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简并PCR技术在疾病检测中的应用
1
作者 刘敏 程淮 +2 位作者 蔡欢嫦 张贺伟 任静强 《生物技术进展》 2024年第4期545-554,共10页
普通PCR引物对目的基因扩增的单一特异性,限制了其在临床疾病检测中的通用性范围,而多重PCR需要避免若干引物对之间二级结构的干扰,应用同样受到一定的限制。简并PCR技术中简并性引物是基于基因保守区域的分析并结合简并碱基而设计,可... 普通PCR引物对目的基因扩增的单一特异性,限制了其在临床疾病检测中的通用性范围,而多重PCR需要避免若干引物对之间二级结构的干扰,应用同样受到一定的限制。简并PCR技术中简并性引物是基于基因保守区域的分析并结合简并碱基而设计,可以检测出高度相似的靶基因,具有高效性、灵敏性、特异性和低成本的特点,目前已被广泛应用于多个领域。综述了简并PCR技术在临床、食品安全、动植物疫病、寄生虫、水产养殖等领域疾病检测中的应用,并对其优缺点进行了讨论,以期为简并PCR的进一步发展以及在其他领域的应用提供参考和指导。 展开更多
关键词 PCR技术 简并PCR 简并性引物 疾病检测
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基于巨细胞病毒启动子的三独立表达系统载体的构建和应用
2
作者 张华韵 蔡欢嫦 任静强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1257-1262,共6页
利用巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子,以pUC57质粒为骨架,设计了一种多启动子的三独立表达框载体pCMV-3MCS。为验证所构建的质粒系统,在3个表达框中依次插入绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、红色荧光蛋... 利用巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子,以pUC57质粒为骨架,设计了一种多启动子的三独立表达框载体pCMV-3MCS。为验证所构建的质粒系统,在3个表达框中依次插入绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、红色荧光蛋白(mCherry)、蓝色荧光蛋白(blue fluorescent protein,BFP),转染293细胞后,在荧光显微镜下可观察到明显的绿、红、蓝三色荧光。为更广泛的应用所设计的表达系统,将犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)的N、P和L基因依次插入表达框中,与携带EGFP的病毒mini基因组(EGFP反向插入mini基因组)共转染后,可观察到明显的荧光。结果表明,利用pCMV-3MCS载体可以使N、P、L蛋白通过单质粒转染实现各自蛋白表达,可以容纳近10 kb的外源基因插入,且功能不受影响。这为多质粒共转染转变为单质粒转染提供参考,也为进一步提高副黏病毒的拯救效率提供新的思路。 展开更多
关键词 独立表达系统 荧光蛋白 负链RNA病毒 启动子
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肿瘤坏死因子相关蛋白6缺失减缓CCl_(4)诱发的小鼠肝脏纤维化进程
3
作者 蔡欢嫦 周丹茹 +3 位作者 史天静 尹亚军 张大伟 张瑾 《基础医学与临床》 2021年第12期1736-1741,共6页
目的探讨补体Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在肝病发生发展中的作用及其可能机制。方法四氯化碳灌胃法构建小鼠肝纤维化模型,比较野生型(CTRP6^(+/+))和敲除型(CTRP6^(-/-))小鼠肝损伤后的病理和生化指标差异;RT-qPCR检测纤维化标... 目的探讨补体Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在肝病发生发展中的作用及其可能机制。方法四氯化碳灌胃法构建小鼠肝纤维化模型,比较野生型(CTRP6^(+/+))和敲除型(CTRP6^(-/-))小鼠肝损伤后的病理和生化指标差异;RT-qPCR检测纤维化标志基因(Acta2、Col1a1、Mmp2、TGF-β和TNF-α)和细胞增殖标志基因(Cyclin D、Cyclin E和CDK6)的表达水平。结果与CTRP6^(+/+)小鼠相比,CTRP6^(-/-)小鼠肝细胞表现为轻度的坏死、疏松和肿胀等病变,且肝内超氧化物歧化酶(SOD)活力升高(P<0.01)、丙二醛(MDA)含量降低(P<0.01);CTRP6^(-/-)小鼠肝脏纤维化和细胞增殖标志基因表达显著低于CTRP6^(+/+)小鼠。结论CTRP6基因缺失减缓了CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化进程,作用机制可能是敲除CTRP6影响了肝细胞的增殖。 展开更多
关键词 补体Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6) 肝纤维化 四氯化碳 基因表达
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