克隆牛过程中电融合条件对附植前胚胎发育的影响 被引量：6

1

作者 张利生 毕春明 +8 位作者 李劲松 吴昱琪 寇朝辉 姜岩 蒋满喜 吕自力 王小宁 孙青原 陈大元 《自然科学进展》 北大核心 2004年第5期581-584,共4页

实验比较了克隆牛过程中电融合条件的改善对附殖前胚胎发育的影响.电融合强度为140V/mm,10μs/次对的效率要较100V/mm,20μs/次和180V/mm,10μs/次时高,可以降低融合后重构胚死亡率,提高克隆牛囊胚发育率.施加直流电脉冲前先给予5V交流... 实验比较了克隆牛过程中电融合条件的改善对附殖前胚胎发育的影响.电融合强度为140V/mm,10μs/次对的效率要较100V/mm,20μs/次和180V/mm,10μs/次时高,可以降低融合后重构胚死亡率,提高克隆牛囊胚发育率.施加直流电脉冲前先给予5V交流电场预处理数秒钟,然后在电极之间通以两个直流脉冲(140 V/mm,10μs/次,间隔0.1 s)与不用交流电预处理对融合率和重构胚的发育率无显著差异.另外实验比较了甘露醇和山梨醇两种融合液对融合及重构胚发育的影响,结果表明囊胚发育率差异不显著,但山梨醇较甘露醇融合液更容易操作.实验生出的4头克隆牛存活至今. 展开更多

关键词 克隆牛 电融合 胚胎发育 核移植 卵母细胞

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牛卵母细胞不同时间的成熟培养可提高核移植效率 被引量：4

2

作者 毕春明 李劲松 +7 位作者 吴昱琪 张利生 寇朝辉 姜岩 蒋满喜 吕自力 孙青原 陈大元 《自然科学进展》 北大核心 2003年第9期997-1000,共4页

比较了成熟培养不同时间的卵母细胞的成熟率、去核率及用于核移植的效率,认为成熟培养21h的卵母细胞虽然有较高的成熟率,但不适于采用盲去法去核。成熟培养19h的卵母细胞核移植效率略高于成熟培养17h,因此认为采用盲去法去核操作大批卵... 比较了成熟培养不同时间的卵母细胞的成熟率、去核率及用于核移植的效率,认为成熟培养21h的卵母细胞虽然有较高的成熟率,但不适于采用盲去法去核。成熟培养19h的卵母细胞核移植效率略高于成熟培养17h,因此认为采用盲去法去核操作大批卵母细胞时,19h的体外成熟培养时间是比较适宜的。 展开更多

关键词 基因克隆 核移植 牛卵母细胞 成熟培养 成熟率 去核率 移植效率

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转移早期囊胚期细胞制备嵌合体鸡 被引量：1

3

作者 杜立新 李善刚 +2 位作者 蒋满喜 王慧 尹春光 《中国家禽》 北大核心 2001年第1期10-12,共3页

用显微注射方法将尼拉商品鸡鸡胚 X期细胞液注入同期海兰鸡的囊胚腔中，再经体外培养至出雏，获得尼拉—海兰嵌合体鸡，嵌合体率为 5％ (3/60)，出雏率为 15％ (9/60)。另一项实验是将受体鸡胚经过 600 rad60Co辐射处理后再注入供体细... 用显微注射方法将尼拉商品鸡鸡胚 X期细胞液注入同期海兰鸡的囊胚腔中，再经体外培养至出雏，获得尼拉—海兰嵌合体鸡，嵌合体率为 5％ (3/60)，出雏率为 15％ (9/60)。另一项实验是将受体鸡胚经过 600 rad60Co辐射处理后再注入供体细胞并体外培养至出雏，结果嵌合体率为 14.0％ (8/57)，孵化率为 15.8％ (9/57)，其中两只毛色嵌合体公鸡存活至今已经 8个月。嵌合体鸡的黑色羽毛可出现在多个部位，有两只鸡的腿部和喙的角质也出现黑色斑。嵌合体鸡血液 DNA具有供体鸡的特征带。本研究为进一步制备转基因鸡奠定了基础，也为鸡的发育生物学研究和遗传学研究提供了实验材料。 展开更多

