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人骨髓间充质干细胞的体外培养、鉴定及成骨分化 被引量：23
1
作者 刘伟 刘萌 +3 位作者 祝劲松 郝红伟 董宁征 周海斌 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第14期2515-2519,共5页
背景:国内外对骨髓间充质干细胞的体外成骨诱导分化研究手段、测定指标均不够全面。目的:建立并完善一整套人骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定方法,探讨其体外成骨分化能力。方法:采用密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞,流式... 背景:国内外对骨髓间充质干细胞的体外成骨诱导分化研究手段、测定指标均不够全面。目的:建立并完善一整套人骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定方法,探讨其体外成骨分化能力。方法:采用密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面表型。传至第3代时更换成骨诱导培养基进行成骨分化诱导。结果与结论:人骨髓间充质干细胞生长旺盛,传代后增殖旺盛,第3代骨髓间充质干细胞表面表型CD44、CD73、CD90表达阳性,CD34表达阴性。诱导后的成骨细胞碱性磷酸酶活性增加,Gomori、Vonkossa、茜素红染色均阳性。RT-PCR检测诱导后细胞有Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素、骨唾液酸蛋白、骨桥蛋白及骨连接蛋白基因的表达,证明了人骨髓间充质干细胞成功向成骨方向分化。表明实验建立了一整套稳定、成熟的骨髓间充质干细胞分离、培养、扩增方案。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 骨髓 分离培养 成骨细胞 成骨分化
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脑肠肽、脑肠轴在肠易激综合征模型中作用机制研究 被引量：18
2
作者 朱雪萍 陈卫昌 +1 位作者 朱晓黎 董宁征 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期236-239,共4页
目的揭示脑肠肽、脑肠轴在肠易激综合征(IBS)模型发病机制中的作用。方法随机将乳鼠分成IBS模型组和正常对照组2组,各10只。模型组用综合因素干预的方法造模,对照组则不做任何干预。采用半定量逆转录多聚酶链反应检测两组幼鼠结肠、脊... 目的揭示脑肠肽、脑肠轴在肠易激综合征(IBS)模型发病机制中的作用。方法随机将乳鼠分成IBS模型组和正常对照组2组,各10只。模型组用综合因素干预的方法造模,对照组则不做任何干预。采用半定量逆转录多聚酶链反应检测两组幼鼠结肠、脊髓、丘脑组织中脑肠肽酪神经肽Y(NPY)和降钙素基因相关肽(cGRP)mRNA的表达。结果IBS模型组中NPY在结肠、脊髓、丘脑组织中mRNA表达明显较正常对照组降低,差异有统计学意义(t=8.55～12.65,P均<0.01);cGRP在脑肠轴各个层面组织的表达IBS组明显较正常对照组增强,差异有统计学意义(t=12.41～14.41,P均<0.01)。结论脑肠肽在IBS模型的发生、发展中起重要作用,为进一步深入研究儿童IBS的发病机制提供实验依据。 展开更多
关键词 脑肠肽 脑肠轴 肠易激综合征 动物模型 发病机制
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抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21基因克隆及单链抗体的构建和表达 被引量：9
3
作者 安广宇 董宁征 阮长耿 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期200-203,共4页
