北京市6岁以下门诊和住院腹泻患儿腺病毒检出率及流行特征 被引量：12

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作者 刘立颖 张又 +2 位作者 贾立平 董慧瑾 钱渊 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2014年第4期269-273,共5页

目的了解北京单中心门诊和住院腹泻患儿腺病毒(Ad)检出情况及流行特征。方法收集2010年1月至2013年12月首都儿科研究所6岁以下门诊腹泻、因腹泻住院和在住院期间出现腹泻症状患儿的粪便标本,采用PCR法检测Ad基因组DNA,分析流行特征。结... 目的了解北京单中心门诊和住院腹泻患儿腺病毒(Ad)检出情况及流行特征。方法收集2010年1月至2013年12月首都儿科研究所6岁以下门诊腹泻、因腹泻住院和在住院期间出现腹泻症状患儿的粪便标本,采用PCR法检测Ad基因组DNA,分析流行特征。结果进入本文分析腹泻患儿3 357例,门诊和住院腹泻患儿分别为862和2 495例。13 357例腹泻患儿粪便标本中Ad检测阳性341例(10.2%),门诊和住院腹泻患儿Ad检出率分别为8.1%(70/862)和10.9%(271/2 495);门诊腹泻患儿肠道Ad(EAd)40例,包括Ad41和40型别,非肠道Ad(NEAd)30例(42.9%),包括Ad31和Ad2等5种型别;住院腹泻患儿EAd 271例,包括Ad41和Ad40型别,NEAd 157例(57.9%),包括Ad31和Ad7等11种型别;门诊和住院腹泻患儿Ad和NEAd检出率差异均有统计学意义(P分别为0.022和0.002)。2Ad在门诊腹泻男女患儿中的检出率分别为9.0%和6.5%,在住院腹泻男女患儿中的检出率分别为11.7%和9.5%,差异均无统计学意义(P分别为0.206和0.086)。男女患儿Ad检出率在住院和门诊腹泻患儿间差异均无统计学意义(P分别为0.080和0.112)。3门诊腹泻患儿~6月龄、~1岁、~2岁和~6岁的Ad检出率分别为4.4%、7.7%、11.6%和12.3%,各年龄段Ad检出率差异有统计学意义(P=0.017)。住院腹泻患儿<28 d、~6月龄、~1岁、~2岁和~6岁的Ad检出率分别为4.4%、9.4%、13.2%、12.3%和13.4%,各年龄段Ad检出率差异有统计学意义(P=0.001)。4无论是门诊亦或住院腹泻患儿,全年各月均可见Ad检出。5Ad合并轮状病毒感染门诊腹泻患儿8/70例(11.4%),住院腹泻患儿29/271例(10.7%),差异无统计学意义(P=0.862)。结论北京单中心门诊和住院腹泻患儿中Ad检出率为10.2%,以EAd41型占优势,NEAd31型在儿童腹泻中的作用也不容忽视。 展开更多

关键词 腹泻 儿童 腺病毒 聚合酶链式反应

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儿童急性病毒性腹泻病原流行趋势分析 被引量：11

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作者 邓莉 黄辉 +5 位作者 金凤华 郑崇光 董慧瑾 贾立平 刘立颖 钱渊 《北京医学》 CAS 2015年第6期521-523,共3页

目的探讨儿童急性病毒性腹泻的病原流行趋势。方法对2013年3月至2014年12月在首都儿科研究所附属儿童医院感染科门诊就诊的急性腹泻患儿的粪便标本进行病毒学检测(包括轮状病毒、诺如病毒、肠腺病毒),新鲜粪便标本冷藏保存,使用Trizol和... 目的探讨儿童急性病毒性腹泻的病原流行趋势。方法对2013年3月至2014年12月在首都儿科研究所附属儿童医院感染科门诊就诊的急性腹泻患儿的粪便标本进行病毒学检测(包括轮状病毒、诺如病毒、肠腺病毒),新鲜粪便标本冷藏保存,使用Trizol和DNAzol试剂提取粪便标本核酸(RNA和DNA),分别用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测粪便标本中的轮状病毒,RT-PCR方法检测诺如病毒核酸,PCR方法检测肠腺病毒DNA。结果留取粪便标本共1 295份,病原学阳性411份(阳性率31.7%)。其中轮状病毒单一阳性282份,占阳性标本的68.6%;诺如病毒单一阳性78份,占阳性标本的19.0%;肠腺病毒单一阳性25份,占阳性标本的6.1%;2种病毒混合感染26例,占阳性标本的6.3%。不同病毒检出率呈明显季节变化,轮状病毒检出率高峰在11月份,诺如病毒检出率高峰在10月份,肠腺病毒检出率高峰在6月份,检出率分别为67.9%、18.7%、5.4%。混合感染以轮状病毒和诺如病毒感染为主。结论轮状病毒是儿童急性病毒性腹泻的主要病原,诺如病毒成为儿童急性病毒性腹泻的第2大病原。秋冬季节为轮状病毒腹泻的高发期,诺如病毒流行季节较轮状病毒略早,肠腺病毒流行主要发生在夏季。混合感染以轮状病毒合并诺如病毒感染多见,且好发于轮状病毒流行季节。3种病毒引起的腹泻在非流行季节均有散发病例。 展开更多

