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系内,将此cDNA克隆入载体pUC12的Sma Ⅰ位点。用重组质粒双链DNA的末端终止法测定了其全部的核苷酸顺序,证明其全长为444bp,编码了18个氨基酸的信号肽和130个氨基酸的成熟蛋白组成的溶菌酶的前体蛋白,并证明已成功地在此cDNA的3′末端导入了两个终止密码子及一个限制性内切酶Sal Ⅰ的识别位点。由中国人溶菌酶cDNA推导出的氨基酸顺序与有关报道不同,有5个氨基酸的改变。表达蛋白的研究工作正在进行中。 展开更多
关键词 胎盘 溶菌酶 逆转录 聚合酶链反应
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白细胞介素-2的基因克隆及其在啤酒酵母细胞中的表达 被引量:1
8
作者 张旭 黄秉仁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期274-280,共7页
用PCR方法从白细胞介素素-2(IL-2)cDNA全序列中扩增成熟肽基因片段,与酵母中间载体pSK43SB融合后,重组于酵母游离型表达载体YEpHc8,获得了高效表达,并对其糖基化进行了研究。
关键词 啤酒酵母 基因表达 白细胞介素 糖基化
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神经营养因子与帕金森病的治疗(综述) 被引量:1
9
作者 马雪梅 黄秉仁 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 1998年第4期249-253,共5页
关键词 神经营养因子 震颤性麻痹 多巴胺能 治疗
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大鼠高重复序列Rat(Hind Ⅲ)-1的染色体定位研究
10
作者 袁宝珠 有余 +2 位作者 李崇高 林海玉 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1993年第1期13-19,共7页
以分离、纯化的370bp大小的Rat(HindⅢ)-1高重复序列为探针,用Biotin-Ⅱ-dUTP进行缺口翻译标记;与Wistar大鼠骨髓间期细胞和中期染色体进行原位杂交;用生物索化的碱性磷酸酶检测杂交结果。大鼠核型中除X,Y,1,2,12和20号染色体外,其余染... 以分离、纯化的370bp大小的Rat(HindⅢ)-1高重复序列为探针,用Biotin-Ⅱ-dUTP进行缺口翻译标记;与Wistar大鼠骨髓间期细胞和中期染色体进行原位杂交;用生物索化的碱性磷酸酶检测杂交结果。大鼠核型中除X,Y,1,2,12和20号染色体外,其余染色体着丝粒处均有杂交颗粒,以10,5,7,11,13号染色体所占比例较多。间期细胞核中亦可见到排列不规则的杂交颗粒。核杂交效率高于染色体杂交效率。Rat(HindⅢ)-1可能是Wistar大鼠特有的、普遍分布于染色体着丝粒处的一类高重复序列。 展开更多
关键词 间期细胞 WISTAR大鼠 染色体定位 酶检测 体外 骨髓 重复序列 杂交 3号染色体 生物素
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EGF抑制BT325细胞生长的相关基因分离、克隆
11
作者 周明锐 任祖渊 +4 位作者 王欣 黄秉仁 苏长保 王任直 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期112-115,共4页
目的 寻找抑制胶质瘤细胞生长的新的相关基因。方法 应用mRNA差异显示技术与cDNAarray反向Northern杂交相结合 ,分离、克隆表皮生长因子 (EGF ,10 0ng/ml)作用后生长抑制的人脑多形性胶质母细胞瘤BT32 5细胞与对照组 (不加EGF)相比新... 目的 寻找抑制胶质瘤细胞生长的新的相关基因。方法 应用mRNA差异显示技术与cDNAarray反向Northern杂交相结合 ,分离、克隆表皮生长因子 (EGF ,10 0ng/ml)作用后生长抑制的人脑多形性胶质母细胞瘤BT32 5细胞与对照组 (不加EGF)相比新表达或表达明显上调的基因。结果克隆了 6个BT32 5细胞生长抑制后表达明显增高的EST (expressedsequencetag) ,其中 1个为新基因序列 ,另 5个分别与CGI 5 1、转醛缩酶 (Transaldolase、TAL)、核糖蛋白L35a、 4 0s核糖相关蛋白基因及BC 2蛋白mRNA有不同程度的同源性 ,其中功能分析提示TAL表达增加可诱导细胞凋亡。 6个EST均投递GenBank ,分别获得了接受号 :AW4 0 884 4~ 4 0 884 8。结论 所分离、克隆的基因可能与胶质瘤的生长抑制有关。 展开更多
关键词 胶质瘤 生长抑制 基因表达 新基因发现 表皮生长因子 脑肿瘤
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新型O-连接糖基化——O-GlcNAc
12
作者 张旭 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1994年第5期225-228,共4页
一种新型糖基化,单糖N-乙酰葡糖胺通过O-连接与蛋白质共价相连。随着研究的不断深入,这种新型糖基化受到愈来愈多的重视。本文主要论述它的发现,存在部位及可能的功能。
关键词 糖基化 糖蛋白
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表皮生长因子治疗兔角膜碱烧伤研究 被引量:5
13
作者 孟忻 王京 +2 位作者 唐少华 黄秉仁 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1997年第2期108-113,共6页
本试验制成兔角膜碱烧伤模型,应用重组表皮生长因子(rhEGF)滴眼剂对碱烧伤后的兔角膜溃疡创面进行治疗。63只纯种新西兰白兔分为7组,每组9只,其中5组为治疗组,另2组为对照组,治疗组分别用每毫升0.5,5,20,5... 本试验制成兔角膜碱烧伤模型,应用重组表皮生长因子(rhEGF)滴眼剂对碱烧伤后的兔角膜溃疡创面进行治疗。63只纯种新西兰白兔分为7组,每组9只,其中5组为治疗组,另2组为对照组,治疗组分别用每毫升0.5,5,20,50和100μg表皮生长因子滴眼剂滴眼,对照组分别用纤维结合蛋白和氯霉素滴眼。伤后24,48,72,96及120h裂隙灯荧光素染色,照像观察溃疡面积,经计算机图像处理,计算。结果显示5组治疗组创面愈合时间明显短于对照组,(P<0.05)。提示EGF对角膜碱烧伤后的溃疡面愈合有促进作用。 展开更多
关键词 表皮生长因子 角膜碱烧伤 治疗方法 疗效 创面愈合时间 EGF 组织学检查
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