目的将能与血小板膜糖蛋白 a特异结合的单克隆抗体 SZ- 2 1构建成单链抗体 ,为其临床应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链反应 ,扩增并克隆 SZ- 2 1的可变区基因 VH、VL ,经测序后构建 SZ- 2 1单链抗体 (SZ- 2 1Sc Fv) ,在大肠杆... 目的将能与血小板膜糖蛋白 a特异结合的单克隆抗体 SZ- 2 1构建成单链抗体 ,为其临床应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链反应 ,扩增并克隆 SZ- 2 1的可变区基因 VH、VL ,经测序后构建 SZ- 2 1单链抗体 (SZ- 2 1Sc Fv) ,在大肠杆菌中进行表达。EL ISA和 Western印迹检测其与血小板的结合特性。结果 VH、VL 可变区基因符合小鼠抗体可变区特征 ,SZ- 2 1Sc Fv基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外 ,主要以包涵体形式存在 ,表达量占菌体蛋白的 2 1%。经过变性和复性后 ,该单链抗体保留了与血小板特异结合的能力。结论成功表达了 SZ- 2 1单链抗体 ,该小分子抗体具有特异结合血小板的能力 ,有望用于抗血栓治疗。 展开更多
关键词 单链抗体 SCFV 原核表达 单克隆抗体 SZ-21基因克隆 抗血小板膜糖蛋白
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血栓性血小板减少性紫癜及其发病机制 被引量：12
4
作者 董宁征 吴庆宇 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期499-500,共2页
关键词 血栓性血小板减少性紫癜 发病机制 内皮细胞损伤
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一例两种新的ADAMTS13基因突变导致的遗传性血栓性血小板减少性紫癜 被引量：11
5
作者 刘芳 金洁 +2 位作者 董宁征 王云贵 阮长耿 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期521-524,共4页
目的对1例高度可疑的遗传性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者的vWF裂解蛋白酶(ADAMTS13,vWF-cp)基因突变进行检测,以明确诊断并制定相应的治疗方案。方法用残余胶原结合实验(residual-collagen binding assay)动态检测1例TTP患者ADAMTS1... 目的对1例高度可疑的遗传性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者的vWF裂解蛋白酶(ADAMTS13,vWF-cp)基因突变进行检测,以明确诊断并制定相应的治疗方案。方法用残余胶原结合实验(residual-collagen binding assay)动态检测1例TTP患者ADAMTS13的活性和抑制物水平。用PCR方法扩增ADAMTS13的29个外显子及外显子邻近处的内含子,并直接测序检测突变。对其亲属的基因组DNA在患者突变区域扩增并测序。结果患者ADAMTS13活性降低,未发现抑制物存在。测序显示患者的ADAMTS13的凝血酶敏感蛋白1(TSP1)基序重复区第21外显子碱基2708处和25号外显子碱基3283处出现C→T的错义突变(均为纯合子),分别导致该碱基参与编码的丝氨酸密码子(TCG)变为亮氨酸密码子(TTG)(S903L),精氨酸密码子(CGG)变为色氨酸密码子(TGG)(R1095W)。患者父母上述突变位置处的基因均呈杂合状态,其兄的该段碱基序列正常,并且在采集的25位家族成员中共发现11名上述突变位点的正常携带者。结论该患者是由于ADAMTS13基因纯合子错义突变导致翻译发生错误所致的遗传性TTP。 展开更多
