川楝素水解与氢化还原产物的结构鉴定及其对肉毒毒素解毒作用研究 被引量：5

1

作者 李海涛 董铭心 +3 位作者 朱卫国 余云舟 舒国欣 戴秋云 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期376-380,共5页

目的鉴定川楝素水解及氢化还原产物的结构,并测定其对肉毒毒素的解毒效果。方法用一定比例的稀氨水水解川楝素,用氢化铝锂还原川楝素的环氧键,然后用高效液相色谱纯化各产物,用质谱、核磁共振氢谱鉴定产物结构;解毒活性测定中,小鼠用2L... 目的鉴定川楝素水解及氢化还原产物的结构,并测定其对肉毒毒素的解毒效果。方法用一定比例的稀氨水水解川楝素,用氢化铝锂还原川楝素的环氧键,然后用高效液相色谱纯化各产物,用质谱、核磁共振氢谱鉴定产物结构;解毒活性测定中,小鼠用2LD50的A型肉毒毒素攻毒,腹腔注射不同剂量的川楝素水解及氢化产物后,4 d内观察小鼠死亡情况。结果与结论除全脱乙酰基产物外,获得2个川楝素单脱乙酰基产物及全脱乙酰基并环氧键还原的新产物,这些产物的毒性及对肉毒毒素的解毒活性降低。该工作为川楝素的体内药代产物鉴定及应用奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 川楝素 水解作用 氢化还原 A型肉毒毒素 解毒

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芋螺多肽conantokins及其类似物对小鼠吗啡戒断症状的抑制作用 被引量：3

2

作者 魏娟娟 董铭心 +2 位作者 肖彩 姜凤超 戴秋云 《中国药物依赖性杂志》 CAS CSCD 2006年第2期20-24,共5页

目的:观察及评价NMDA受体抑制剂芋螺多肽conantokins及其类似物对吗啡依赖小鼠催促戒断症状的抑制作用。方法:采用剂量递增法皮下注射吗啡7d,建立吗啡依赖小鼠模型。观察conantokin及类似物con-G(2.5,5,10,15nmol·kg-1,icv),con-G[... 目的:观察及评价NMDA受体抑制剂芋螺多肽conantokins及其类似物对吗啡依赖小鼠催促戒断症状的抑制作用。方法:采用剂量递增法皮下注射吗啡7d,建立吗啡依赖小鼠模型。观察conantokin及类似物con-G(2.5,5,10,15nmol·kg-1,icv),con-G[S16Y]〗(15nmol·kg-1,icv),con-R(1-17)(15,30nmol·kg-1,icv),对照药美金胺(46.3μmol·kg-1,ip)以及艾芬地尔(1.25μmo·lkg-1,icv;25μmol·kg-1,ip)对吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断的跳跃次数及体重的影响。结果:与吗啡依赖组相比,icv15nmo·lkg-1con-G使吗啡依赖小鼠平均跳跃次数减少89.0%,并呈剂量依赖性(2.5-15nmo·lkg-1);icv15nmol·kg-1con-G[S16Y]〗可完全抑制吗啡依赖小鼠戒断跳跃。con-R(1-17)(15-30nmol·kg-1,icv)使吗啡依赖小鼠平均跳跃次数仅减少40.2%-58.3%。结论:con-G、con-G[S16Y]〗和con-R(1-17)对抑制小鼠的戒断症状非常有效。相对于con-R(1-17),con-G和con-G[S16Y]〗对小鼠的戒断症状的抑制作用更强,这是由于con-G、con-G[S16Y]〗对NMDA受体NR2B亚基的选择性更高。Conantokins及其类似物在抑制吗啡依赖方面很有潜力。 展开更多

关键词 conantokins NMDA受体抑制剂 NR2B亚基 吗啡依赖 纳洛酮 戒断症状

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流感病毒改造新策略及其应用 被引量：1

3

作者 郭茜亚 陈积 董铭心 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第2期267-280,共14页

