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金属氧化物避雷器阀片老化缺陷的诊断及原因分析 被引量:59
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作者 韩学坤 陶安培 《高压电器》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期145-147,共3页
结合工程实践介绍了金属氧化物避雷器阀片老化缺陷的诊断方法。缺陷分析过程中,采用了阻性电流测试、红外检测与停电试验结合的方法,并对各项试验的意义、作用进行了相应的阐述,对氧化物避雷器老化缺陷判定进行了有益的探索。
关键词 氧化物避雷器 阀片 阻性电流 红外检测 工频参考电压
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一起SF_6封闭式组合电器故障的原因分析 被引量:29
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作者 陶安培 《高压电器》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期95-96,共2页
介绍了一起由于盘式绝缘子脏污引起的SF6封闭式组合电器(GIS)故障。通过详实的试验,对GIS脏污缺陷的早期发现与预防提出了建议。
关键词 封闭式组合电器 绝缘子 接地故障 气室
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重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析 被引量:15
3
作者 徐俊杰 董大勇 +5 位作者 宋小红 李冠霖 付玲 庄汉澜 陈薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期652-655,共4页
构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,... 构建分泌型表达质粒 ,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原 (rPA)的分泌型表达。重组蛋白位于细菌外周质 ,表达量约占菌体总蛋白的 10 %。以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础 ,建立了rPA的纯化工艺 ,每升培养物可获得约 15mgrPA ,纯度可达 95 %以上。体外细胞毒性试验显示rPA具有较好的生物学活性。用rPA免疫家兔产生的抗血清在体外可抑制炭疽致死毒素的活性 ,表明rPA可诱导机体产生保护性免疫。 展开更多
关键词 炭疽杆菌 炭疽毒素 保护性抗原 表达 纯化 分泌型表达质粒 大肠杆菌
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副猪嗜血杆菌的分离与鉴定及其16S rRNA生物信息学分析 被引量:18
4
作者 朱小宁 余兴龙 +7 位作者 李润成 颜运秋 刘俊琦 罗维 杨大为 王亚 李薇 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期517-520,共4页
从湖南省内送检的疑似患多发性浆膜炎与关节炎的猪病料中分离到12株细菌,细菌学试验证明12株细菌均符合副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)形态、培养和生化特性.根据HPS16SrRNA序列设计引物对12株细菌进行PCR扩增,均得到预期目的... 从湖南省内送检的疑似患多发性浆膜炎与关节炎的猪病料中分离到12株细菌,细菌学试验证明12株细菌均符合副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)形态、培养和生化特性.根据HPS16SrRNA序列设计引物对12株细菌进行PCR扩增,均得到预期目的条带,将扩增片段测序并运用DNAStar软件与GenBank中不同血清型HPS基因序列进行比对,表明其与Genbank中已公布的不同血清型HPS菌株16SrRNA序列的同源性为90.4%~99.9%,其中与血清5型同源性最高,对所测序列与参考序列进行遗传进化树分析,结果表明其中11株属于血清5型HPS. 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分离鉴定 16S RRNA 序列分析
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220 kV电流互感器局部放电缺陷不停电检测与分析 被引量:14
5
作者 李鹏 +1 位作者 陶安培 于全福 《高压电器》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期153-155,160,共4页
介绍了一例220 kV电流互感器电容屏间局部放电故障处理过程,采用红外成像技术与油色谱分析技术结合对故障的成因进行分析:绝缘材质不良、干燥时间不达标、干燥窑使用超容量、绝缘包裹工艺不良,出现较多局部褶皱等。成功避免了一起威胁22... 介绍了一例220 kV电流互感器电容屏间局部放电故障处理过程,采用红外成像技术与油色谱分析技术结合对故障的成因进行分析:绝缘材质不良、干燥时间不达标、干燥窑使用超容量、绝缘包裹工艺不良,出现较多局部褶皱等。成功避免了一起威胁220 kV设备事故的发生,阐述了不停电检测技术对电力系统运行安全的重要性。 展开更多
关键词 电流互感器 局部放电 三比值法
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66kV变压器套管故障分析 被引量:15
6
作者 赵春明 何秋月 +3 位作者 杨代勇 翟艳男 李春雨 《变压器》 北大核心 2018年第10期74-78,共5页