关键词 病毒性腹泻 轮状病毒 诺如病毒 肠腺病毒

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北京地区2007—2008年G9型A组人轮状病毒VP7和VP4基因分析 被引量：11

3

作者 董慧瑾 钱渊 +4 位作者 张又 赵林清 朱汝南 陈冬梅 刘立颖 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1179-1183,共5页

目的了解北京地区2007—2008年检测到的G9型A组人轮状病毒外壳蛋白VP7和VP4的基因特征。方法选取经过轮状病毒核酸杂交方法检测为G9型轮状病毒的12份儿童腹泻患儿的粪便标本，应用针对VP7全长基因的特异引物对进行RT-PCR扩增，对所获得... 目的了解北京地区2007—2008年检测到的G9型A组人轮状病毒外壳蛋白VP7和VP4的基因特征。方法选取经过轮状病毒核酸杂交方法检测为G9型轮状病毒的12份儿童腹泻患儿的粪便标本，应用针对VP7全长基因的特异引物对进行RT-PCR扩增，对所获得的VP7全长基因进行克隆和测序，将所获得的序列与GenBank中的G9型原型病毒株和近期流行株的VP7基因进行序列和种系进化分析；经巢式PCR对G9型的VP4进行P基因分型。结果12株G9型轮状病毒经VP7基因的序列比较分析得到确认。P基因分型结果显示北京地区近年来存在G9P[8]和G9P[6]型两种组合的轮状病毒感染。序列和种系进化分析发现北京G9型株VP7基因与世界范围内近期流行的G9型株一样都属于进化分支Ⅲ，彼此间的核苷酸和氨基酸同源性较高，而与国内最早报道的G9型T203进化关系较远，且北京G9P[8]和G9P[6]型株分别与国内近期报道的新疆G9P[8]和G9P[6]型株及相应的武汉G9型株VP7基因，在氨基酸位点上存在一些共同的氨基酸残基取代。结论北京地区近年存在G9P[8]和G9P[6]两种不同基因组合的G9型轮状病毒感染，需要进一步加强对G9型轮状病毒的分子流行病学监测。 展开更多

关键词 G9型轮状病毒 基因型 序列分析

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2020年北京地区儿童中急性胃肠炎相关诺如病毒的分子流行病学特征 被引量：9

4

作者 贾立平 赵林清 +4 位作者 周林 刘立颖 董慧瑾 朱汝南 钱渊 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期645-650,共6页

目的探讨北京地区2020年疫情防控措施下急性胃肠炎患儿诺如病毒的分子流行病学特点。方法采用回顾性重复横断面研究方法,2020年收集首都儿科研究所附属儿童医院就诊急性胃肠炎患儿的粪便标本或呕吐物标本1213份。首先用实时荧光反转录PC... 目的探讨北京地区2020年疫情防控措施下急性胃肠炎患儿诺如病毒的分子流行病学特点。方法采用回顾性重复横断面研究方法,2020年收集首都儿科研究所附属儿童医院就诊急性胃肠炎患儿的粪便标本或呕吐物标本1213份。首先用实时荧光反转录PCR进行标本中诺如病毒筛查,然后用反转录PCR对诺如病毒阳性标本进行病毒VP1基因和RdRp基因扩增,据核苷酸序列进行基因分型。采用χ^(2)检验对不同标本类型、患儿不同性别及不同年龄组间诺如病毒的检出阳性率进行比较。结果在1213份急性胃肠炎患儿标本中,共筛查到诺如病毒阳性标本215份,全年的检出阳性率为17.7%,阳性病例集中在秋冬季节[1、10、11及12月阳性率分别为28.6%(18/63)、26.2%(16/61)、22.8%(77/338)以及17.1%(89/520)]。粪便标本的阳性率明显高于呕吐物标本(χ^(2)=9.692,P<0.01),而男女性别差异无统计学意义(χ^(2)=0.041,P>0.05),各年龄组间诺如病毒检出率差异有统计学意义(χ^(2)=103.112,P<0.01),以6~48月龄诺如病毒的检出率较高。对G基因型分析显示共有3个基因群(GⅠ、GⅡ和GⅨ)诺如病毒流行,以GⅡ基因群为主,占总数的98.5%(196/199)。而GⅡ基因群中以GⅡ.4 Sydney为主要流行株,占GⅡ基因群的55.1%(108/196);其次为GⅡ.2型(29.6%,58/196),以往流行的GⅡ.3型(10.2%,20/196)诺如病毒在本次监测周期中较少。诺如病毒P基因型分析结果显示以GⅡ.P16为主,占61.5%(96/156);其次为GⅡ.P31(19.9%,31/156)。双基因测定结果显示以GⅡ.4 Sydney[P16]为主,占36.4%(56/154),其次为GⅡ.2[P16]占24.7%(38/154)。结论2020年诺如病毒的总阳性率与以往没有大的区别,但流行的基因型别构成有了明显的改变,且呈现多种基因型别诺如病毒的同时流行。 展开更多

关键词 诺罗病毒 胃肠炎 基因型

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北京地区人群中人Boca病毒血清抗体的分析 被引量：8

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作者 赵林清 钱渊 +4 位作者 朱汝南 邓洁 王芳 董慧瑾 Li Yan 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期111-114,共4页

