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血清sPD-1和sPD-L1对类风湿关节炎的诊断价值及其与疾病活动度的相关性 被引量：6
1
作者 秦龙燕 罗英亮 +4 位作者 刘俊 李培霆 蒙富雪 曾家顺 李龙 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第7期805-811,共7页
目的探讨可溶性程序性死亡受体1(sPD-1)和可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)对类风湿关节炎(RA)的诊断价值及其与患者疾病活动度的相关性。方法100例RA患者据RA疾病活动评分(DAS28-3)分为缓解期组(n=50,DAS28-3<2.6分)和活动期组(n=50,D... 目的探讨可溶性程序性死亡受体1(sPD-1)和可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)对类风湿关节炎(RA)的诊断价值及其与患者疾病活动度的相关性。方法100例RA患者据RA疾病活动评分(DAS28-3)分为缓解期组(n=50,DAS28-3<2.6分)和活动期组(n=50,DAS28-3≥2.6分)、同时选取健康体检者50例作为正常对照组,采集2组RA患者入院次日和正常对照组受检者体检当日清晨空腹外周静脉血,采用酶联免疫法(ELISA)检测3组受试者血清sPD-1和sPD-L1表达,采用全自动血液细胞分析仪和全自动血沉分析仪分别检测3组受试者全血白细胞(WBC)计数和血沉(ESR),采用全自动生化分析仪检测3组受试者血清类风湿因子(RF)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及血清肌酐(SCr)水平,采用全自动电化学发光分析仪检测3组受试者血清C反应蛋白(CRP);采用Pearson相关系数分析RA患者血清sPD-1、sPD-L1与ESR、CRP、DAS28-3的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC)来评估sPD-1、sPD-L1对RA的诊断价值及疾病活动度的预测价值。结果RA患者血清sPD-1水平明显高于正常对照组,其中活动期组高于缓解期组,差异均有统计学意义(P<0.05);RA患者血清sPD-1分别与ESR(r=0.743,P<0.001)、CRP(r=0.672,P<0.001)、DAS28-3(r=0.946,P<0.001)均呈正相关;ROC结果显示,sPD-1对RA的诊断价值最大,AUC为0.904、最佳截断值为305.56μg/L,RF的诊断价值次之,2项指标与抗CCP抗体比较差异均有统计学意义(P<0.001);sPD-1对RA病情活动度的预测价值最高,AUC为0.974、最佳截断值为370.75μg/L,抗CCP抗体的预测价值次之,2项指标与RF比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清sPD-1可作为一种新的RA血清学辅助诊断指标和预测病情活动的评估指标。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 诊断 负性协同信号分子 可溶性程序性死亡蛋白1 可溶性程序性死亡配体1 疾病活动度 相关性
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低温缺氧/复氧后大鼠心肌成纤维细胞对心肌H9c2细胞间通讯的影响
2
作者 佟睿 高鸿 +5 位作者 安丽 易菁 曹莹 蒙富雪 吴学艳 马艳燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期1086-1091,共6页
目的观察低温缺氧/复氧(hypothermia hypoxia/reoxygen,H/R)后大鼠心肌成纤维细胞(rat cardiac fibroblasts,RCFs)对心肌H9c2细胞间通讯的影响并探讨其可能机制。方法将RCFs细胞与H9c2细胞以2:1数量比Transwell共培养后随机分为6组。其... 目的观察低温缺氧/复氧(hypothermia hypoxia/reoxygen,H/R)后大鼠心肌成纤维细胞(rat cardiac fibroblasts,RCFs)对心肌H9c2细胞间通讯的影响并探讨其可能机制。方法将RCFs细胞与H9c2细胞以2:1数量比Transwell共培养后随机分为6组。其中T+AngⅡ组及H/R⁃T+AngⅡ组加入1.5 nmol/L AngⅡ,T+ARB组及H/R⁃T+ARB组加入1 nmol/L缬沙坦。T组、T+AngⅡ组及T+ARB组进行正常培养,H/R⁃T组、H/R⁃T+AngⅡ及H/R⁃T+ARB组进行H/R处理。检测各组培养液中AngⅡ含量;H9c2细胞Cx43、ERK1/2表达量及磷酸化及细胞间通讯情况。结果与T组相比,H/R⁃T组及T+AngⅡ组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平降低(P<0.05),细胞间通讯减弱(P<0.05);T+ARB组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平增高(P<0.05),细胞间通讯增强(P<0.05)。