关键词 血栓性血小板减少性紫癜 遗传性 vWF裂解蛋白酶 基因突变 血栓性血小板减少性紫癜 ADAMTS13 遗传性 患者父母 凝血酶敏感蛋白 碱基序列 动态检测
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血栓性血小板减少性紫癜患者vWF裂解蛋白酶抗原和活性的检测及意义 被引量：10
6
作者 刘芳 BF Hendrik +4 位作者 董宁征 白霞 V Karen D Hans 阮长耿 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期154-157,共4页
目的研究血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)抗原含量和活性在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者及遗传性 TTP 家族突变携带者中变化的情况。方法用残余胶原结合实验(RCBA)检测13例 TTP 患者共28份血浆标本[含血浆置换(PE)前后]及10... 目的研究血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)抗原含量和活性在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者及遗传性 TTP 家族突变携带者中变化的情况。方法用残余胶原结合实验(RCBA)检测13例 TTP 患者共28份血浆标本[含血浆置换(PE)前后]及10例携带者的 ADAMTS13活性;用新近建立的三抗体夹心酶联免疫反应法检测标本的 ADAMTS13抗原含量。结果正常对照组 ADAMTS13含量为(600.93±145.36)mU/ml(设白种人混合血浆的 ADAMTS13抗原含量为1000mU/ml),活性为(74.79±11.81)%。遗传性 TTP 患者 ADAMTS13抗原含量和活性治疗前和发病间期均明显减低,PE 后恢复;其家族中携带者 ADAMTS13抗原含量为(331.40±109.85)mU/ml,活性为(66.79±12.82)%(与对照组比较,P 值分别<0.01和>0.05);原发性 TTP 患者 PE 前 ADAMTS13抗原含量为(98.7±82.08)mU/ml,活性为(22.23±19.07)%(与对照组比较,P 值均<0.01);PE 后ADAMTS13 抗原含量为(449.4±232.33)mU/ml,活性为(60.92±22.33)%(与对照组比较,P 值分别<0.01和>0.05);1例继发性 TTP 患者 PE 后 ADAMTS13抗原含量远高于正常,活性仅为6.00%结论治疗前的 TTP 患者 ADAMTS13抗原含量和活性均明显减低。大多数患者两指标变化趋势一致,也有个别患者两指标变化趋势相反,前者可能因为遗传因素或体内免疫系统的廓清作用,后者可能因为抗 ADAMTS13抗体仅抑制了 ADAMTS13的活性而未影响其抗原的含量或其他未知原因所致。 展开更多
关键词 紫癜 血栓性血小板减少性 血管性血友病因子裂解蛋白酶 活性 抗原
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纤维蛋白原α链Arg16His突变导致遗传性异常纤维蛋白原血症 被引量：10
7
作者 赵小娟 王兆钺 +7 位作者 江明华 张威 曹丽娟 马珍妮 董宁征 白霞 余自强 阮长耿 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期154-156,共3页
目的对1例遗传性异常纤维蛋白原血症家系进行表型和基因型分析。方法用血凝仪检测先证者家系3代6人外周血活化部分凝血酶时间（APTY）、凝血酶原时间（胛）和凝血酶时间（TT）。纤维蛋白原活性和抗原分别用Clauss法和免疫比浊法检测，We... 目的对1例遗传性异常纤维蛋白原血症家系进行表型和基因型分析。方法用血凝仪检测先证者家系3代6人外周血活化部分凝血酶时间（APTY）、凝血酶原时间（胛）和凝血酶时间（TT）。纤维蛋白原活性和抗原分别用Clauss法和免疫比浊法检测，Western blot检测血浆纤维蛋白原及其片段分布。PCR扩增纤维蛋白原基因FGA、FGB和FGG所有外显子及其侧翼序列，PCR产物纯化后直接测序进行基因分析。结果先证者APTT、PT正常，而TT明显延长；纤维蛋白原抗原正常，而纤维蛋白原活性降低，先证者母亲和胞姐表型与之相似。基因分析显示先证者纤维蛋白原FGA基因2号外显子g1233→a杂合碱基改变（密码子CGT→CAT），导致Argl6His错义突变，该突变来源于母系。结论纤维蛋白原α链Argl6His杂合错义突变是遗传性异常纤维蛋白原血症的分子基础之一。 展开更多