目的通过对血清中人Boca病毒（HBoV）主要衣壳蛋白VP2特异性IgG抗体进行检测，初步了解北京地区人群中这种新发现的病毒的感染状况。方法以大肠杆菌表达的HBoV主要衣壳蛋白VP2为抗原，应用Western—blot方法，对1996年4月至1997年3月取... 目的通过对血清中人Boca病毒（HBoV）主要衣壳蛋白VP2特异性IgG抗体进行检测，初步了解北京地区人群中这种新发现的病毒的感染状况。方法以大肠杆菌表达的HBoV主要衣壳蛋白VP2为抗原，应用Western—blot方法，对1996年4月至1997年3月取自首都儿科研究所附属儿童医院健康查体者及北京宣武医院非呼吸道感染患者的血清标本共677份进行HBoV VP2蛋白特异性IgG抗体检测。设抗组氨酸抗体及兔抗HBoV-VP2多肽特异性免疫血清为阳性血清对照。结果（1）677份血清标本中，抗HBoV VP2蛋白的IgG抗体阳性400份，总检出率为59．1％。（2）被检对象中，〈1个月的婴儿抗体阳性率为45．3％，1个月～的婴儿抗体阳性率为41．4％，2个月～的婴儿抗体阳性率最低（31．3％），6个月～至7岁龄抗体阳性检出率在45．6％～69．7％，7岁后直至40岁，抗体阳性检出率维持在70％左右；50岁后则为61．8％～62．8％。结论早在1996年北京地区的人群中就有59．1％曾经感染过HBoV，说明这种病毒是一种新发现的病毒而不是新出现的病毒，北京地区人群中该病毒的感染较常见。6个月龄以前的婴儿为易感人群。 展开更多

关键词 细小病毒科 病毒结构蛋白质类 免疫球蛋白G 印迹法 蛋白质

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2010年北京住院腹泻患儿腺病毒感染的研究 被引量：8

6

作者 刘立颍 钱渊 +3 位作者 张又 贾立平 董慧瑾 邓洁 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期450-454,共5页

目的研究住院患儿中有腹泻症状者（包括社区获得性和院内获得性）腺病毒感染的情况。方法采用聚合酶链反应（PCR）对2010年北京地区有腹泻症状的住院患儿的粪便标本进行腺病毒的测定。结果519例标本中社区获得性腹泻为289例，院内获得... 目的研究住院患儿中有腹泻症状者（包括社区获得性和院内获得性）腺病毒感染的情况。方法采用聚合酶链反应（PCR）对2010年北京地区有腹泻症状的住院患儿的粪便标本进行腺病毒的测定。结果519例标本中社区获得性腹泻为289例，院内获得性腹泻为230例。所有标本中腺病毒阳性76例（76／519，14．6％）；其中社区获得性腹泻患儿43例（43／289，14．9％），有20例属于F组腺病毒（20／43，46．5％），均为41型；院内获得性腹泻患儿33例（33／230，14．3％），有13例属于F组腺病毒（13／33，39．4％），其中41型（Ad41）12例，40型1例。系统发育树分析本组检测到的Ad41分属于不同的分支。非F组的腺病毒总例数为43例，型别分别是1型（5例），2型（8例），3型（15例），7型（10例），12型（1例），31型（4例）。结论住院腹泻患儿中腺病毒的感染不容忽视。在本组住院患儿中，社区获得性和院内获得性腹泻中腺病毒感染阳性率相似。2010年度北京住院患儿腹泻中腺病毒的感染以F组腺病毒—肠道腺病毒为主，41型占绝对优势。 展开更多

关键词 儿童 腹泻 腺病毒科 聚合酶链反应

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一株与儿童腹泻相关的跨多种属的基因重配G3P[3]型轮状病毒 被引量：7

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作者 董慧瑾 钱渊 +3 位作者 农艺 张又 莫兆军 李荣成 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期129-140,共12页

G3P[3]型别多见于猫/狗A组轮状病毒(Group A rotavirus,RVA)。本研究前期工作中从广西农村一名腹泻儿童粪便标本中检测到1例在人的感染中少见的G3P[3]型RVA(命名M2-102),但经初步基因分析提示其VP7和VP4基因均同猫/狗G3P[3]RVAs进化距... G3P[3]型别多见于猫/狗A组轮状病毒(Group A rotavirus,RVA)。本研究前期工作中从广西农村一名腹泻儿童粪便标本中检测到1例在人的感染中少见的G3P[3]型RVA(命名M2-102),但经初步基因分析提示其VP7和VP4基因均同猫/狗G3P[3]RVAs进化距离远。为了解M2-102的种属来源,本研究对其全基因组11条基因进行了RT-PCR扩增、测序和序列分析。使用RotaC分型工具对所获得的M2-102全基因组基因序列进行分型。结果显示RVA/Human-wt/CHN/M2-102/2014/G3P[3]具有G3-P[3]-I3-R3-C3-M3-A9-N3-T3-E3-H6基因组型。序列分析进一步显示M2-102基因组中有5条基因(VP7、VP1、VP2、NSP2和NSP3)同云南蝙蝠MYAS33株亲缘关系近,处于相同的进化树支;另有5条基因(VP4、VP3、NSP1、NSP4和NSP5)同猿猴RRV株进化距离近,位于相同的进化树支;仅有1条基因VP6同人AU-1样RVAs处在相同进化树支,并具有较高核苷酸同源性。推测M2-102是一例由人AU-1样病毒同蝙蝠株MYAS33及猿猴株RRV类似病毒经基因重配而产生的多种属来源的重配毒株。 展开更多