流感病毒有着极强的变异性和传播性,常在全球范围内引起季节性的流感爆发。流感病毒的基因组序列、蛋白结构与功能、病毒的包装机制等环节研究相对清楚,也是一种重要的模式病毒,用于条件控制基因元件的发现和确证,构建智能响应型病毒等... 流感病毒有着极强的变异性和传播性,常在全球范围内引起季节性的流感爆发。流感病毒的基因组序列、蛋白结构与功能、病毒的包装机制等环节研究相对清楚,也是一种重要的模式病毒,用于条件控制基因元件的发现和确证,构建智能响应型病毒等。随着反向遗传学与合成生物学的发展,通过基因工程改造的流感病毒能更好地控制病毒复制来提高疫苗的安全性,以及诱发机体产生强烈的免疫反应,在肿瘤免疫治疗领域引发广泛关注。本文描述了蛋白质水解靶向嵌合病毒、条件复制型流感减毒活病毒和高干扰素敏感病毒等三种新型减毒流感病毒改造策略,并对编码过早终止密码子的嵌合抗原肽的流感病毒、与PD-L1或CTLA4免疫检查点重组的流感病毒、截短的NS1片段表达GM-CSF的流感病毒分别对黑色素瘤、肝癌的溶瘤作用进行评述。未来,将通过创新性地运用不同策略、不同病毒来构建减毒活疫苗和溶瘤病毒,以便在临床上获得更加安全有效的治疗手段。 展开更多

关键词 流感病毒 基因元件 减毒策略 条件响应 减毒活疫苗 溶瘤病毒

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抗乙型肝炎病毒药物的研究进展 被引量：3

4

作者 董铭心 赵国明 李松 《国外医学（药学分册）》 2004年第5期296-299,共4页

抗病毒治疗是慢性乙型病毒性肝炎治疗的核心问题。本文对近年来抗乙型肝炎病毒药物的结构类型、作用机制、活性评估及临床应用进行了综述 ,并展望了应用开发的前景。

关键词 乙型肝炎 抗乙型肝炎病毒药物 核苷类似物 免疫调节剂 二氢嘧啶类化合物

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肉毒毒素抑制剂的研究进展 被引量：3

5

作者 董铭心 戴秋云 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期301-303,共3页

肉毒毒素(BoNT)是目前已知的毒性最强的生物毒素,肉毒毒素中毒的抗毒素治疗只对未进入神经细胞的毒素有效,而对中毒时间较长、轻链已进入神经系统者无效。近10年来,随着肉毒毒素晶体结构的测定、中毒机理的深入研究,以及体外高通量评价... 肉毒毒素(BoNT)是目前已知的毒性最强的生物毒素,肉毒毒素中毒的抗毒素治疗只对未进入神经细胞的毒素有效,而对中毒时间较长、轻链已进入神经系统者无效。近10年来,随着肉毒毒素晶体结构的测定、中毒机理的深入研究,以及体外高通量评价模型的建立,对小分子肉毒毒素抑制剂的研究取得了显著进展。从肉毒毒素中毒机理、结构特征出发,简要综述了肉毒毒素抑制剂的研究进展。 展开更多

关键词 肉毒毒素 作用机理 结构 抑制剂

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基于酰胺甲基化策略的GluA2内吞阻滞剂环肽的合成及评价