关键词 鸡 嵌合体 体外培养 囊胚期细胞 显微注射法 转基因动物

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脂质体介导精子载体制备转基因鸡的研究 被引量：4

4

作者 杜立新 蒋满喜 《山东畜牧兽医》 2001年第1期1-2,共2页

借助于精子载体法将BluescriptⅡ及pGFP质粒用逆相蒸发法形成DNA—脂质体复合物 ,再用mDM mHis法对结合有该复合物的精子进行获能处理 ,以提高外源基因转移率及整合率。实验结果表明 。

关键词 脂质体包埋 精子载体 转基因鸡 精子获能 受精率 转移率

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剖宫产与体外授精技术在小鼠生物净化中的应用 被引量：6

5

作者 朱莲 孔彭成 +3 位作者 王美珊 陈学进 蒋满喜 崔立 《实验动物与比较医学》 CAS 2013年第3期218-221,共4页

目的采用剖宫取胎和体外受精对微生物级别达不到SPF级的小鼠进行生物净化。方法对于具有正常繁殖能力的小鼠品系，通过对阴道栓的检查和触诊确定剖宫产取胎时间，采用子宫摘除手术对小鼠进行剖宫产，取出仔鼠用SPF级受体母鼠代乳，观察... 目的采用剖宫取胎和体外受精对微生物级别达不到SPF级的小鼠进行生物净化。方法对于具有正常繁殖能力的小鼠品系，通过对阴道栓的检查和触诊确定剖宫产取胎时间，采用子宫摘除手术对小鼠进行剖宫产，取出仔鼠用SPF级受体母鼠代乳，观察代乳情况及代乳仔鼠成活率；对于繁殖力较差或者丧失繁殖能力的品系，采取辅助生殖的方式，采集小鼠精子和卵子，在HTF液中受精，培养3．5d后的胚胎移植到SPF级受体母鼠子宫内，待产仔。结果两种方式净化的小鼠断奶后进行微生物检测，均达到SPF级。结论对微生物级别达不到SPF级但不含垂直传播病原体的小鼠，采用两种方式可有效提高小鼠的微生物等级． 展开更多

关键词 剖宫产 体外受精 胚胎移植 生物净化

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人类种植前胚胎的染色体分析 被引量：3

6

作者 蒋满喜 于新艳 《国外医学（遗传学分册）》 2002年第2期84-87,共4页

核型分析是诊断人类胚胎染色体异常的常规方法 ,但是通过细胞遗传学方法对人类种植前胚胎进行染色体检测并不容易。因此分裂间期细胞核的荧光原位杂交 (FISH)就成为首选方法之一。体外受精 (IVF)种植前胚胎的 FISH和核型分析均表明 :胚... 核型分析是诊断人类胚胎染色体异常的常规方法 ,但是通过细胞遗传学方法对人类种植前胚胎进行染色体检测并不容易。因此分裂间期细胞核的荧光原位杂交 (FISH)就成为首选方法之一。体外受精 (IVF)种植前胚胎的 FISH和核型分析均表明 :胚胎的染色体异常率可高达 2 5 %～ 5 1%。FISH分析显示染色体异常最常见的情况是染色体嵌合 (2 2 %～ 2 4 % )和胚胎分裂紊乱 (7%～ 2 6 % )。虽然目前还不能应用以上方法对自然受精的胚胎进行检测 ,但是染色体嵌合以及胚胎分裂紊乱较高的发生率可以为我们合理的解释人类的月经周期自然妊娠率为什么如此之低 (2 5 % ) 。 展开更多