与H/R⁃T组相比,H/R⁃T+AngⅡ组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平降低(P<0.05),细胞间通讯减弱(P<0.05);H/R⁃T+ARB组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平增加(P<0.05),细胞间通讯增强(P<0.05)。结论H/R处理后,RCFs细胞分泌增多的AngⅡ可能通过抑制H9c2细胞MAPK/ERK通路下调Cx43表达,导致H9c2细胞间通讯减弱。 展开更多
关键词 低温缺氧/复氧 心肌成纤维细胞 H9C2细胞 缝隙连接蛋白43 细胞间通讯
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黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因克隆与原核表达 被引量：2
3
作者 周静 赵雪 +6 位作者 夏雪 王赟 蒙富雪 黄江涛 郭婷 曾柱 胡祖权 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期3054-3059,共6页
根据NCBI数据库中的黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因序列设计特异引物,以黄曲霉菌总RNA逆转录获得的c DNA为模板,PCR扩增目的基因后分别克隆到p GEX-6p-1和p ET-22b原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。重组大肠杆菌经IPTG... 根据NCBI数据库中的黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因序列设计特异引物,以黄曲霉菌总RNA逆转录获得的c DNA为模板,PCR扩增目的基因后分别克隆到p GEX-6p-1和p ET-22b原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。重组大肠杆菌经IPTG诱导表达后超声波破碎提取可溶性蛋白,SDS-PAGE电泳和Western杂交检测表达产物,结果表明GST-AFLMP1和AFLMP1-His融合蛋白能够在大肠杆菌中大量可溶性表达,可分别作为制备AFLMP1特异抗体的免疫抗原和筛选抗原。 展开更多
关键词 黄曲霉 细胞壁蛋白 基因克隆 可溶性表达
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不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞对心肌细胞损伤的影响
4
作者 吴学艳 高鸿 +7 位作者 蒙富雪 牛振英 冯玉蓉 王贵龙 曹莹 易菁 佟睿 安丽 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期176-180,共5页
目的:评价不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞(RCF)对心肌细胞损伤和细胞间偶联的影响。方法:体外培养RCF,采用随机数字表方法分为3组(n=12):密度0.5×10^(5)个/ml组(T 0.5组)、密度为1.0×10^(5)个/ml组(T_(1.0)组)和密度... 目的:评价不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞(RCF)对心肌细胞损伤和细胞间偶联的影响。方法:体外培养RCF,采用随机数字表方法分为3组(n=12):密度0.5×10^(5)个/ml组(T 0.5组)、密度为1.0×10^(5)个/ml组(T_(1.0)组)和密度为2.0×10^(5)个/ml组(T_(2.0)组)。3组置于缺氧装置中,以5 L/min的速度持续吹入95%N 2+5%CO_(2)15 min进行缺氧处理,然后置入4℃冰箱培养1 h进行低温处理;培养完成后,置于37℃、含95%空气+5%CO_(2)培养箱中复氧4 h。上述处理结束后,3组分别与相同密度(1.0×10^(5)个/ml)的心肌细胞采用Transwell小室间接共培养16 h,心肌细胞接种于Transwell小室下层,RCF接种于Transwell小室上层。共培养结束后,收集心肌细胞,采用CCK8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)mRNA的表达,Western blot法检测Cx43及磷酸化Cx43(p-Cx43)的表达。结果:与T 0.5组相比,T_(1.0)组和T_(2.0)组心肌细胞活力、细胞凋亡率、Cx43、p-Cx43及Cx43 mRNA表达水平降低(P<0.01);与T_(1.0)组相比,T_(2.0)组心肌细胞活力、细胞凋亡率、Cx43和p-Cx43表达水平降低(P<0.01),心肌细胞Cx43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:低温缺氧复氧RCF在一定范围内呈密度依赖性地诱导心肌细胞损伤,其机制可能与下调Cx43的表达,降低Cx43的活性有关。 展开更多