6

作者 陈小雨 董铭心 《中南药学》 CAS 2024年第8期1986-1992,共7页

目的在GluA2-3Y结构基础上通过环化和N-甲基化策略设计甲基化环肽,提高化合物与靶标的亲和力、神经保护活性及稳定性。方法基于Fmoc固相合成法合成目标多肽,经RP-HPLC对多肽进行分析和纯化。采用表面等离子共振技术测试多肽与BRAG2蛋白... 目的在GluA2-3Y结构基础上通过环化和N-甲基化策略设计甲基化环肽,提高化合物与靶标的亲和力、神经保护活性及稳定性。方法基于Fmoc固相合成法合成目标多肽,经RP-HPLC对多肽进行分析和纯化。采用表面等离子共振技术测试多肽与BRAG2蛋白的亲和力。通过CCK8法检测多肽对HT22细胞的毒性。构建氧糖剥夺(OGD)模型评价多肽的体外神经保护活性。通过HPLC检测多肽的血浆稳定性。结果基于Fmoc固相合成法共设计合成14条多肽,经RP-HPLC分析纯度均在90%以上。表面等离子共振结果显示:环肽c10c-Y-5表现出与对照药Ac-3Y相近的亲和力,解离常数KD为0.68μmol·L^(-1),与BRAG2蛋白有较强的亲和力。CCK8法测试多肽的毒性结果显示:10μmol·L^(-1)多肽在HT22细胞上基本没有毒性。环肽在OGD模型上对HT22细胞的神经保护活性结果显示:与模型组相比,环肽c10c-Y-2在1μmol·L^(-1)和10μmol·L^(-1)下有神经保护活性(P<0.05);环肽c10c-Y-5在3个浓度下有神经保护活性(P<0.05);环肽c10c-Y5G6在10μmol·L^(-1)下有神经保护活性(P<0.01)。环肽的血浆稳定性实验结果显示:c10c-Y-2和c10c-Y-5经环化和N-甲基化修饰后,与线性肽相比稳定性有大幅度提高。结论本研究应用SPR技术和多肽在OGD模型上对HT22细胞的神经保护活性评价手段,筛选出了具有潜在神经保护活性且增强了血浆稳定性的环肽c10c-Y-2和c10c-Y-5,可为多肽药物的修饰改造提供思路和依据。 展开更多

关键词 N-甲基化修饰 环化 HT22细胞 神经保护 血浆稳定性

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新型镇痛多肽Eb1.6的含量及有关物质检测 被引量：2

7

作者 徐艳 余硕 +3 位作者 董铭心 周尚民 姬泓巍 戴秋云 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2166-2170,共5页

目的:建立一种适用于新型alpha芋螺镇痛多肽Eb1.6含量及有关物质的分析方法,以及其水分和乙酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定Eb1.6原料药中Eb1.6的含量。使用Zorbax XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为含0... 目的:建立一种适用于新型alpha芋螺镇痛多肽Eb1.6含量及有关物质的分析方法,以及其水分和乙酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定Eb1.6原料药中Eb1.6的含量。使用Zorbax XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为含0.1%三氟乙酸(TFA)的水,流动相B为含0.1%TFA的乙腈,梯度洗脱,流速1 m L·min-1,检测波长214 nm,柱温25℃;采用卡尔菲休库仑滴定法及高效液相色谱法测定样品中水分及乙酸含量。结果:3批Eb1.6原料药中Eb1.6含量范围在(98.85±0.63)%^(99.04±0.33)%之间(按无水物计算),总有关物质含量在0.45%~0.84%之间,样品中水分含量在(1.23±0.32)%^(2.23±0.23)%之间,乙酸含量在(11.16±0.08)%^(12.66±0.03)%之间。结论:该方法快速简便,结果准确可靠,可用于Eb1.6的质量分析。 展开更多

关键词 芋螺多肽 镇痛多肽 Eb1.6 有关物质 水分 乙酸 高效液相色谱 卡尔菲休库仑滴定

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含双环哌啶结构HIV-1抑制剂的设计合成及生物活性研究 被引量：2

8

作者 毛文祥 董铭心 +2 位作者 朱卫国 姜世勃 戴秋云 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期169-177,共9页

目的设计合成一系列具有新型结构特征的双环哌啶类C-C族趋化因子受体5(CCR5)抑制剂并测定其抗HIV-1活性。方法以HIV-1辅助受体CCR5抑制剂Vicriviroc的结构为模板,通过改变左侧哌嗪结构、取代基位置等方法设计并合成一系列新化合物。并利... 目的设计合成一系列具有新型结构特征的双环哌啶类C-C族趋化因子受体5(CCR5)抑制剂并测定其抗HIV-1活性。方法以HIV-1辅助受体CCR5抑制剂Vicriviroc的结构为模板,通过改变左侧哌嗪结构、取代基位置等方法设计并合成一系列新化合物。并利用MS及1H-NMR谱对这些化合物进行结构表征。结果与结论合成了15个新结构化合物,活性测试结果表明,该系列化合物具有较强的抗HIV-1 R5病毒株的活性(IC50=1.20～66.24μmol.L-1)。当R1为芳基结构且两个氮原子满足标准的丙二胺结构时,化合物的活性更好。 展开更多