关键词 遗传性异常纤维蛋白原血症 凝血酶时间 纤维蛋白原 基因突变
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基因工程IFNα_(2a)和IFNα_(2b)对肿瘤细胞生长的抑制作用 被引量：5
8
作者 杨吉成 李丽娥 +2 位作者 盛伟华 董宁征 徐伦 《实用癌症杂志》 1999年第3期164-166,共3页
为了研究不同品牌不同亚型基因工程α干扰素的抗肿瘤效应，采用ＭＴＴ法将不同浓度的α干扰素分别对５种肿瘤细胞进行生长抑制实验。结果表明不同品牌的１００００ＩＵ／ｍｌ，１０００ＩＵ／ｍｌ，１００ＩＵ／ｍｌ的ＩＦＮα２ａ... 为了研究不同品牌不同亚型基因工程α干扰素的抗肿瘤效应，采用ＭＴＴ法将不同浓度的α干扰素分别对５种肿瘤细胞进行生长抑制实验。结果表明不同品牌的１００００ＩＵ／ｍｌ，１０００ＩＵ／ｍｌ，１００ＩＵ／ｍｌ的ＩＦＮα２ａ或ＩＦＮα２ｂ对人脑胶质瘤细胞（ＳＨＧ４４），人骨肉瘤细胞（ＨＯＳ８６０３），人白血病细胞（ＨＬ６０），红白血病细胞（Ｋ５６２）和淋巴瘤细胞（Ｒａｊｉ）的生长均有不同程度的抑制作用。其抑制率分别为２０％，１０％，５％左右。进口和国产的不同品牌ＩＦＮα２ａ和ＩＦＮα２ｂ对上述５种肿瘤细胞株均有较明显的生长抑制效应，而且抑制的百分率均相近。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 生长抑制率 IFNα2a IFNα2b
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中国汉族家族性肥厚型心肌病人群MYH7基因Arg723Gly突变分析 被引量：7
9
作者 郑冬冬 杨俊华 +8 位作者 董宁征 杨向军 宋建平 蒋廷波 程绪杰 李红霞 周炳元 赵彩明 蒋文平 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期208-211,共4页
目的研究中国汉族人群家族性肥厚型心肌病的致病基因突变位点,分析基因型与表型的关系。方法对5个肥厚型心肌病家系的先证者进行β-肌球蛋白重链基因扫描,聚合酶链反应扩增其功能区的外显子片段,双脱氧末段终止法测序。对阳性结果患者... 目的研究中国汉族人群家族性肥厚型心肌病的致病基因突变位点,分析基因型与表型的关系。方法对5个肥厚型心肌病家系的先证者进行β-肌球蛋白重链基因扫描,聚合酶链反应扩增其功能区的外显子片段,双脱氧末段终止法测序。对阳性结果患者进行家系调查,收集临床资料,分析其临床表型。结果在1个家系中发现Arg723Gly杂合突变,而正常对照组同一位置未见异常,此为我国患者中首次发现Arg723Gly突变。结论β-肌球蛋白重链可能是我国家族性肥厚型心肌病的常见致病基因之一。Arg723Gly所致肥厚型心肌病外显率高、临床症状出现较早、进展较快、易发生心力衰竭、预后较差,心脏室、房扩大也较常见,是一种恶性突变。 展开更多
关键词 心肌病 肥大性 家族性? 肌球蛋白重链 突变 基因型 表型
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纤维蛋白原检测的指南 被引量：11
10
作者 Mackie IJ Kitchen S +2 位作者 Machin SJ Lowe SDO 董宁征 《国外医学（输血及血液学分册）》 2004年第2期97-101,共5页
英国血液学界通常通过纤维蛋白原的测定来判断纤维蛋白量的降低和质的异常,评估出血危险性.纤维蛋白原的升高通常预示各种缺血性事件的存在,建议进行纤维蛋白原检测就是基于这种观点.
