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非小细胞肺癌血清标志蛋白HSP90α的鉴定及其临床意义 被引量：16
1
作者 黄凌云 徐安健 +4 位作者 蒋单懿 郝佳 谷俊朝 肖雪媛 何大澄 《国际外科学杂志》 2010年第1期24-28,共5页
目的证明HSP90α是否可以作为肺癌诊断的血清标志蛋白。方法利用SDS—PAGE和基质辅助解吸附时间飞行质谱（MALDI—TOF—MS），对具有不同转移能力的肺腺癌细胞系CL1-0（低转移）和CL1-5（高转移）的培养基上清进行分析，并对已鉴定的候... 目的证明HSP90α是否可以作为肺癌诊断的血清标志蛋白。方法利用SDS—PAGE和基质辅助解吸附时间飞行质谱（MALDI—TOF—MS），对具有不同转移能力的肺腺癌细胞系CL1-0（低转移）和CL1-5（高转移）的培养基上清进行分析，并对已鉴定的候选标志蛋白通过免疫印迹方法进行确定。此外，利用酶联免疫吸附技术（ELISA）对141例肺癌、37例良性肺病患者、及46例健康人血清对候选蛋白进行了进一步的分析。结果HSP90α在CL1—5的培养基中高表达，进一步发现HSP90α在非小细胞肺癌的血清中特异性升高。当ROC曲线（receiver operating characteristic，ROC）临界值取为0．535时，HSP90α能区分肺癌以及良性肺病患者和健康人，其敏感性为0．817，特异性为0．919，总体精确性为80．14％。结论HSP90α有望成为区分肺癌、良性肺病患者和健康人以及肺癌分期诊断的血清标志蛋白。 展开更多
关键词 HSP90Α CL1-0 CL1—5 分泌蛋白质组 肿瘤转移
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人组氨酸磷酸酶PHP14的原核表达及其体外互作蛋白的研究 被引量：3
2
作者 徐安健 蒋单懿 +3 位作者 黄凌云 谷俊朝 肖雪媛 何大澄 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期7-11,共5页
目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sep... 目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒进行亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳确定融合蛋白的表达。进行GST-Pulldown实验,寻找体外与PHP14相互作用的蛋白,并进行质谱鉴定。结果:在大肠杆菌BL21中成功了表达出了PHP14的可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose4B凝胶颗粒纯化后,获得了纯化的GST-PHP14融合蛋白,GST-Pulldown实验和质谱鉴定结果发现PHP14与HSP90在体外存在相互作用。结论:实现了PHP14的原核表达和纯化,发现PHP14与HSP90在体外可能存在相互作用。 展开更多
关键词 PHP14 HSP90 原核表达和纯化 体外相互作用
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mRNA差异显示技术的研究进展
3
作者 蒋单懿 《江苏教育学院学报（自然科学版）》 2006年第3期41-44,共4页
真核生物mRNA差异显示技术自1992年建立以来,经过不断改进与完善,已经成为分子生物学领域的重要技术平台之一,为基因的差异表达及表达基因的克隆研究提供了强有力的证据.本文主要对mRNA差异显示技术原理及其中的引物设计,优化PCR参数,差... 真核生物mRNA差异显示技术自1992年建立以来,经过不断改进与完善,已经成为分子生物学领域的重要技术平台之一,为基因的差异表达及表达基因的克隆研究提供了强有力的证据.本文主要对mRNA差异显示技术原理及其中的引物设计,优化PCR参数,差异cDNA的显示、回收纯化、鉴定、分析等方面进行了概述. 展开更多
关键词 mRNA差异显示技术:引物的设计 差异cDNA
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