关键词 CCR5 HIV-1 抑制剂 合成

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A型肉毒毒素抑制剂的分子全息定量构效关系研究 被引量：1

9

作者 董铭心 周梅 戴秋云 《生物技术通讯》 CAS 2007年第4期625-627,共3页

目的:建立A型肉毒毒素抑制剂的定量构效关系模型。方法:应用分子全息定量构效关系(HQSAR)技术,研究了14种A型肉毒毒素抑制剂的抑制活性与其二维分子结构之间的关系,讨论了碎片区分参数及碎片长度对模型质量的影响。结果:最佳全息条件下... 目的:建立A型肉毒毒素抑制剂的定量构效关系模型。方法:应用分子全息定量构效关系(HQSAR)技术,研究了14种A型肉毒毒素抑制剂的抑制活性与其二维分子结构之间的关系,讨论了碎片区分参数及碎片长度对模型质量的影响。结果:最佳全息条件下产生的模型相关系数r2为0.780,交叉验证相关系数q2LOO为0.583。所建模型具有良好的拟和效果和较高的预测能力,HQSAR模型贡献图显示抑制剂分子中的噻吩环及羟胺对活性有较大贡献。结论:本研究对新抑制剂的设计具有一定的指导作用。 展开更多

关键词 A型肉毒毒素 抑制剂 分子全息 定量构效关系

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CXCR4 HIV-1抑制剂的设计合成及活性研究 被引量：1

10

作者 叶建涵 周尚民 +5 位作者 王茜 陆路 董铭心 陈红飙 姜世勃 戴秋云 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期602-607,共6页

目的设计、合成一系列新型四氢喹啉-苄基或苯并咪唑多胺类化合物,作为潜在的靶向CXCR4辅助受体的新型抑制剂,并测定其抗HIV-1活性。方法组合HIV-1辅助受体CXCR4抑制剂三氮构效团与CCR5部分药效团,设计并合成一系列新化合物并经1H-NMR、M... 目的设计、合成一系列新型四氢喹啉-苄基或苯并咪唑多胺类化合物,作为潜在的靶向CXCR4辅助受体的新型抑制剂,并测定其抗HIV-1活性。方法组合HIV-1辅助受体CXCR4抑制剂三氮构效团与CCR5部分药效团,设计并合成一系列新化合物并经1H-NMR、MS表征,用HIV-1ⅢB病毒测定化合物抑制活性。结果与结论设计合成的10个目标化合物未见文献报道。活性测试结果显示,四氢喹啉-苯并咪唑多胺类化合物具有较好的抗HIV活性(IC50<1μmol/L),四氢喹啉-苄基多胺类化合物活性较差(IC50>8μmol/L)。 展开更多

关键词 CXCR4 HIV-1 抑制剂 合成 活性

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芋螺多肽Eb1.6的制备工艺研究 被引量：1

11

作者 徐艳 余硕 +4 位作者 姬泓巍 董铭心 王孝花 吴巧玲 戴秋云 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期274-278,共5页