本文中笔者介绍了一起66kV变压器套管故障的解体检查和缺陷情况,分析了试验数据,确定了故障原因,提出了解决方法。
关键词 变压器 套管 油色谱 介质损耗因数
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青霉菌立体选择性环氧化顺丙烯磷酸产生磷霉素 被引量:11
7
作者 石家骥 崔福绵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期353-356,共4页
由土壤中分离出一株青霉 (Penicilliumsp .) ,编号F5,能选择性的将顺丙烯磷酸环氧化为磷霉素 ,在pH7 5、2 8℃、2 80r min条件下培养 6d ,底物浓度 0 3%时 ,产物浓度达 2 2mg mL ,产率 41 % ;底物浓度 0 6%时产率 8%。转化产物经磷... 由土壤中分离出一株青霉 (Penicilliumsp .) ,编号F5,能选择性的将顺丙烯磷酸环氧化为磷霉素 ,在pH7 5、2 8℃、2 80r min条件下培养 6d ,底物浓度 0 3%时 ,产物浓度达 2 2mg mL ,产率 41 % ;底物浓度 0 6%时产率 8%。转化产物经磷霉素敏感菌生物检测 ,TLC检测 ,并与标准品比较 ,确证为磷霉素。 展开更多
关键词 青霉素 顺丙烯磷酸 磷霉素 生物转化 立体选择性环氧化
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猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立 被引量:11
8
作者 蒋大良 余兴龙 +6 位作者 李润成 罗维 颜爱 李杰 刘春红 涂长春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期78-84,共7页
采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rose... 采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包涵体形式表达,分子大小约95kD。Western Blotting分析表明重组蛋白NS3具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%)。以纯化的重组蛋白NS3为抗原初步建立了检测CSFVNS3抗体的间接ELISA方法,检测221份不同猪群和年龄猪的血清样品。检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%。30份存在差异的血清样品用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)进行检测,结果显示IFA检测结果与NS3间接ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒符合率分别为56.67%和43.33%。 展开更多
关键词 CSF V NS3 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 免疫印迹 间接ELISA IFA
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架空地线耐张线夹过热原因分析 被引量:11
9
作者 姜大宇 梁之林 《电力安全技术》 2005年第4期17-22,共2页
关键词 耐张线夹 KV 感应电势 输电线路 输配电线路 架空地线 感应电压 原因分析
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近区短路电流冲击后大容量变压器故障诊断 被引量:12
10
作者 蔺树全 +2 位作者 常群 尚泽禹 陶安培 《高压电器》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期62-68,共7页
文中介绍一起受到近区短路电流冲击的大容量三绕组变压器故障诊断过程,指出变压器内部发生股、匝间短路时,变压器绕组受到冲击电流产生的电应力作用发生移位及变形。油色谱、直流电阻、变比、电容量、绕组变形测试以及空载、短路试验在... 文中介绍一起受到近区短路电流冲击的大容量三绕组变压器故障诊断过程,指出变压器内部发生股、匝间短路时,变压器绕组受到冲击电流产生的电应力作用发生移位及变形。油色谱、直流电阻、变比、电容量、绕组变形测试以及空载、短路试验在判断变压器性能方面均有不同作用。尤其是通过比对变压器绕组的电容量历史数据或同型号变压器电容量数据并结合直流电阻及变压比测试数据,可以有效发现变压器绕组移位变形故障。 展开更多
关键词 绕组 变压器 油色谱 电容量 短路阻抗 空载
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一起金属氧化物避雷器故障分析及应注意问题 被引量:10
11
作者 贾宏智 田野 《吉林电力》 2011年第6期39-40,共2页
通过一起220 kV复合绝缘金属氧化物避雷器进水受潮故障分析,比较了不同检测方法在发现和认定金属氧化物避雷器内部进水受潮和底绝缘劣化两种缺陷同时存在情况下的有效性,及电气量检测金属氧化物避雷器应注意的问题,论述了不同检测技术... 通过一起220 kV复合绝缘金属氧化物避雷器进水受潮故障分析,比较了不同检测方法在发现和认定金属氧化物避雷器内部进水受潮和底绝缘劣化两种缺陷同时存在情况下的有效性,及电气量检测金属氧化物避雷器应注意的问题,论述了不同检测技术相互配合的必要性。 展开更多
关键词 金属氧化物避雷器 红外热成像 底座绝缘 阀片 老化 泄漏电流 热崩溃
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猪细小病毒7型PCR检测方法的建立及应用 被引量:9