关键词 人轮状病毒 G3P[3] 基因组 基因重配

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三种轮状病毒免疫层析抗原检测试剂盒的性能比对研究 被引量：7

8

作者 张又 刘立颖 +1 位作者 董慧瑾 钱渊 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期183-184,共2页

轮状病毒是1973年由澳大利亚的Bishop等首先发现的人类胃肠炎相关病毒病原。目前已经确定它是引起婴幼儿腹泻最重要的病原，以A组轮状病毒为主，占儿科秋冬季感染性腹泻的40％以上。早期快速地发现儿童A组轮状病毒感染，对于临床医生进... 轮状病毒是1973年由澳大利亚的Bishop等首先发现的人类胃肠炎相关病毒病原。目前已经确定它是引起婴幼儿腹泻最重要的病原，以A组轮状病毒为主，占儿科秋冬季感染性腹泻的40％以上。早期快速地发现儿童A组轮状病毒感染，对于临床医生进行早期诊断和鉴别诊断有着重要的临床应用价值。免疫胶体金技术是一种快捷灵敏、 展开更多

关键词 A组轮状病毒 抗原检测试剂盒 免疫层析 免疫胶体金技术 性能 轮状病毒感染 临床应用价值 病毒病原

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2010年广西部分地区婴幼儿腹泻轮状病毒流行以G9P[8]a型为主 被引量：6

9

作者 董慧瑾 钱渊 +3 位作者 张又 黄腾 李荣成 李艳萍 《中国病毒病杂志》 CAS 2012年第3期202-206,共5页

目的了解广西农村5岁以下散居腹泻儿童中轮状病毒的分子流行情况。方法于2010年1～5月收集广西3个腹泻监测哨点腹泻儿童的粪便标本,应用RT-PCR、核酸打点杂交及基因测序的方法对205份轮状病毒抗原检测阳性的标本进行VP7(G)和VP4(P)基因... 目的了解广西农村5岁以下散居腹泻儿童中轮状病毒的分子流行情况。方法于2010年1～5月收集广西3个腹泻监测哨点腹泻儿童的粪便标本,应用RT-PCR、核酸打点杂交及基因测序的方法对205份轮状病毒抗原检测阳性的标本进行VP7(G)和VP4(P)基因分型,并运用MEGA4.1软件对广西G9型轮状病毒的VP7基因进行进化分析。结果基因分型结果显示G9P[8]a最多见(35.3%),其次是G3P[8]a(28.7%)、G1P[8]a(16.8%)及G2P[4](10.8%);少见的轮状病毒型别分别为G9P[4]3例(1.8%)、G1P[6]1例(0.6%)及G4P[6]2例(1.2%);G9型轮状病毒VP7基因进化分析显示本研究中广西G9型同国内多地近期流行的G9型一样均属于进化分支Ⅲ,并且同国内近期流行的G9P[8]型病毒株进化关系最近。结论这是国内首次在农村婴幼儿腹泻轮状病毒野毒株流行中发现G9型是最主要的流行型别,基因进化分析提示国内各地近期流行的G9型轮状病毒的来源可能相同。 展开更多

关键词 轮状病毒 基因分型 G9型

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改进探针标记法斑点杂交在轮状病毒VP7分型中的应用 被引量：6

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作者 董慧瑾 钱渊 +3 位作者 张又 陈冬梅 赵林清 刘立颖 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2009年第5期436-441,共6页

目的建立一种更加简便的A组人轮状病毒(HRV)核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRVVP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR... 目的建立一种更加简便的A组人轮状病毒(HRV)核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRVVP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR分别将地高辛标记HRV5种常见型别(G1～4,G9型)的DNA探针,建立基于VP7的斑点杂交方法;选取经抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测均为HRV阳性的2006至2008年住院腹泻患儿粪便标本200份,RT-PCR扩增VP7全基因,并对扩增阳性产物应用斑点杂交方法进行G型别分析。结果建立的斑点杂交方法在5种型别探针间无交叉反应,各型探针的检测灵敏度可达到10pg。200份PAGE阳性标本中162份RT-RCR扩增VP7基因阳性,斑点杂交显示G1型41例(25.3%),G2型2例(1.2%),G3型63例(38.9%),G9型35例(21.6%),混合感染19例(11.7%),杂交未分出型2例(1.2%),未检测到G4型HRV。结论本研究所建立的斑点杂交方法敏感度和特异度强,适合在HRV大规模分子流行病学调查时应用。通过该方法的初步应用,发现北京地区婴幼儿HRV除了常见的G1、G2和G3型外,还有G9型感染。 展开更多

关键词 A组人轮状病毒 地高辛 斑点杂交 G基因型

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北京地区人Boca病毒外壳蛋白VP2的原核表达及抗原性初步分析 被引量：6

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作者 赵林清 钱渊 +4 位作者 董慧瑾 朱汝南 邓洁 王芳 LI Yan 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-5,共5页

