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人LIM矿化蛋白-1重组腺病毒的成骨作用及其分子机制
1
作者 王秀利 崔福爱 +3 位作者 殷力 王义生 蒋林栋 李邓 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期452-455,共4页
目的 利用pAdEasy腺病毒载体系统构建人LIM矿化蛋白-1（LMP-1）重组腺病毒,检测其在体外培养大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）的促成骨作用并分析其分子机制.方法 应用聚合酶链反应（PCR）法扩增出人LMP-1全长基因,插入pShuttle-IRES-hrGFP-... 目的 利用pAdEasy腺病毒载体系统构建人LIM矿化蛋白-1（LMP-1）重组腺病毒,检测其在体外培养大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）的促成骨作用并分析其分子机制.方法 应用聚合酶链反应（PCR）法扩增出人LMP-1全长基因,插入pShuttle-IRES-hrGFP-1中构建成腺病毒穿梭质粒pS-LMP-1-GFP,转化DH5a大肠杆菌,挑选细菌单克隆进行酶切鉴定和DNA测序;通过pS-LMP-1-GFP与质粒pAdEasy-1在BJ5183细胞中同源重组,得到携带人LMP-1基因的重组腺病毒载体（pAdLMP-1-GFP）.经PacⅠ酶切暴露两侧长末端重复序列,脂质体介导线性化质粒转染AD293细胞进行包装得到重组腺病毒Ad-LMP-1-GFP.以腺病毒为载体,将 人LMP-1 基因体外转染于第3代大鼠BMSCs内,检测LMP-1基因在BMSCs的表达,分别观察转染后实验组与对照组碱性磷酸酶活性变化,Western blot检测骨钙素（OCN）和β-连环蛋白（β-catenin）的表达,评价LMP-1 基因的成骨能力及其分子机制.结果 成功获取人LMP-1基因,并包装成重组腺病毒.LMP-1基因能在BMSCs 中高效表达,转染后BMSCs的碱性磷酸酶活性增强,与对照组比较P=0.000,分别为0.096、0.116、0.118、0.119（0.110±0.011）和 0.045、0.057、0.056、0.054（0.053±0.005）;骨钙素的表达显著升高,与对照组比较P=0.001,分别为0.661、0.767、0.651（0.693±0.064）和0.177、0.290、0.222（0.229±0.050）;β-catenin的表达明显增强,与对照组比较P=0.002,分别为0.841、0.806、0.867（0.838±0.030）和0.185、0.236、0.266（0.229±0.040）.结论 成功利用pAdEasy系统构建人LMP-1重组腺病毒载体,包装获得重组腺病毒.Ad-LMP-1-GFP转染BMSCs后,LMP-1基因能促进BMSCs向成骨细胞分化,并且可能通过β-catenin信号分子发挥作用. 展开更多
关键词 LIM-1矿化蛋白 间充质干细胞 成骨活性 基因转染
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促进成骨与抑制成脂基因共转染NIH3T3成纤维细胞中的表达
2
作者 蒋林栋 李劲峰 +3 位作者 马源 李成 李月白 王义生 《中国实用医刊》 2016年第24期1-4,共4页
目的：检测降钙素基因相关肽基因（CGRP）和沉默过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPARγ）共转染NIH3T3成纤维细胞中的表达。方法培养 NIH3T3成纤维细胞，收集细胞随机分为五组，正常组：正常培养细胞，不做特殊处理，作为正常对照；空... 目的：检测降钙素基因相关肽基因（CGRP）和沉默过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPARγ）共转染NIH3T3成纤维细胞中的表达。方法培养 NIH3T3成纤维细胞，收集细胞随机分为五组，正常组：正常培养细胞，不做特殊处理，作为正常对照；空载体组：仅用空载体 pGFP-V-RS 质粒转染细胞，作为阴性对照组；CGRP 组：用重组载体 pGFP-V-RS-exCGRP 质粒转染细胞；siPPARγ组：用重组载体 pGFP-V-RS-siPPARγ质粒转染细胞；双基因组：用重组双基因载体 pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP 质粒转染细胞。电转染成功后，继续培养细胞48 h，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）与蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测各组细胞内 PPARγ、CGRP mRNA 与蛋白的表达。结果双基因组中 CGRP 基因呈高表达，明显高于正常组、空载体组、siPPARγ组，差异均有统计学意义（P ＜0.05）；与 CGRP 组中 CGRP 基因表达量相近，差异未见统计学意义（P ＞0.05）。双基因组细胞中 PPARγ基因呈低表达，明显低于正常组、空载体组、CGRP 组，差异均有统计学意义（P ＜0.05）；与 siPPARγ组细胞中 PPARγ基因表达量相似，差异未见统计学意义（P ＞0.05）。结论促进成骨基因和抑制成脂基因共转染 NIH3T3成纤维细胞，能够上调细胞中 CGRP 基因表达，同时下调 PPARγ基因表达。 展开更多
关键词 基因 转染 降钙素基因相关肽 过氧化物酶体增殖子活化受体-γ NIH3T3 成纤维细胞
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陶瓷对陶瓷全髋关节置换术治疗髋关节疾病
3
作者 吕本浩 蒋林栋 王义生 《河南医学研究》 CAS 2018年第2期203-205,共3页
目的观察陶瓷对陶瓷(COC)全髋关节置换术治疗髋关节疾病的效果。方法选取接受COC全髋关节置换术治疗的53例髋关节疾病患者,观察患者髋关节功能(Harris评分)和相关并发症发生情况。结果随访24~49个月,平均34.7个月。术前Harris评分为(27.... 目的观察陶瓷对陶瓷(COC)全髋关节置换术治疗髋关节疾病的效果。方法选取接受COC全髋关节置换术治疗的53例髋关节疾病患者,观察患者髋关节功能(Harris评分)和相关并发症发生情况。结果随访24~49个月,平均34.7个月。术前Harris评分为(27.48±11.76)分,低于末次随访的(92.66±3.69)分,差异有统计学意义(P<0.05)。髋关节Harris评分优57例,良10例,优良率为100%。术中、术后均未出现假体周围骨折,术后无切口延迟愈合或不愈合、切口感染、假体松动移位、关节脱位等并发症发生。1例术后出现术侧髋部肿胀伴术肢麻木,1例出现轻度关节异响,2例小腿肌间静脉血栓形成,给予患者对症处理后均好转。结论 COC全髋关节置换术治疗髋关节疾病的效果显著,安全性高。 展开更多
关键词 全髋关节置换术 陶瓷对陶瓷 并发症
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