目的研究α-芋螺多肽Eb1.6的制备工艺,为其临床前实验奠定基础。方法采用Fmoc保护氨基酸,以Rink树脂为固相载体,N,N-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)/1-羟基苯并三唑(HOBt)为缩合剂,手工固相法规模合成目标肽。线性肽折叠采用空气氧化法,将线... 目的研究α-芋螺多肽Eb1.6的制备工艺,为其临床前实验奠定基础。方法采用Fmoc保护氨基酸,以Rink树脂为固相载体,N,N-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)/1-羟基苯并三唑(HOBt)为缩合剂,手工固相法规模合成目标肽。线性肽折叠采用空气氧化法,将线性肽按0.2 mg/ml的浓度溶于0.1 mol/L NH4HCO3缓冲液中,室温下搅拌16～24 h。折叠结束后,加入Amberlite XAD16大孔吸附树脂富集,树脂用乙醇浸洗,旋转蒸发浓缩得折叠后粗品,然后进行反相纯化。结果 Eb1.6线性肽的粗产率为94.6%,Eb1.6折叠肽粗品的回收率为82.3%,粗品经C18反相纯化后纯度高于98.5%。结论以DIC/HOBt为缩合剂合成Eb1.6的纯度及产率均较高,Eb1.6折叠后用吸附树脂富集,乙醇浸泡再释放多肽,可实现缓冲体系及树脂的反复循环,降低了成本。 展开更多

关键词 α-芋螺多肽 Eb1 6 固相合成 折叠 纯化

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替韦立马一水合物的制备及新晶型结构测定 被引量：1

12

作者 董铭心 李海涛 +3 位作者 王孝花 毛文祥 周尚民 戴秋云 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期2736-2739,共4页

目的:改进替韦立马的合成工艺,制备替韦立马新晶型。方法:以对三氟甲基苯甲酸甲酯为起始原料,经肼解反应制得重要中间体对三氟甲基苯甲酰肼(6);6与中间体4,4a,5,5a,6,6a-六氢-4,6-亚乙烯基-1H环丙[f]异苯并呋喃-1,3(3aH)-二酮(4)缩合得... 目的:改进替韦立马的合成工艺,制备替韦立马新晶型。方法:以对三氟甲基苯甲酸甲酯为起始原料,经肼解反应制得重要中间体对三氟甲基苯甲酰肼(6);6与中间体4,4a,5,5a,6,6a-六氢-4,6-亚乙烯基-1H环丙[f]异苯并呋喃-1,3(3aH)-二酮(4)缩合得到目标化合物替韦立马粗品,以90%乙醇溶液结晶制得晶体。结果与结论:反应条件优化后,总收率提高到61%,降低了生产成本,有利于工业化生产;所得替韦立马晶体为单斜晶系,含1个结晶水。 展开更多

关键词 替韦立马 合成 水合物 晶型

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新型HIV-1 gp41融合抑制剂CP32M的构效关系研究 被引量：1

13

作者 王孝花 成健伟 +4 位作者 朱卫国 董铭心 种辉辉 何玉先 戴秋云 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期332-336,共5页

目的研究新型融合多肽CP32M中VEWNEMT序列的长短、残基的极性及其他部位残基的极性对其抑制gp41融合活性的影响。方法在多肽CP32M的基础上,通过对前7个氨基酸序列进行截取、部分替换、全部替换及改变其他位置氨基酸残基的极性设计合成... 目的研究新型融合多肽CP32M中VEWNEMT序列的长短、残基的极性及其他部位残基的极性对其抑制gp41融合活性的影响。方法在多肽CP32M的基础上,通过对前7个氨基酸序列进行截取、部分替换、全部替换及改变其他位置氨基酸残基的极性设计合成系列多肽,测定多肽抑制HIV-1融合活性。应用圆二色谱、分子排阻色谱测定多肽与N36的结合功能。结果截取、替换氨基酸后的肽抑制gp41融合的活性都不同程度降低,与N36结合形成六束螺旋的能力减弱。在CP32M中部及C端i与i+4位置引入Lys增加Glu-Lys离子对作用后,肽活性降低。用C34的C端氨基酸序列NEKDLLE及可与gp120结合的序列RINNIPWSEAM置换QIWNNMT后,多肽仍有很高活性。结论片段VEWNEMT是关键片段,其中VE及MT是关键功能氨基酸。其他片段替代该片段后仍有较强活性,也与N36形成螺旋结构,提示该片段含有共性结合区。 展开更多

关键词 HIV-1 HIV包膜蛋白质gp41 多肽 CP32M 构效关系

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基于μ阿片受体羧基端^(375)STANT^(379)磷酸化位点的多肽干预对吗啡介导的受体下游信号通路的影响