关键词 人类种植前胚胎 染色体异常 荧光原位杂交 核型分析

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21世纪畜牧业在提高人类生活水平中的作用 被引量：4

7

作者 In K.Han 蒋满喜 杜立新 《国外畜牧科技》 1999年第2期2-6,共5页

１９９６年世界人口为５７亿，预计２０２０年将会高达７９亿。人口的快速增长将会导致诸如营养不良和环境破坏等许多社会问题。全世界有９亿多人口因粮食总产量不足和农作物分配不均衡而导致营养不良。可利用的畜产品将对解决以上问题... １９９６年世界人口为５７亿，预计２０２０年将会高达７９亿。人口的快速增长将会导致诸如营养不良和环境破坏等许多社会问题。全世界有９亿多人口因粮食总产量不足和农作物分配不均衡而导致营养不良。可利用的畜产品将对解决以上问题起到关键性作用。本文主要回顾２０世... 展开更多

关键词 畜牧业 21世纪 生活水平

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人类胚胎干细胞研究进展 被引量：1

8

作者 安静 蒋满喜 杜立新 《国外医学（遗传学分册）》 2001年第6期298-301,共4页

人类胚胎干细胞 (ES)与其他哺乳动物的胚胎干细胞之间存在一定差异 ,且具有自身独特的特征。随着人类 ES细胞的研究进展 ,人类 ES细胞将在临床医学。

关键词 胚胎干(ES)细胞 原始生殖细胞 胚胎生殖(EG)细胞 内细胞团(ICM)细胞 研究

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转基因动物的原理与技术 被引量：1

9

作者 赵英会 杜立新 +1 位作者 蒋满喜 张念华 《莱阳农学院学报》 2002年第4期270-272,共3页

从细胞学、胚胎学和分子遗传学几个方面对转基因动物的原理与技术作以综述,并对其发展趋势略作概述。

关键词 转基因动物 原因 技术 发展趋势 综述

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人类胚胎干细胞与胚胎生殖细胞 被引量：1

10

作者 蒋满喜 安静 《国外医学（计划生育分册）》 2002年第2期100-103,共4页

胚胎干细胞(ES)是早期胚胎(桑椹胚,囊胚)或原始生殖细胞(PGCs)经体外分化抑制培养,在传代过程中筛选出来的具有发育全能性或多能性的细胞。这种细胞具有与早期胚胎相似的分化潜能和正常二倍体核型的特点,因此兼有早期胚胎卵裂球及体细... 胚胎干细胞(ES)是早期胚胎(桑椹胚,囊胚)或原始生殖细胞(PGCs)经体外分化抑制培养,在传代过程中筛选出来的具有发育全能性或多能性的细胞。这种细胞具有与早期胚胎相似的分化潜能和正常二倍体核型的特点,因此兼有早期胚胎卵裂球及体细胞的某些特性。在发育生物学、遗传学、生物工程、动物克隆、转基因动物中,具有广泛的应用价值。 展开更多

关键词 人类胚胎干细胞 胚胎生殖细胞 胚胎干细胞 畸胎瘤

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H1oo在哺乳动物胚胎发育及其基因组重编程中的作用

11

作者 蒋满喜 杨彩侠 陈大元 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第6期555-557,共3页

染色质结构可由转录抑制状态转变为转录激活状态,从而调节早期胚胎由母型基因控制转变为合子型基因控制。作为一种特殊类型的连接组蛋白——哺乳动物特异性连接组蛋白H1oo,其表达方式具有一定的时序性,但又与其他7种连接组蛋白亚型有所... 染色质结构可由转录抑制状态转变为转录激活状态,从而调节早期胚胎由母型基因控制转变为合子型基因控制。作为一种特殊类型的连接组蛋白——哺乳动物特异性连接组蛋白H1oo,其表达方式具有一定的时序性,但又与其他7种连接组蛋白亚型有所不同,H1oo不但能够在卵母细胞-胚胎发育转换过程中发挥功能,而且还可能在基因组重编程过程中起到关键性作用。分析研究卵母细胞特异性连接组蛋白,有助于认识染色质重构建、基因组重编程过程以及核移植的分子机制,而且可能对克隆效率的提高有所补益。 展开更多

关键词 H1oo 哺乳动物 胚胎发育 基因重组 特异性连接组蛋白 卵母细胞 染色质

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味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin在小鼠雌性生殖系统的表达 被引量：1

12

作者 王雪 蒋满喜 +6 位作者 马政文 王美珊 孔彭成 唐澜 陈学进 李和平 李峰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期39-46,共8页