关键词 纤维蛋白原 检测 急性期反应因子 多态性 G-455A
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人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响 被引量：8
11
作者 董宁征 崔宇杰 阮长耿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期65-67,共3页
目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPI-Ib/IIIa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究。方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗... 目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPI-Ib/IIIa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究。方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响。结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集。结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体。 展开更多
关键词 血小板膜糖蛋白IIB/IIIA 噬菌体展示 FAB 血小板聚集
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氧化高密度脂蛋白通过MAPKs信号转导途径诱导ECV304细胞表达组织因子 被引量：6
12
作者 卜梓斌 姜志胜 +10 位作者 马珍妮 董宁征 赵战芝 季顺东 沈飞 江淼 王静 谢丽倩 冯雪娟 陈晶晶 阮长耿 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期636-641,共6页
目的:探讨氧化高密度脂蛋白(oxHDL)对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞表达组织因子(TF)的影响及其机制。方法:实验分为阴性对照组、阳性对照组(加组胺)、HDL、oxHDL 4组,ECV304细胞经不同浓度oxHDL、HDL(10-120 mg/L)和组胺(1×10-9-1... 目的:探讨氧化高密度脂蛋白(oxHDL)对人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞表达组织因子(TF)的影响及其机制。方法:实验分为阴性对照组、阳性对照组(加组胺)、HDL、oxHDL 4组,ECV304细胞经不同浓度oxHDL、HDL(10-120 mg/L)和组胺(1×10-9-1×10-4mol/L)处理不同时间(2-8 h)后,采用实时定量PCR(RQ-PCR)和Western bloting方法检测TF表达。同时,分别应用SP600125[c-Jun氨基端激酶(JNK)特异性抑制剂]、SB203580[p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性抑制剂]、PD98059[细胞外信号调节激酶(ERK1/2)特异性抑制剂],观察其对oxHDL和组胺诱导的ECV304细胞表达TF的影响。结果:正常ECV304细胞未检测到TF,经组胺处理1 h后TF mRNA表达明显增加,在1×10-5mol/L时最高,约为1×10-9mol/L时的4.8倍。oxHDL以时间和浓度依赖性方式诱导ECV304细胞TF mRNA表达,在oxHDL20 mg/L时最高,为10 mg/L时的1.8倍,在第6 h时TF mRNA表达水平为第2 h的5.3倍(P<0.05),并在20 mg/L时显著刺激ECV304细胞TF蛋白表达,为40 mg/L时的1.5倍,而HDL没有此效应。MAPKs(JNK、p38 MAPK、ERK1/2)抑制剂可部分解除oxHDL诱导ECV304细胞TF表达的效应,TF分别下调表达至原来的19.0%、5.0%和13.0%(P<0.05)。结论:oxHDL能以浓度和时间依赖性方式诱导ECV304细胞产生TF,其机制可能通过JNK、p38 MAPK和ERK1/2所介导。 展开更多
关键词 组织因子 脂蛋白类 HDL p38 MAPK通路 ERK 1/2通路 JNK通路
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Securinine induced apoptosis in human leukemia HL-60cells 被引量：7