14

作者 李笑妍 周筱慧 +1 位作者 董河 董铭心 《精准医学杂志》 2023年第4期310-314,共5页

目的探讨基于μ阿片受体(MOR)羧基端^(375)STANT^(379)磷酸化位点的多肽TAT-Q368-T379干预,对μ阿片受体下游信号通路的影响。方法将HA-MOR质粒与pGloSensorTM-22F质粒共转染的HEK-293细胞分为空白组(A组)、DAMGO组(B组)、吗啡组(C组)、... 目的探讨基于μ阿片受体(MOR)羧基端^(375)STANT^(379)磷酸化位点的多肽TAT-Q368-T379干预,对μ阿片受体下游信号通路的影响。方法将HA-MOR质粒与pGloSensorTM-22F质粒共转染的HEK-293细胞分为空白组(A组)、DAMGO组(B组)、吗啡组(C组)、0.5×10^(-5)mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(D组)、10-5mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(E组)、2×10^(-5)mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(F组),通过GloSensor cAMP生物传感器测定各组细胞中的cAMP含量。将MOR-C端标记Nanoluc的质粒以及β-arrestin2-N端标记EYFP的质粒共转染完成的HEK-293细胞分为空白组(G组)、DAMGO组(H组)、吗啡组(I组)、10^(-5)mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(J组)、3×10^(-5)mol/L Cmpd101与吗啡联用组(K组),通过蛋白质相互作用分析法测定各组细胞MOR激动后对β-arrestin2的募集效应。将HA-MOR质粒转染完成的HEK-293细胞分为空白组(L组)、吗啡组(M组)、10^(-5)mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(N组)以及3×10^(-5)mol/L Cmpd101与吗啡联用组(O组),通过细胞免疫荧光染色法检测各组细胞的受体平均荧光强度。结果GloSensor cAMP生物传感器检测结果显示,C~F组细胞EC_(50)值差异有显著性(F=13.12,P<0.05),其中D、E、F组EC_(50)值较C组均显著减小(P<0.05)。蛋白质相互作用分析法分析显示,I~K组细胞E_(max)值差异有显著性(F=185.95,P<0.05),其中J、K组E_(max)值较I组均显著减小(P<0.01)。细胞免疫荧光染色法染色结果显示,L~O组细胞表面受体荧光强度比较差异有显著性(F=17.46,P<0.05),其中与M组比较,N、O组细胞表面受体荧光强度均显著增高(P<0.01)。结论基于MOR羧基端^(375)STANT^(379)磷酸化位点设计的多肽TAT-Q368-T379可有效增强吗啡介导的MOR下游G蛋白信号通路的激活,减少吗啡介导的β-arrestin2招募,从而减少由吗啡介导的MOR的内吞。 展开更多

关键词 受体 阿片样 μ 磷酰化 吗啡 肽类 信号传导 GTP结合蛋白质类 β-抑制蛋白2

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替韦立马两种立体异构杂质的合成及鉴定

15

作者 周尚民 李海涛 +2 位作者 董铭心 王孝花 戴秋云 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期446-449,共4页

目的合成替韦立马原料药中的两种立体异构杂质(1,2),用于其质量及毒理学研究。方法通过改变环庚三烯与顺丁酸酐的缩合条件,合成了托烷酸酐异构体,然后与对三氟甲基苯甲酰肼反应形成替韦立马立体异构体。结果与结论两种杂质经核磁氢谱、... 目的合成替韦立马原料药中的两种立体异构杂质(1,2),用于其质量及毒理学研究。方法通过改变环庚三烯与顺丁酸酐的缩合条件,合成了托烷酸酐异构体,然后与对三氟甲基苯甲酰肼反应形成替韦立马立体异构体。结果与结论两种杂质经核磁氢谱、质谱确证为4,4a,5,5a,6,6a-六氢-4,6-亚乙烯基-1H环丙[f]异苯并呋喃-1,3(3aH)-二酮及3aR,4S,4aS,5aR,6R,6aS-3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-六氢-4,6-亚乙烯基-1H环丙[f]异苯并呋喃-1,3(3aH)-二酮。反应温度和反应时间对不同构象托烷酸酐中间体的含量影响较大,反应温度提高及反应时间延长均增加了托烷酸酐中间体含量,最终增加目标产品的杂质量。所得两种杂质为替韦立马原料药质量及毒理学研究奠定了基础。 展开更多