关键词 低温 人工 低氧 成纤维细胞 肌细胞 心脏 连接蛋白类43
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瑞香素对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响及其与内质网应激的关系
5
作者 敖琴 刘俊 +5 位作者 胡欢 李培霆 秦龙燕 蒙富雪 李龙 曾家顺 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第7期759-765,共7页
目的探讨瑞香素(DAP)对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡的影响及其与内质网应激(ERS)的关系。方法取对数增长期人RA-FLS细胞,分别用0、10、20、30、40、50、60及70 mg/L DAP处理24 h,采用细胞增殖计数试剂盒(CCK-8)检测RA-FL... 目的探讨瑞香素(DAP)对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡的影响及其与内质网应激(ERS)的关系。方法取对数增长期人RA-FLS细胞,分别用0、10、20、30、40、50、60及70 mg/L DAP处理24 h,采用细胞增殖计数试剂盒(CCK-8)检测RA-FLS细胞存活率;选择0、20、40及60 mg/L DAP处理RA-FLS细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用细胞免疫荧光方法检测0和20 mg/L DAP组RA-FLS中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酰化-PERK(p-PERK)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)蛋白表达;采用Western blot方法检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、激活转录因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase-12)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与0 mg/L DAP组相比,人RA-FLS细胞增殖活性随DAP浓度增加而降低(P<0.05),细胞凋亡率随DAP浓度增加而增大(P<0.05);20 mg/L DAP组人RA-FLS细胞中PERK、GRP78及Caspase-12荧光强度高于0 mg/L DAP组;与0 mg/L DAP组比较,20、40及60 mg/L DAP组人RA-FLS细胞PERK、p-PERK、GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表达均增加(P<0.05),但Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论DAP可抑制人RA-FLS细胞增殖并促进细胞凋亡发生,其机制可能与ERS的激活有关。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 细胞增殖 细胞凋亡 瑞香素 内质网应激 滑膜成纤维细胞
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不同密度大鼠成纤维细胞对心肌细胞Cx43及细胞活力的影响 被引量：1
6
作者 吴学艳 高鸿 +8 位作者 蒙富雪 冯玉蓉 牛振瑛 王贵龙 曹莹 易菁 佟睿 安丽 邰胜燕 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1523-1527,共5页
目的评价不同密度大鼠成纤维细胞对心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)及细胞活力的影响。方法将心肌细胞与成纤维细胞进行Transwell小室共培养,心肌细胞接种于Transwell小室下层,成纤维细胞分别接种于Transwell小室上层,采用随机数字表法分... 目的评价不同密度大鼠成纤维细胞对心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)及细胞活力的影响。方法将心肌细胞与成纤维细胞进行Transwell小室共培养,心肌细胞接种于Transwell小室下层,成纤维细胞分别接种于Transwell小室上层,采用随机数字表法分为3组(n=12):成纤维细胞密度0.5×10^(5)个/ml组(C_(0.5)组)、成纤维细胞密度为1×10^(5)个/ml组(C_(1)组)和成纤维细胞密度为2×10^(5)个/ml组(C_(2)组),3组心肌细胞密度均为1×10^(5)个/ml。