目的获得新发现的北京地区人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2，为对该病毒病原学的深入研究打下基础。方法从已证明为HBoV阳性的临床标本BJ3722中经PCR扩增得到HBoV VP2蛋白编码区基因片段，将其克隆至pUCm-T载体中，然后再亚克隆至原... 目的获得新发现的北京地区人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2，为对该病毒病原学的深入研究打下基础。方法从已证明为HBoV阳性的临床标本BJ3722中经PCR扩增得到HBoV VP2蛋白编码区基因片段，将其克隆至pUCm-T载体中，然后再亚克隆至原核表达载体pET-30b（＋），经双酶切、PCR、序列测定等方法挑选、鉴定阳性克隆，得到重组表达质粒pET-30b-VP2，转化大肠杆菌B121（DE3），在不同的温度下利用IPTG诱导蛋白表达；对得到的蛋白表达产物粗提物经NP亲和层析纯化后，利用抗组氨酸抗体、兔抗HBoV-VP2多肽免疫血清及人血清进行抗原性初步分析。结果BJ3722 VP2基因正确插入pET-30b中，开放阅读框架正确，表明得到了预期的pET-30b-VP2重组原核表达质粒。比较25℃、30℃、37℃ 3个不同温度下的蛋白表达产物，以25℃ 1mmol／L IPTG诱导培养过夜后产生的带6×His标记的重组VP2蛋白量最大，主要以包涵体形式存在。VP2蛋白粗提物经NP亲和层析，在pH4．5时获得较理想的纯化结果。Western blot显示所表达的蛋白质能够与抗组氨酸特异性抗体、兔抗HBoV-VP2蛋白多肽免疫血清以及人血清发生反应。结论本研究成功构建了重组pET-30b-VP2原核表达质粒，改善了表达及纯化条件，得到了较大量的HBoV-VP2蛋白表达，并初步证明表达产物具有抗原特异性，可用于对这一新发现病毒的进一步深入研究。 展开更多

关键词 人Boca病毒 主要外壳蛋白VP2 原核表达 抗原特异性

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2009～2010年北京儿童腹泻中轮状病毒新VP4基因亚型的研究 被引量：5

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作者 董慧瑾 钱渊 +6 位作者 张又 邓莉 赵林清 朱汝南 陈冬梅 刘立颖 贾立平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期565-570,共6页

P[8]b基因亚型是国内外新近发现的A组人轮状病毒(HRV)VP4基因的一种新亚型,本研究旨在建立有效鉴别HRV P[8]a和P[8]b基因亚型及P[4]和P[6]基因型的VP4基因打点杂交分型方法,并运用此方法对2009～2010年首都儿科研究所附属儿童医院门诊... P[8]b基因亚型是国内外新近发现的A组人轮状病毒(HRV)VP4基因的一种新亚型,本研究旨在建立有效鉴别HRV P[8]a和P[8]b基因亚型及P[4]和P[6]基因型的VP4基因打点杂交分型方法,并运用此方法对2009～2010年首都儿科研究所附属儿童医院门诊及住院腹泻患儿中P[8]b基因亚型HRV的流行情况及其G/P基因组合情况进行研究。通过对GenBank序列数据库可检索到的国内外HRV各种P基因型及亚型的VP4基因序列应用相关软件进行基因分析,在不同基因型别间核苷酸变异密集而相同P基因型内核苷酸高度保守的的位置设计各型别探针,并分别以本实验室上传GenBank的北京HRV地方株P[4]和P[6]基因型及P[8]a和P[8]b亚型的VP4基因作为相应型别探针的合成引物的设计模板及探针经PCR合成的合成模板,合成地高辛素标记的DNA探针。经测序验证所建立的VP4基因杂交分型方法结果可靠。对门诊88例(55%,88/160)及住院79例(70.5%,79/112)HRV腹泻患儿的P分型结果显示P[8]a亚型仍为主要型别,前者为96.6%(85/88),而后者为62.0%(49/79);P[8]b亚型在住院HRV感染腹泻患儿中占较高比例(27.9%,22/79),虽然其在门诊HRV感染患儿中也存在,但仅占2.3%(2/88);另外单纯P[4]基因型HRV感染仅在住院腹泻患儿中检测到1例(1.3%,1/79),而P[6]基因型在门诊及住院HRV感染腹泻患儿中均未检测到;本组标本中HRV P[8]b亚型主要与G9基因型组合。本研究表明G9P[8]b型HRV在北京腹泻儿童中有流行。 展开更多

关键词 A组轮状病毒 VP4基因 b基因亚型 G9基因型 打点杂交

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北京地区2007-2008年G9型轮状病毒VP4、VP6、NSP4和NSP5基因分析 被引量：4

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作者 董慧瑾 钱渊 +5 位作者 张又 赵林清 朱汝南 陈冬梅 刘立颖 贾立平 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期469-470,共2页