为了检测味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin基因在雌性生殖系统的表达,探讨2种G蛋白在雌性生殖机能中可能发挥的作用及其在生殖医学方面的潜在应用。用RT-PCR和超敏ABC免疫组化方法,检测Gγ13和α-gustducin在6周龄间情期小鼠卵巢... 为了检测味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin基因在雌性生殖系统的表达,探讨2种G蛋白在雌性生殖机能中可能发挥的作用及其在生殖医学方面的潜在应用。用RT-PCR和超敏ABC免疫组化方法,检测Gγ13和α-gustducin在6周龄间情期小鼠卵巢、子宫、输卵管组织中的基因表达和蛋白分布。结果表明,在小鼠雌性生殖系统中均发现Gγ13和α-gustducin基因的转录子,免疫组化研究进一步证实了Gγ13和α-gustducin确实在小鼠卵巢颗粒黄体细胞、卵母细胞、子宫外膜、子宫内膜腺体、子宫肌层、输卵管浆膜和输卵管黏膜处存在阳性分布。本试验表明味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin在雌性小鼠生殖系统中广泛分布,预示着雌性生殖系统也可能对味觉物质进行感知,为进一步研究味觉受体在雌性生理机能中可能发挥的调控功能奠定初步的研究基础,同时也为味觉的细胞生物学研究提供新方向。 展开更多

关键词 Gγ13 α—gustducin 卵巢 子宫 输卵管 G蛋白

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一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系 被引量：1

13

作者 李敦高 蒋满喜 +1 位作者 陈学进 李和平 《实验动物与比较医学》 CAS 2012年第2期142-145,共4页

目的利用活体保种、精子冷冻技术及辅助生殖技术建立一套安全的综合性保种体系。方法以单侧睾丸摘除方法获得ICR、BDF1、C57BL／6J和GFP四种小鼠的附睾精子进行冷冻保存实验，术后恢复的公鼠继续用于自然繁育。如果无法自然繁育，则将... 目的利用活体保种、精子冷冻技术及辅助生殖技术建立一套安全的综合性保种体系。方法以单侧睾丸摘除方法获得ICR、BDF1、C57BL／6J和GFP四种小鼠的附睾精子进行冷冻保存实验，术后恢复的公鼠继续用于自然繁育。如果无法自然繁育，则将冻融精子用于体外受精（WF）。如果冻融精子仍无法受精获得后代，则需要借助卵胞质内单精子注射技术（ICSI）进行胚胎构建，胚胎移植，直至获得后代。结果单侧睾摘除的BDF1、C57BL／6J的公鼠可以继续繁育；不育的ICR和GFP小鼠的冻融精子IVF后，只有ICR小鼠可以得到正常的胚胎和子鼠；而以C57BL／6J为遗传背景的GFP小鼠，其冻融精子只有采用ICSI技术，才可以得到子代。结论精子冻融小鼠的遗传背景是影响IVF成功与否的关键性因素，同时还建立了一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系，既可以达到品系保存的目的，同时又可以最大限度地利用小鼠品系。 展开更多

关键词 小鼠 单侧睾丸摘除 体外受精 胞质内单精子注射 品系保存

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一种改良的小鼠附睾尾常温运输方法 被引量：1

14

作者 王美珊 孔彭成 +4 位作者 朱燕 朱莲 陈学进 李和平 蒋满喜 《实验动物与比较医学》 CAS 2014年第2期145-148,共4页

目的 探索常温条件下附睾尾运输的最佳条件,并消除培养液对常温运输可能存在的影响.方法 对附睾尾的运输方法进行了改良,同时比较了常温或4～8℃条件下,在20μ1或0 μ1培养液M2中,运输后精子的活力、受精能力及其胚胎发育能力.结果 结... 目的 探索常温条件下附睾尾运输的最佳条件,并消除培养液对常温运输可能存在的影响.方法 对附睾尾的运输方法进行了改良,同时比较了常温或4～8℃条件下,在20μ1或0 μ1培养液M2中,运输后精子的活力、受精能力及其胚胎发育能力.结果 结果表明,常温运输不加培养液的条件下,运输的附睾尾精子活动率和活力,均优于20 μl培养液中运输的附睾尾,但是稍差于4～8℃条件下20μ1M2培养液中运输的附睾尾.结论 无液体运输的方式更加适合于附睾尾的常温运输,同时该方法还可消除培养液对附睾精子可能存在的不良影响;常温附睾尾的运输对于小鼠资源库或者研究机构间珍贵小鼠品系的运输具有重要的应用价值. 展开更多