13
作者 董宁征 顾振纶 +1 位作者 周文轩 郭次仪 《中国药理学报》 CSCD 1999年第3期267-270,共4页
目的：研究一叶秋碱能否诱导ＨＬ６０细胞凋亡．方法：用ＭＴＴ法检测一叶秋碱对细胞增殖影响；应用流式细胞仪检测凋亡细胞数；采用琼脂糖凝胶电泳法观测ＤＮＡ碎片；透射电镜观察凋亡的形态改变．结果：一叶秋碱５－８０ｍｇ·... 目的：研究一叶秋碱能否诱导ＨＬ６０细胞凋亡．方法：用ＭＴＴ法检测一叶秋碱对细胞增殖影响；应用流式细胞仪检测凋亡细胞数；采用琼脂糖凝胶电泳法观测ＤＮＡ碎片；透射电镜观察凋亡的形态改变．结果：一叶秋碱５－８０ｍｇ·Ｌ－１能诱导ＨＬ６０细胞凋亡．电镜观察到典型的凋亡形态学改变，电泳呈现出阶梯状条带，流式细胞仪检测到凋亡率随剂量的增高而升高．ＭＴＴ法示一叶秋碱抑制ＨＬ６０细胞增殖，并且呈时间、剂量依赖性，药物作用１２ｈ的ＩＣ５０（９５％可信区间）分别为２７（１５－４７）ｍｇ·Ｌ－１． 展开更多
关键词 一叶秋碱 细胞凋亡 HL-60细胞 白血病 DNA断片
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一叶秋碱的抗肿瘤作用及其机制研究 被引量：3
14
作者 董宁征 顾振纶 《中成药》 CAS CSCD 1999年第4期193-195,共3页
采用小鼠移植性肿瘤ＥＣ模型，观察一叶秋碱腹腔注射对荷瘤小鼠的抑瘤效应，并以人早幼粒细胞白血病细胞株ＨＬ６０为研究对象，采用ＭＴＴ法，ＤＮＡ电泳及荧光显微镜等实验手段，研究一叶秋碱抑瘤作用的可能机理，结果显示：一叶秋碱... 采用小鼠移植性肿瘤ＥＣ模型，观察一叶秋碱腹腔注射对荷瘤小鼠的抑瘤效应，并以人早幼粒细胞白血病细胞株ＨＬ６０为研究对象，采用ＭＴＴ法，ＤＮＡ电泳及荧光显微镜等实验手段，研究一叶秋碱抑瘤作用的可能机理，结果显示：一叶秋碱对ＥＣ有抑制作用，平均抑瘤率达２５．３％～６２．２％；一叶秋碱处理后的ＨＬ６０细胞出现核固缩、核碎裂，ＤＮＡ电泳显示梯状条带，提示一叶秋碱具有抗肿瘤作用，诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。 展开更多
关键词 一叶秋碱 细胞凋亡 HL60细胞 白血病
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急性心肌梗死和脑梗死患者血浆中ADAMTS13的测定及意义 被引量：6
15
作者 董宁征 刘芳 +1 位作者 季顺东 阮长耿 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期161-163,共3页
目的研究急性心肌梗死（AMI）及急性脑梗死（AIS）患者血浆中血管性血友病因子（vWF）裂解酶（ADAMTS13）抗原和活性变化情况，探讨ADAMTS13在动脉血栓性疾病患者发病中的作用及意义。方法用Frests—WF73试剂盒检测血浆中ADAMTS13的活... 目的研究急性心肌梗死（AMI）及急性脑梗死（AIS）患者血浆中血管性血友病因子（vWF）裂解酶（ADAMTS13）抗原和活性变化情况，探讨ADAMTS13在动脉血栓性疾病患者发病中的作用及意义。方法用Frests—WF73试剂盒检测血浆中ADAMTS13的活性；用ELISA法检测ADAMTS13抗原含量；并对患者血浆vWF多聚物进行电泳分析。结果正常对照组、AMI组和AIS组ADAMTS13抗原含量分别为（878±198）、（618±188）和（702±155）U／L；活性分别为（81．7±13．9）％，（59．2±22．1）％和（65．4±15．8）％。AMI组和AIS组ADAMTS13抗原含量及活性均显著低于正常对照组（P〈0．01）；vWF多聚物分析未见异常。结论AMI及AIS患者血浆ADMATS13抗原及活性均降低，提示ADAMTS13的减少与动脉血栓性疾病的发病相关。 展开更多
关键词 血管性血友病因子裂解酶 心肌梗死 脑梗死
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血管性血友病因子裂解蛋白酶的稳定表达及其活性检测 被引量：6
16
作者 马珍妮 董宁征 +3 位作者 张敬宇 苏健 汪安友 阮长耿 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期244-248,共5页