本研究室在2007—2008年收集的临床标本中再次发现北京地区儿童中有G9型轮状病毒的感染，并已对其进行了VP7基因分析和VP4基因巢式PCR分型^[1,2]。为进一步了解北京G9型轮状病毒的重要蛋白基因的进化，本研究室对2例从社区感染患儿中发... 本研究室在2007—2008年收集的临床标本中再次发现北京地区儿童中有G9型轮状病毒的感染，并已对其进行了VP7基因分析和VP4基因巢式PCR分型^[1,2]。为进一步了解北京G9型轮状病毒的重要蛋白基因的进化，本研究室对2例从社区感染患儿中发现的北京G9型VP4、VP6、NSP4和NSP5基因进行测序及进化分析，结果简报如下。 展开更多

关键词 轮状病毒 b亚型 基因分析

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北京婴幼儿腹泻中G1、G3型轮状病毒VP7基因分子进化动态分析 被引量：4

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作者 董慧瑾 朱汝南 +5 位作者 张又 赵林清 刘立颖 贾立平 德日 钱渊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期377-384,共8页

北京儿童腹泻中G1和G3型轮状病毒(Rotavirus,RV)的流行随时间动态变化。鉴于G1和G3型RV在疫苗研发设计中的重要地位,本研究依据前期对2007～2017北京腹泻就诊患儿中RV流行的监测结果,分别选取G1(15例)和G3(18例)型RV标本,应用DNAStar、M... 北京儿童腹泻中G1和G3型轮状病毒(Rotavirus,RV)的流行随时间动态变化。鉴于G1和G3型RV在疫苗研发设计中的重要地位,本研究依据前期对2007～2017北京腹泻就诊患儿中RV流行的监测结果,分别选取G1(15例)和G3(18例)型RV标本,应用DNAStar、MEGA 6.0和BEAST软件包及Datamonkey在线工具,分析和预测11年来其主要中和抗原VP7基因的分子进化动态。结果显示G1和G3型RV同近年世界各地的各自主要流行株之间的进化距离近,相比同一进化树分支内参考株的VP7基因并没有表现出特有的氨基酸变异,提示并未有特别的基因变异直接改变北京G1和G3型RV的流行。本研究中北京G1和G3型RV最近共同祖先株形成时间分别约为2005年和1996年,其VP7基因平均进化速率分别为2.29×10^(-3)和5.11×10^(-4)氨基酸替换·位点^(-1)·年^(-1)。尽管G1型的变异速率大于G3型,但有意思的是它们均无正向选择变异位点。群体流行历史(Bayesian skyline plot,BSP)分析显示人群中G1和G3型RV的感染水平呈现缓慢下降,并均在2010年前后出现了跳跃式下降,随后有所上升并维持在较平稳的感染水平,基本符合北京腹泻儿童中RV流行趋势监测,据此推测群体免疫压力可能是影响G1和G3型RV的流行分布随时间动态变化的原因。分子分析结果还显示本研究中G1和G3型RV和相应型别疫苗株之间的进化距离远,且均在主要抗原区存在变异,这些是否对疫苗应用效果产生影响仍需要对RV的流行进行持续监测。 展开更多

关键词 腹泻 轮状病毒(RV) G1 G3 VP7 分子进化动态

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北京市儿童肠道感染相关腺病毒的病原学研究 被引量：3

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作者 刘立颖 钱渊 +2 位作者 董慧瑾 贾立平 朱汝南 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2021年第2期182-187,共6页

目的了解北京市腹泻患儿及社区健康儿童中人腺病毒(human adenovirus, HAdV)的流行和基因变异特征。方法收集2015—2107年6岁以下门诊腹泻患儿以及2016—2017社区健康儿童的粪便标本共1 834份,检测HAdV六邻体基因进行分型并扩增HAdV-41... 目的了解北京市腹泻患儿及社区健康儿童中人腺病毒(human adenovirus, HAdV)的流行和基因变异特征。方法收集2015—2107年6岁以下门诊腹泻患儿以及2016—2017社区健康儿童的粪便标本共1 834份,检测HAdV六邻体基因进行分型并扩增HAdV-41纤维蛋白基因进行序列分析。结果健康儿童和门诊腹泻患儿HAdV的检出率分别为1.5%(8/536)和7.4%(96/1 298),两者间差异有统计学意义(χ^(2)=23.62,P<0.001)。健康儿童和腹泻患儿中HAdV-41均为最主要的检出型别。HAdV在门诊腹泻患儿中的检出无性别差异(χ^(2)=0.002,P=0.961)。除新生儿组无检出外,其他年龄组之间的检出无差异。HAdV流行无明显季节特征。序列分析显示HAdV-41地方流行株分属于3个进化分支,并出现纤维蛋白轴区截短15个氨基酸的毒株。结论 HAdV是引起2015—2017年北京市儿童腹泻的主要病原之一,以HAdV-41为主。 展开更多

关键词 儿童 腹泻 人腺病毒 纤维蛋白

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北京腹泻儿童中G9-Ⅵ轮状病毒再次出现并呈优势流行 被引量：3

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作者 董慧瑾 孙宇 +7 位作者 赵林清 邓莉 朱汝南 陈冬梅 贾立平 刘立颖 张又 钱渊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期436-444,共9页