关键词 附睾尾 运输 精子活动率 精子活力 胚胎发育

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碱处理精子进行家兔ICSI介导转基因的初步研究 被引量：1

15

作者 周小梅 尹明茹 +4 位作者 姜伟华 蒋满喜 陈学进 李和平 李善刚 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第4期9-13,共5页

采用10 mmol/L NaOH碱处理家兔精子使精子破膜后,和外源基因共同孵育,然后通过ICSI技术导入卵母细胞。另设无碱处理无质粒孵育组和碱处理后精子无质粒孵育空白组,观察并比较胚胎的发育情况。结果:精子碱处理与质粒孵育对胚胎的发育无显... 采用10 mmol/L NaOH碱处理家兔精子使精子破膜后,和外源基因共同孵育,然后通过ICSI技术导入卵母细胞。另设无碱处理无质粒孵育组和碱处理后精子无质粒孵育空白组,观察并比较胚胎的发育情况。结果:精子碱处理与质粒孵育对胚胎的发育无显著影响(P>0.05),ICSI介导转基因后观察囊胚出现绿色荧光,占总囊胚数的34.78%,外源性DNA的转入率为19.51%。试验初步建立了用碱处理精子结合家兔ICSI的转基因方法。 展开更多

关键词 家兔 ICSI 转基因 碱处理

原文传递

卵胞质内单精子注射与转座子介导的转基因技术

16

作者 孔彭成 王美珊 +3 位作者 朱莲 李和平 蒋满喜 陈学进 《实验动物与比较医学》 CAS 2013年第4期319-323,共5页

通过卵胞质内单精子注射（ICSI）已经成为治疗人类不育症和小鼠生殖生物学研究的一种有效手段。而且IcsI介导的转基因作为一种动物转基因技术，仍然不够完善。但是相比传统的原核注射技术，该技术最大的优势是可以导入较大片段的外源基... 通过卵胞质内单精子注射（ICSI）已经成为治疗人类不育症和小鼠生殖生物学研究的一种有效手段。而且IcsI介导的转基因作为一种动物转基因技术，仍然不够完善。但是相比传统的原核注射技术，该技术最大的优势是可以导入较大片段的外源基因（比如人工酵母染色体YAC）。最近研究者们又发展了一种ICSI与转座子结合的转基因技术，能够高效地生产转基因后代，其效率几乎可以与慢病毒载体法相媲美。值得在转基因动物研究中加以推广和应用。 展开更多

关键词 卵胞质内单精子注射(ICSI) 转座子 转基因

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玻璃化冻融人卵子胞浆内单精子注射临床妊娠成功1例报道

17

作者 陈少轻 李森 +2 位作者 蒋满喜 陈南侨 欧湘红 《临床研究》 2017年第11期33-34,共2页

人卵子冷冻保存技术在辅助生殖技术（ART）中起着重要作用,近年,随着玻璃化冷冻技术和卵胞内单精子注射技术（ICSI）的发展,卵子的玻璃化冷冻技术已广泛应用于临床.相对于慢速冷冻法,玻璃化冷冻在减少卵子冷冻损伤方面更有优势,这是一... 人卵子冷冻保存技术在辅助生殖技术（ART）中起着重要作用,近年,随着玻璃化冷冻技术和卵胞内单精子注射技术（ICSI）的发展,卵子的玻璃化冷冻技术已广泛应用于临床.相对于慢速冷冻法,玻璃化冷冻在减少卵子冷冻损伤方面更有优势,这是一种有效预防不孕不育的方法. 展开更多

关键词 卵子 玻璃化冷冻 胞浆内单精子注射

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