3组均共培养20 h。培养结束后,收集心肌细胞,采用CCK8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测凋亡率,采用实时定量PCR法检测Cx43 mRNA表达,采用Western blot法检测Cx43及磷酸化(p-Cx43)表达。结果3组心肌细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与C_(0.5)组比较,C_(1)组心肌细胞Cx43及其mRNA、p-Cx43表达上调,C_(2)组心肌细胞活力升高,Cx43及其mRNA、p-Cx43表达上调(P<0.05);与C_(1)组比较,C_(2)组心肌细胞活力升高,Cx43及其mRNA、p-Cx43表达上调(P<0.05)。结论大鼠成纤维细胞在一定范围内呈密度依赖性上调心肌细胞Cx43表达和活性,增强细胞活力。 展开更多
关键词 成纤维细胞 肌细胞 心脏 连接蛋白类43
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未成熟树突状细胞与成熟树突状细胞的细胞骨架调控相关基因表达的差异分析 被引量：3
7
作者 蒙富雪 董蓉 +8 位作者 吴翠芳 谭诚 胡祖权 刘丽娜 邱伟 王赟 周静 吴宁 曾柱 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期3252-3261,共10页
分析未成熟树突状细胞（immature dendritic cells,im DCs）向成熟的树突状细胞（mature dendritic cells,m DCs）分化的过程中,细胞骨架的调控相关基因及信号通路的表达变化,为进一步理解不同分化阶段树突状细胞（dendritic cells,DCs... 分析未成熟树突状细胞（immature dendritic cells,im DCs）向成熟的树突状细胞（mature dendritic cells,m DCs）分化的过程中,细胞骨架的调控相关基因及信号通路的表达变化,为进一步理解不同分化阶段树突状细胞（dendritic cells,DCs）的生物物理学特性、迁移能力和免疫学相关功能的改变。利用CEO数据库获得经CD14^＋单核细胞（monocytos,monos）诱导而成的im DCs和m DCs的m RNA的表达数据（芯片编号：GSE15076）,通过R语言软件对原始数据进行处理,筛选差异表达基因（Log｜FC｜≥2,p〈0.05）,利用STRING online-工具对差异表达基因进一步筛选（可信度≥0.4）;Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络图（protein-protein interaction network,PPI）,通过Cluster ONE对筛选后的差异表达基因进行聚类分析,筛选功能相关性密切的差异表达基因,并利用DAVID在线分析进一步进行GO分析和KEGG信号通路分析。m DCs相对于im DCs差异表达的基因共3 351个,上调基因1 801个,下调基因1 550个,其中C-C趋化因子受体活性、G-蛋白偶联的嘌呤核苷酸受体活性和异源三聚体G蛋白复合物等与细胞骨架调控密切相关。主要涉及的信号通路包括趋化因子/趋化因子受体信号通路、Rap1信号通路、Jak-STAT信号通路和PI3K-Akt信号通路等,其中的相关基因与细胞骨架的调控关系密切。这对进一步深入理解DCs的生物物理学特性、迁移能力和免疫学功能有一定的帮助。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 成熟树突状细胞 细胞骨架 生物信息学 基因芯片分析
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脉管流体剪切力对未成熟树突状细胞免疫功能的影响及机制研究
8
作者 余鹏 董蓉 +6 位作者 吴翠芳 蒙富雪 刘鲜梅 陈晋 胡祖权 王赟 曾柱 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期194-194,共1页
目的未成熟树突状细胞(immature DCs,imDCs)功能状态与机体免疫反应的启动密切相关,其在外周组织中并始终受到流体剪切力(Fluid Shear Stress,FSS)的作用,但FSS对其免疫功能的影响尚不得知。本课题研究FSS对imDCs免疫学功能的影响及潜... 目的未成熟树突状细胞(immature DCs,imDCs)功能状态与机体免疫反应的启动密切相关,其在外周组织中并始终受到流体剪切力(Fluid Shear Stress,FSS)的作用,但FSS对其免疫功能的影响尚不得知。本课题研究FSS对imDCs免疫学功能的影响及潜在机制。方法利用椎板剪切系统对小鼠骨髓来源的imDCs施加FSS,分析处理前后imDCs的细胞形态。 展开更多
关键词 机体免疫反应 未成熟树突状细胞 流体剪切力 免疫学功能 外周组织 功能状态 免疫功能 小鼠骨髓
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