1994年从北京腹泻儿童中鉴定的国内首例G9型A组轮状病毒(Group A Rotavirus,RVA)株T203属于G9-Ⅵ(VP7基因进化树支Ⅵ),而之后国内流行的G9型RVAs主要属于全球广泛流行的G9-Ⅲ(VP7基因进化树支Ⅲ)。本研究于2010年通过基因测序从北京腹... 1994年从北京腹泻儿童中鉴定的国内首例G9型A组轮状病毒(Group A Rotavirus,RVA)株T203属于G9-Ⅵ(VP7基因进化树支Ⅵ),而之后国内流行的G9型RVAs主要属于全球广泛流行的G9-Ⅲ(VP7基因进化树支Ⅲ)。本研究于2010年通过基因测序从北京腹泻儿童中再次鉴定了一例RVA G9-Ⅵ。为了解北京儿童中G9-Ⅵ再次流行的情况,本研究对国内外人G9型RVAs的VP7基因进行多序列比对分析,在G9-Ⅲ和G9-Ⅵ病毒各自VP7基因序列比较保守、彼此间变异集中的区域设计杂交探针,经PCR合成地高辛标记的cDNA探针,建立区分G9-Ⅲ和G9-Ⅵ的斑点杂交方法;结合本实验室前期建立的RVA常见G和P基因型杂交鉴定方法,对2011-2012年门诊腹泻就诊患儿中RVAs的流行进行调查。结果显示G9型检出率最高(43.5%,57/131),其次是G3(30.5%)、G1(12.2%)和G2(11.5%),未发现G4型。P分型结果显示P[8]为主要基因型(85.2%),其次P[4]型(14.8%),未发现P[6]型。对57例G9型RVAs全部进行G9-Ⅲ和G9-Ⅵ杂交鉴定。结果显示:G9-Ⅵ占96.5%,取代G9-Ⅲ(3.5%)成为优势流行的G9型病毒。从VP7基因进化树图上看到,本研究鉴定的北京人RVA G9-Ⅵ同国内外近期多地出现的人RVA G9-Ⅵ进化关系密切,并且和加拿大的猪RVA株F7P4进化距离近。国内外新近重新出现的人G9-Ⅵ RVAs是否在进化过程中获得了比以往广泛流行的RVA G9-Ⅲ更强的传播能力或致病力,值得进一步研究。 展开更多

关键词 轮状病毒 地高辛 斑点杂交 G9

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北京地区儿童2型人博卡病毒与急性腹泻的相关性 被引量：2

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作者 德日 刘立颖 +6 位作者 钱渊 贾立平 董慧瑾 朱汝南 刘玉辉 吕岩青 赵林清 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期945-949,共5页

目的探讨2型人博卡病毒(HBoV2)感染与5岁以下儿童急性腹泻的相关性。方法本研究为前瞻性病例对照研究,似2016年5至12月首都儿科研究所附属儿童医院≤5岁的急性腹泻患儿为病例组,同时期北京龙潭社区医疗服务中心健康查体的相应年龄段无... 目的探讨2型人博卡病毒(HBoV2)感染与5岁以下儿童急性腹泻的相关性。方法本研究为前瞻性病例对照研究,似2016年5至12月首都儿科研究所附属儿童医院≤5岁的急性腹泻患儿为病例组,同时期北京龙潭社区医疗服务中心健康查体的相应年龄段无腹泻症状的儿童作为对照组;病例组与对照组各分为8个年龄组:≤1月龄、>1—3月龄、>3~6月龄、>6—12月龄、>1—2岁、>2~3岁、>3—4岁及>4—5岁,每年龄组30例,各入组240例。收集粪便标本,利用实时荧光PCR方法进行包括HBoV2在内的7种腹泻相关病毒筛查;根据循环阈值(Ct)估计HBoV2病毒载量;应用t检验比较组间差异。结果病例组240例患儿粪便标本中,病毒阳性检出率从高到低依次是诺如病毒16.7%(40例)、轮状病毒10.8%(26例)、HBoV27.5%(18例)、腺病毒7.1%(17例)、星状病毒6.3%(15例)、副肠孤病毒3.8%(9例)和爱知病毒0.4%(1例)。病例组HBoV2阳性检出率与对照组(5.0%,12例)差异无统计学意义(x^2=1.280,P=0.258),相应的各年龄组间差异也均无统计学意义(P均>0.05),但病例组HBoV2阳性标本的平均病毒载量明显高于对照组[1x10。拷贝数/L(Ct值25.8)比lx10^5拷贝数/L(Ct值33.8),t=O.597,P=0.000]。结论诺如病毒、轮状病毒依然是儿童急性腹泻的重要病毒病原。与低病毒载量的HBoV2相比,高载量的HBoV2更易在5岁以下儿童中引起急性腹泻。 展开更多

关键词 儿童 腹泻 人博卡病毒 病例对照研究

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从急性腹泻儿童中检出的人博卡病毒2型的研究 被引量：2

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作者 赵慧 赵林清 +5 位作者 孙宇 钱渊 刘立颖 贾立平 张又 董慧瑾 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期382-388,共7页