关键词 替韦立马 抗痘病毒药物 杂质 合成

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LC-MS/MS测定兔血浆中B07浓度

16

作者 孙涛 尹林 +4 位作者 田芳 陆路 董铭心 李卫华 张丽军 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1056-1060,共5页

目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6... 目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm)柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对B07为529.3→335.4,内标卡马西平为237.1→194.1。结果测定血浆中B07线性范围为0.31~310 ng·mL^(-1),r>0.99。日内和日间精密度小于15%,提取回收率均大于75%。结论该法选择性强、灵敏度高、重现性好,能够快速、准确测定兔血浆中B07浓度。 展开更多

关键词 B07 液相色谱-串联质谱法 液-液萃取 血药浓度

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抗凝血多肽Hirulog-S的稳定性研究

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作者 余硕 郭会芹 +1 位作者 董铭心 戴秋云 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期934-937,共4页

目的考察抗凝血多肽Hirulog-S原料药及冻干剂的稳定性,为该药临床应用及保存条件的制定奠定基础。方法采用高效液相色谱法,通过影响因素实验、加速实验和长期稳定性实验测定Hirulog-S原料药及冻干剂的含量及有关物质的变化。结果影响因... 目的考察抗凝血多肽Hirulog-S原料药及冻干剂的稳定性,为该药临床应用及保存条件的制定奠定基础。方法采用高效液相色谱法,通过影响因素实验、加速实验和长期稳定性实验测定Hirulog-S原料药及冻干剂的含量及有关物质的变化。结果影响因素实验结果表明,温度、湿度对Hirulog-S原料药、冻干剂的含量及有关物质变化影响不大;加速实验(40℃,RH75%)、24个月室温及4℃长期稳定性实验显示,Hirulog-S原料药及冻干剂含量及有关物质均无显著变化。结论 Hirulog-S原料药及冻干剂具有较高稳定性,原料药室温避光密封保存、冻干粉4℃避光密封保存,暂定有效期2年。 展开更多

关键词 抗凝剂 硬脂酸链修饰多肽 Hirulog-S 稳定性 色谱法 高压液相

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μ阿片受体羧基端^(375)STANT^(379)位点磷酸化对吗啡镇痛效果的影响 被引量：1

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作者 周筱慧 李笑妍 +1 位作者 褚海辰 董铭心 《精准医学杂志》 2022年第3期262-266,共5页

目的探讨μ阿片受体(MOR)羧基端^(375)STANT^(379)位点磷酸化对吗啡镇痛效果的影响。方法针对MOR羧基端^(375)STANT^(379)序列设计穿膜多肽,采用标准固相合成方法进行合成,采用高效液相色谱(HPLC)和高分辨质谱法(HRMS-ESI)分别测定合成... 目的探讨μ阿片受体(MOR)羧基端^(375)STANT^(379)位点磷酸化对吗啡镇痛效果的影响。方法针对MOR羧基端^(375)STANT^(379)序列设计穿膜多肽,采用标准固相合成方法进行合成,采用高效液相色谱(HPLC)和高分辨质谱法(HRMS-ESI)分别测定合成多肽的纯度和相对分子质量,检测合成无误后用于后续实验。采用CCK-8法检测合成多肽对表达MOR的HEK-293细胞的毒性作用。采用热板法检测各组小鼠末次给药后不同时间点吗啡镇痛反应率,观察合成多肽对吗啡镇痛效果的影响。结果针对^(375)STANT^(379)关键磷酸化区域设计多肽TAT-Q368-T379,HPLC检测多肽纯度大于96%,HRMS-ESI检测多肽相对分子质量2894.4834(预期相对分子质量2894.5625),多肽合成正确,符合后期实验要求。CCK-8法检测结果显示各组细胞存活率差异无显著意义(P>0.05),多肽安全范围广。热板法检测结果显示多肽预处理组小鼠吗啡镇痛时间较吗啡组明显延长(Waldχ^(2)_(组别)=1519.252,Waldχ^(2)_(时间)=756.177,Waldχ^(2)_(组别*时间)=8657.036,P<0.05)。结论MOR羧基端^(375)STANT^(379)磷酸化区域与吗啡镇痛相关,针对这一区域氨基酸序列设计的多肽可作为工具竞争性抑制该位点磷酸化,有效改善吗啡镇痛效果。 展开更多