本研究旨在得到重组的血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13),进一步研究其在血栓止血中的作用。利用脂质体将编码ADAMTS13全长序列的重组质粒pSecTag-ADAMTS13转染Hela细胞,用潮霉素(Hygromycin-B)筛选得到阳性克隆细胞株,并扩大培养,... 本研究旨在得到重组的血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13),进一步研究其在血栓止血中的作用。利用脂质体将编码ADAMTS13全长序列的重组质粒pSecTag-ADAMTS13转染Hela细胞,用潮霉素(Hygromycin-B)筛选得到阳性克隆细胞株,并扩大培养,收集上清。利用Ni-NTA琼脂糖柱、梯度咪唑淋洗法纯化蛋白,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定纯化产品纯度和免疫学活性,采用GST-His双抗夹心法测定蛋白剪切活性。结果显示,成功获得一株能恒定分泌重组ADAMTS13蛋白的细胞株ADAMTS2-4,每1L培养上清可纯化得到5.8mg重组蛋白。Western blotting结果显示,ADAMTS13多抗能与重组蛋白在190kDa处显单一条带,并且蛋白具有6.4U/mL的剪切活性(每毫升正常人混合血浆中ADAMTS13活性为1U)。重组蛋白具有较好的免疫原活性和酶活性,为进一步研究ADAMTS13作用机理和运用奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 血管性血友病因子裂解蛋白酶 真核表达 重组蛋白
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双黄连粉针剂体外抗柯萨奇病毒的初步研究 被引量：7
17
作者 吕海涛 严文华 +3 位作者 杨吉成 盛伟华 李丽娥 董宁征 《苏州医学院学报》 1998年第6期562-564,共3页
在Wish和Vero细胞上采用微量细胞病变抑制法研究了双黄连抗柯萨奇病毒作用，结果表明：双黄连0．75mg／ml在两种细胞培养上，能直接杀伤病毒和阻止病毒吸附细胞，而且能对细胞内低滴度柯萨奇病毒的复制起抑制作用．
关键词 双黄连 柯萨奇病毒 实验 中医药疗法 粉针剂
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内皮素及其受体拮抗剂对新生大鼠心室肌细胞起搏电流及其基因表达的影响 被引量：5
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作者 李红霞 韩莲花 +6 位作者 杨向军 赵欣 董宁征 蒋彬 宋建平 刘志华 蒋文平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期707-711,共5页
目的:运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(PCR),研究内皮素-1(ET-1)及其受体拮抗剂对新生大鼠心室肌起搏电流(If)及其基因表达的影响。方法:分离1-3d新生大鼠的心室肌细胞;测定超极化激活的环核苷酸门控通道(HCN)亚型1、HCN2... 目的:运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(PCR),研究内皮素-1(ET-1)及其受体拮抗剂对新生大鼠心室肌起搏电流(If)及其基因表达的影响。方法:分离1-3d新生大鼠的心室肌细胞;测定超极化激活的环核苷酸门控通道(HCN)亚型1、HCN2、HCN3和HCN4的表达情况;记录If并研究其特性。其次分别用不同浓度(0、1、10、100nmol/L)ET-1刺激细胞3h,用100nmol/LET-1刺激细胞不同时间(0、0.5、1、3、6h),用100nmol/LET-1加1000nmol/LETA拮抗剂(BE-18257B)或ETB拮抗剂(IRL-1038)刺激心肌细胞3h,观察ET-1对If和HCN的影响。结果:HCN1、HCN2、HCN3和HCN4在总HCN的表达中所占比例分别为(0.23±0.01)%、(83.58±0.04)%、(0.79±0.01)%、(15.44±0.01)%。全细胞膜片钳记录到超极化激活、4mmol/LCsCl可阻断If;10、100nmol/LET-1刺激3h后,HCN2分别增加0.1、2倍,HCN4增加0.1、0.5倍;相同浓度ET-1刺激不同时间后,HCN2增加0.3、1、5、5.1倍,HCN4增加0.1、0.6、2、2.1倍,而ET-1对HCN1和HCN3无显著影响;加BE-18257B后HCN2和HCN4表达明显降低,If减小;而IRL-1038对HCN表达和If无显著影响。结论:(1)新生大鼠心室肌HCN的表达以HCN2和HCN4为主,并有超极化激活的If;(2)ET-1使其HCN2和HCN4表达增加,If增大,其作用主要通过ETA受体实现。 展开更多
关键词 内皮缩血管肽类 内皮缩血管肽类受体拮抗剂 大鼠 心室肌细胞 起搏电流
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胺碘酮对乳鼠心室肌细胞起搏电流及其基因表达的影响 被引量：6