为了调查北京地区急性腹泻患儿中人博卡病毒2型(HBoV2)的流行情况并了解这一病毒的基因组特征,本研究收集2010年11月至2011年10月到首都儿科研究所附属儿童医院门诊就诊的急性腹泻患儿的粪便标本553例,采用荧光实时PCR进行HBoV2DNA的检... 为了调查北京地区急性腹泻患儿中人博卡病毒2型(HBoV2)的流行情况并了解这一病毒的基因组特征,本研究收集2010年11月至2011年10月到首都儿科研究所附属儿童医院门诊就诊的急性腹泻患儿的粪便标本553例,采用荧光实时PCR进行HBoV2DNA的检测。选择2例病毒载量较高的阳性标本进行HBoV2各基因片段的扩增并测序。将所测到的序列进行拼接后得到完整的基因组序列并与GenBank中的相关序列进行比较分析。结果显示,553例粪便标本中共检出HBoV2阳性标本15例,阳性率为2.7%;各年龄组中,3～6月龄患儿中的HBoV2DNA阳性检出率最高(4.1%);所检年度中,7月份阳性检出率最高(7.0%);15例HBoV2检测阳性的患儿年龄均在2岁以下,其中4例患儿同时检出了诺如病毒,3例患儿同时检出了轮状病毒,1例检出了腺病毒。经测序得到两株接近完整的HBoV2基因组序列BJQ19和BJQ390;序列分析表明,这两株序列的同源性为99.2%,与GenBank中的FJ375129同源性最高,分别为99.1%和99.2%,为典型的HBoV2。上述结果表明,北京地区部分儿童的急性腹泻可能与HBoV2感染相关,且HBoV2感染在低年龄组儿童中更为常见。 展开更多

关键词 人博卡病毒2型 急性腹泻 儿童 基因序列

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儿童胃肠型流感与轮状病毒性肠炎的临床特征比较 被引量：2

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作者 周丽君 黄辉 +3 位作者 邓莉 郑崇光 孙宇 董慧瑾 《亚洲儿科病例研究》 2019年第3期15-20,共6页

目的:比较儿童胃肠型流感及有发热症状的轮状病毒性肠炎临床特征,以提高临床诊断水平。方法:回顾性分析2017年12月至2018年1月胃肠型流感及轮状病毒性肠炎患儿的临床资料。结果:1) 胃肠型流感102例,轮状病毒性肠炎268例,胃肠型流感组发... 目的:比较儿童胃肠型流感及有发热症状的轮状病毒性肠炎临床特征,以提高临床诊断水平。方法:回顾性分析2017年12月至2018年1月胃肠型流感及轮状病毒性肠炎患儿的临床资料。结果:1) 胃肠型流感102例,轮状病毒性肠炎268例,胃肠型流感组发病年龄均数为3.9 &#177;2.3岁,轮状病毒性肠炎组发病年龄均数为1.9 &#177;1.8岁,组间差异存在统计学意义(t = 8.2, P 0.05);2) 全部病例均有发热,以热峰超过39℃界定为高热,胃肠型流感高热发生率为88.2% (90/102),轮状病毒性肠炎组74.6% (200/268),组间差异存在统计学意义(X2 = 8.1, P 2 = 86.2, P <0.01)。结论:胃肠型流感与轮状病毒性肠炎在发病季节上有交叉,临床特征类似,但发热热峰、腹泻及呕吐频次、疾病严重程度有所不同,快速病原学检测有助于鉴别诊断。 展开更多

关键词 儿童 胃肠型流感 轮状病毒性肠炎 临床特征

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2014—2019年北京市急性腹泻儿童中诺如病毒感染特征分析

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作者 贾立平 赵林清 +5 位作者 邓莉 刘立颖 董慧瑾 黄辉 金凤华 钱渊 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2022年第5期508-513,共6页

目的了解2014—2019年北京市急性腹泻儿童中诺如病毒(Norovirus,NoV)的感染特征。方法收集2014年4月至2019年12月于首都儿科研究所附属儿童医院以急性腹泻为主要症状的患儿粪便标本,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-poly... 目的了解2014—2019年北京市急性腹泻儿童中诺如病毒(Norovirus,NoV)的感染特征。方法收集2014年4月至2019年12月于首都儿科研究所附属儿童医院以急性腹泻为主要症状的患儿粪便标本,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)筛查NoV;阳性标本进行NoV VP1基因及RdRp基因扩增及序列测定,所测得的序列应用在线分型工具Norovirus Genotyping Tool 2.0进行基因分型。结果本研究共收集2577例急性腹泻儿童粪便标本,NoV核酸检测阳性的484例(18.78%,484/2577);NoV感染全年均可发生,具有明显的季节分布,流行高峰在秋冬季节。NoV的检出无性别差异(χ^(2)=1.77,P=0.183)。其中有399例得到了VP1区分型,结果显示有11个基因型,主要为GII基因群(98.25%,392/399),GII.4 Sydney型为主(52.13%,208/399),其次为GII.3型(19.8%,79/399)、GII.2型(18.5%,74/399)。267例完成了RdRp区分型,结果显示有10个基因型,以GII.P31型为主(57.3%,153/267),其次为GII.P12型(15.36%,41/267)及GII.P16型(14.98%,40/267)。双基因分型结果显示存在16种组合方式,主要为GII.4 Sydney[P31](53.18%,142/267),GII.3[P12]检出率呈下降趋势,而GII.4 Sydney[P16]检出率逐渐增高。结论NoV是北京市2014—2019年儿童急性腹泻的重要病原,流行的基因型别多样。 展开更多

关键词 儿童 诺如病毒 急性腹泻 基因分型

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