关键词 受体 阿片样 μ 磷酰化 吗啡 镇痛 固态合成技术

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GluA2亚基内吞阻滞穿膜环肽CMT-3Y的设计合成与评价 被引量：1

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作者 严志祥 韩帅 +2 位作者 陈积 祝青晔 董铭心 《精准医学杂志》 2022年第1期22-27,共6页

目的评价GluA2亚基内吞阻滞穿膜环肽CMT-3Y的穿膜效率、神经保护活性和体外稳定性。方法采用多肽固相合成法合成GluA2亚基内吞阻滞穿膜环肽CMT-3Y,采用MDCK-MDRI跨膜转运模型和平行人工膜渗透模型评价药物的穿膜效率,采用PC-12细胞评价... 目的评价GluA2亚基内吞阻滞穿膜环肽CMT-3Y的穿膜效率、神经保护活性和体外稳定性。方法采用多肽固相合成法合成GluA2亚基内吞阻滞穿膜环肽CMT-3Y,采用MDCK-MDRI跨膜转运模型和平行人工膜渗透模型评价药物的穿膜效率,采用PC-12细胞评价药物的神经保护作用,与大鼠血浆共孵育评价药物的体外稳定性。结果GluA2亚基内吞阻滞穿膜环肽CMT-3Y的穿膜效率是对照药物Tat-GluA2-3Y的3~4倍;CMT-3Y的半数最大效应浓度(EC_(50))值为(35.53±5.47)μmol/L,与阳性对照组比较,差异有显著性(t=4.60,P<0.05);CMT-3Y与体外血浆共孵育24 h含量降至57%,优于Tat-GluA2-3Y。结论GluA2亚基内吞阻滞穿膜环肽CMT-3Y的高穿膜效率和血浆稳定性可促使药物更好地发挥神经保护效应。 展开更多

关键词 环肽 细胞穿透性肽类 神经保护 药物稳定性 固态合成技术 药物设计 药物评价

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4-羟基他莫昔芬依赖的内含肽调控绿色荧光蛋白功能研究

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作者 赵拯浩 王步森 +4 位作者 王玉东 朱丹妮 董铭心 侯利华 陈薇 《生物技术通讯》 CAS 2019年第5期619-623,共5页

目的:验证小分子4-羟基他莫昔芬(4-HT)依赖的内含肽调控绿色荧光蛋白(eGFP)功能的可行性。方法:根据eGFP的结构与功能,在蛋白上选取7个氨基酸位点,通过同源重组方式将内含肽序列插入不同位点,转染293T细胞系后通过流式细胞术检测eGFP的... 目的:验证小分子4-羟基他莫昔芬(4-HT)依赖的内含肽调控绿色荧光蛋白(eGFP)功能的可行性。方法:根据eGFP的结构与功能,在蛋白上选取7个氨基酸位点,通过同源重组方式将内含肽序列插入不同位点,转染293T细胞系后通过流式细胞术检测eGFP的表达情况,分析4-HT依赖的内含肽调控剪接效率。结果:在选取的7个氨基酸位点中,有5个具有调控效果,其中S148位点的4-HT调控效果最好,4-HT的最适工作浓度为4μmol/L。结论:在eGFP蛋白上发现一个新的高效的4-HT调控的内含肽剪接位点S148,与已报道位点R109相比,剪接效率提高8倍。 展开更多

关键词 内含肽 4-羟基他莫昔芬 小分子依赖 绿色荧光蛋白

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