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作者 李红霞 杨向军 +7 位作者 韩莲花 周亚峰 赵欣 蒋彬 董宁征 宋建平 刘志华 蒋文平 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期466-470,共5页
目的运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,real-time PCR),研究胺碘酮对乳鼠心室肌细胞起搏电流(funny current,I_f)及其基因表达的影响。方法分离培养乳鼠心室肌细胞,记录 ... 目的运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,real-time PCR),研究胺碘酮对乳鼠心室肌细胞起搏电流(funny current,I_f)及其基因表达的影响。方法分离培养乳鼠心室肌细胞,记录 I_f 并测定超极化激活的环核苷酸门控通道(hyperpolarization-activated cation channel,HCN)亚型1、HCN2、HCN3和 HCN4;分别用0.01、0.1、1、10、100 μmol/L 的胺碘酮刺激细胞3 h 和 10μmol/L胺碘酮分别刺激细胞0、0.5、1、3、6 h,观察胺碘酮对 I_f 和 HCN 的影响。结果 (1)心室肌细胞中,HCN1～4在总 HCN 的表达中所占比例分别为(0.23±0.01)%、(83.58±0.04)%、(0.79±0.01)%和(15.44±0.01)%。(2)不同浓度胺碘酮使I_f 电流密度分别降低(3.1±0.9)%、(9.7±2.4)%、(36.7±5.8)%、(80.3±1.8)%和(85.9±3.1)%;HCN2表达减少(2.1±0.8)%、(8.9±3.6)%、(30.1±4.2)%、(78.3±3.6)%和(81.1±1.9)%;HCN4减少(0.5±0.2)%、(2.1±2.6)%、(8.8±3.2)%、(60.1±4.6)%和(59.6±6.5)%。(3)刺激不同时间后,I_f 分别降低(1.1±0.1)%、(12.6±2.3)%、(80.6±2.2)%和(80.1±2.1)%;HCN2减少(1.0±0.1)%、(9.8±3.9)%、(82.9±4.6)%和(83.9±1.7)%;HCN4减少(0.1±0.1)%、(1.9±1.1)%、(59.4±7.8)%和(60.9±3.1)%;对 HCN1和 HCN3的影响差异无统计学意义。结论胺碘酮呈浓度和时间依赖性降低乳鼠心室肌细胞 HCN2和 HCN4的表达并抑制 I_f,这有利于其抗室性心律失常的治疗。 展开更多
关键词 胺碘酮 心室 电生理学
原文传递
抗P选择素免疫小鼠单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选 被引量：4
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作者 董宁征 安广宇 +1 位作者 江淼 阮长耿 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期119-122,共4页
目的构建抗P-选择素的全套单链抗体噬菌体表面展示文库，从中 筛选与P-选择素高亲合力的单链抗体，为其临床应用奠定基础。方法从P-选择素免疫的小鼠脾淋 巴细胞中提取总RNA，反转录成cDNA后，用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可... 目的构建抗P-选择素的全套单链抗体噬菌体表面展示文库，从中 筛选与P-选择素高亲合力的单链抗体，为其临床应用奠定基础。方法从P-选择素免疫的小鼠脾淋 巴细胞中提取总RNA，反转录成cDNA后，用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因，经重叠延伸反应，装配成单 链抗体（ScFv） 基因，将其克隆到噬菌体载体pHEN1中，构建单链抗体噬菌体抗体库。对抗体库进行亲合筛 选后, ELISA法鉴定抗活化血小板单链抗体。结果经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的富 集过程，phage-ELISA得到一个ELISA活性较高的与P-选择素结合的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。 结论成功构建了全套抗P-选择素单链抗体噬菌体展示文库，并筛选得到具有P-选择素结合能力的单链抗体基因 。 展开更多
关键词 血小板活化 单链抗体 噬菌体抗体库 P-选择素 血栓性疾病 单克隆抗体
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