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人细小病毒B19病毒样颗粒的制备 被引量:3
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作者 邹小辉 +4 位作者 宋敬东 屈建国 于修平 鲁茁壮 洪涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期575-579,共5页
采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒B19病毒样颗粒(VLPs)。先通过PCR方法合成细小病毒B19衣壳蛋白基因VP2,将其克隆到pFastBac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-... 采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒B19病毒样颗粒(VLPs)。先通过PCR方法合成细小病毒B19衣壳蛋白基因VP2,将其克隆到pFastBac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rBac-VP2。利用rBac-VP2感染Sf9细胞表达B19VP2蛋白,通过间接免疫荧光、Western blotting等方法鉴定目的蛋白表达。采用两次超速离心的方法对表达产物进行纯化,纯化产物在透射电镜下可见直径约22nm的VLPs。本研究成功制备了人细小病毒B19的VLPs,为B19感染血清学检测方法的建立提供了参考。 展开更多
关键词 细小病毒 B19 VP2 杆状病毒 病毒样颗粒
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大豆制品转基因成分检测和定量标识分析 被引量:1
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作者 谢响明 +3 位作者 毛建军 陈红运 陈洪俊 朱水芳 《植物检疫》 2005年第3期132-134,共3页
分别以大豆凝集素(Lectin)和5-莽草酸-3磷酸合成酶(CP4 EPSPS)为内源和目标基因,对2 8种大豆制品进行实时荧光PCR检测。检测结果表明,4种大豆制品的CP4 EP SPS扩增结果为阳性,含有转基因大豆成分。转基因成分的定量检测在贸易和可操作... 分别以大豆凝集素(Lectin)和5-莽草酸-3磷酸合成酶(CP4 EPSPS)为内源和目标基因,对2 8种大豆制品进行实时荧光PCR检测。检测结果表明,4种大豆制品的CP4 EP SPS扩增结果为阳性,含有转基因大豆成分。转基因成分的定量检测在贸易和可操作性方面要优于定性检测。 展开更多
关键词 大豆制品 标识分析 成分检测 实时荧光PCR检测 大豆凝集素 转基因大豆 转基因成分 目标基因 检测结果 定性检测 可操作性 定量检测 合成酶 莽草酸
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人腺病毒41型(Ad41)难养研究进展
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作者 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期156-158,共3页
人肠腺病毒41(Human Adenovirus Type 41,Ad41)属于人腺病毒F组,是引起胃肠炎的病原之一,因而被称为肠腺病毒。由于在体外难于培养,又被称为难养性腺病毒。6%~8%的4岁以下婴幼儿腹泻由该病毒引起。Flewett等首次在电镜下观察得... 人肠腺病毒41(Human Adenovirus Type 41,Ad41)属于人腺病毒F组,是引起胃肠炎的病原之一,因而被称为肠腺病毒。由于在体外难于培养,又被称为难养性腺病毒。6%~8%的4岁以下婴幼儿腹泻由该病毒引起。Flewett等首次在电镜下观察得到Ad41,De Jung首次成功分离Ad41的病毒株,并将其命名为Tak株。 展开更多
关键词 人腺病毒 肠腺病毒 Ad41 婴幼儿腹泻 镜下观察 胃肠炎 病毒株 Tak
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原核表达人41型腺病毒(Ad41)蛋白V及其抗血清的制备
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作者 邹小辉 +3 位作者 宋敬东 屈建国 鲁茁壮 洪涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期672-676,共5页
【目的】人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V(Ad41proteinV,pV)表达不充分有关。本研究拟表达纯化Ad41pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础。【方法】以野生型Ad41基因组DNA为模... 【目的】人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V(Ad41proteinV,pV)表达不充分有关。本研究拟表达纯化Ad41pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础。【方法】以野生型Ad41基因组DNA为模板,PCR扩增pV,克隆到原核表达载体pET30a(+),测序后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,固化金属亲和层析(IMAC)方法纯化,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,将获得的抗血清用于Western blot检测Ad41感染各细胞系后pV的表达。【结果】克隆得到包括完全编码区的pV基因,表达质粒转化BL21(DE3)菌株,使用1mmol/LIPTG37℃诱导4h,pV以包涵体形式表达,或使用0.5mmol/LIPTG25℃诱导8h获得可溶性表达。利用皮下多点注射包涵体的方法免疫小鼠,得到抗pV抗血清;使用纯化的可溶性pV作为抗原对抗血清进行了鉴定,表明该抗血清可用于Western blot检测。等量野生型Ad41感染293或293E12细胞(一株稳定表达Ad41E1B55K基因的293细胞)后,pV在293E12细胞的表达明显高于293细胞。【结论】成功克隆了Ad41pV基因,表达纯化了重组蛋白,获得了可用于Western blot检测的抗血清,为进一步研究Ad41难养性机理打下了基础。 展开更多
关键词 Ad41 PROTEIN V 难养性 抗血清
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液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中NIP203的质量浓度及其毒代动力学研究
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作者 刘晓雪 程刚 +2 位作者 赵新 周海蒙 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1295-1305,共11页
目的采用LC-MS/MS法,建立并验证大鼠血浆中NIP203的检测方法,并研究其毒代动力学特征。方法以盐酸维拉帕米为内标,经乙腈沉淀蛋白,采用Waters UPLC CSH C 18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以1 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液(含体积... 目的采用LC-MS/MS法,建立并验证大鼠血浆中NIP203的检测方法,并研究其毒代动力学特征。方法以盐酸维拉帕米为内标,经乙腈沉淀蛋白,采用Waters UPLC CSH C 18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以1 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液(含体积分数0.1%甲酸)和乙腈作为流动相,梯度洗脱。采用电喷雾-正离子(ESI+)多反应监测模式(MRM),定量分析离子对为387.3→266.3、455.4→165.2。在毒代动力学研究中,将SD大鼠随机分为溶媒对照组和低、中、高剂量组(3、10和30 mg·kg^(-1)·d^(-1)),灌胃连续给药14 d,检测首次及末次给药后大鼠血浆药物质量浓度。结果血浆中NIP203在5.00~5000 mg·L^(-1)内线性关系良好,各项验证参数均符合接受标准。SD大鼠给予3、10和30 mg·kg^(-1)·d^(-1)NIP203,第1天给药后,雄性动物和雌性动物的体内暴露量(AUC_(0-t))分别为(364±84)、(4979±1228)、(21015±5295)和(1472±162)、(9347±1656)、(34732±5974)μg·L^(-1)·h^(-1);第14天雄性和雌性动物的体内暴露量分别为(463±74)、(3712±1408)、(20571±2279)和(1391±109)、(7948±2058)、(32545±9801)μg·L^(-1)·h^(-1)。结论NIP203在各组动物的体内暴露量[c max、AUC_(0-t)]以高于剂量增加比例的方式增加(首次给药后雌性动物c max除外),在雌性SD大鼠体内暴露量明显高于雄性,但在雌雄大鼠体内无明显蓄积趋势。 展开更多
关键词 NIP203 HPLC-MS/MS 毒代动力学
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