12
作者 严美君 杨涛涛 +3 位作者 李润成 屈泰龙 余兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期707-711,共5页
为评估猪细小病毒7型(porcine parvovirus 7,PPV7)在猪群中的流行,根据Gen Bank中PPV7全基因组序列设计1对扩增PPV7 NS1基因的特异性引物,并建立PCR方法。对该引物的退火温度进行优化,且分析其特异性和敏感性。结果显示,在52-72℃退... 为评估猪细小病毒7型(porcine parvovirus 7,PPV7)在猪群中的流行,根据Gen Bank中PPV7全基因组序列设计1对扩增PPV7 NS1基因的特异性引物,并建立PCR方法。对该引物的退火温度进行优化,且分析其特异性和敏感性。结果显示,在52-72℃退火温度范围内该对引物均能特异性扩增出目的基因片段,最低检测限为3.6×10 2copies/L。对不同来源的282份组织样品和来自湖南省4个不同猪场的226份血清样品进行检测,结果,组织样品中PPV7检出率为55.0%(155/282),血清中PPV7检出率为10.2%(23/226)。其中,屠宰猪组织样品中PPV7检出率最高(71.4%),而PPV7感染对猪的健康是否存在影响还不能确定。本研究结果为PPV7流行病学的研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒7型 聚合酶链式反应 应用
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猪葡萄球菌的分离鉴定及其脱落素的研究 被引量:9
13
作者 岑静 王赛 +3 位作者 廖华媛 李润成 余兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期212-216,共5页
为了解患渗出性皮炎仔猪中猪葡萄球菌内表皮脱落素的流行情况,采集2个猪场(A场和B场)29头患病猪的痂皮、痂皮下渗出液共48份,进行了猪葡萄球菌的分离鉴定及其脱落素基因的检测。结果显示,48份样品中共分离到29株含脱落素基因的葡萄球菌... 为了解患渗出性皮炎仔猪中猪葡萄球菌内表皮脱落素的流行情况,采集2个猪场(A场和B场)29头患病猪的痂皮、痂皮下渗出液共48份,进行了猪葡萄球菌的分离鉴定及其脱落素基因的检测。结果显示,48份样品中共分离到29株含脱落素基因的葡萄球菌,经生化鉴定和Gap基因测序分析,表明所有菌株均属于猪葡萄球菌。其中,A场和B场分离的猪葡萄球菌脱落素检出率分别为93.3%和64.3%;A场可检出Exh A、Exh C、Exh D和Shet A共4种脱落素基因,B场可检出Exh A、Exh D和Shet A共3种脱落素基因,但Shet A的检出率在2个猪场中均为最高且与其他3种脱落素大量共存,共存率在A场和B场分别为61.5%和70.0%。2个猪场中痂皮源葡萄球菌中脱落素检出率均高于皮下渗出液,脱落素与渗出性皮炎病具有较高的相关性,其检出率受到2个猪场不同的饲养环境和采样部位的影响,Shet A的高检出率与其他脱落素共存的情况,提示该毒素可能广泛参与了猪葡萄球菌的致病作用。 展开更多
关键词 猪渗出性皮炎 猪葡萄球菌 表皮脱落素
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猪巨细胞病毒的PCR检测及其gB基因特征分析 被引量:9
14
作者 李晶 余兴龙 +5 位作者 李润成 罗维 向卫军 李薇 王亚 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期521-525,共5页
根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全... 根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全长gB基因,并将其克隆到pMD18-T载体,核苷酸序列测定和结果分析表明,所获得PCMVgB基因序列全长2580bp,编码860个氨基酸,与国外PCMV分离株的核苷酸同源性为97.6%~98.9%,氨基酸同源性为97.0%~98.6%,且PCMV可分为2个群:一群为中国湖南株、英国株和德国株,命名为A群;另一群为日本株、瑞士株和西班牙株,命名为B群.抗原表位优势、亲水性、表面可及性预测分析表明,PCMVgB蛋白是理想的免疫学抗原候选蛋白. 展开更多
关键词 猪巨细胞病毒 PCR GB基因 序列分析
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BGP-4协议一致性测试序列生成 被引量:5
15
作者 赵保华 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2005年第22期108-110,共3页
该文讨论了一种协议测试序列生成的方法,它使用有限状态机模型作为协议的形式化描述规范,然后基于UIO序列和中国乡村邮路算法生成测试序列。该文将其应用于对BGP-4协议的一致性测试中。这种方法以协议的形式化描述为输入,易于自动化实现... 该文讨论了一种协议测试序列生成的方法,它使用有限状态机模型作为协议的形式化描述规范,然后基于UIO序列和中国乡村邮路算法生成测试序列。该文将其应用于对BGP-4协议的一致性测试中。这种方法以协议的形式化描述为输入,易于自动化实现,同时生成的测试序列较短,提高了测试效率。 展开更多
关键词 BGP 协议一致性测试 有限状态机 UIO序列
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不同课外体育锻炼行为的大学生一般自我效能感的比较研究 被引量:6
16
作者 岳晓清 杨国庆 +2 位作者 王昂坤 辛振雷 《浙江体育科学》 2010年第1期92-94,共3页
为探讨何种模式的课外体育锻炼有利于培养大学生的一般自我效能感,采用问卷调查对来自3所高校的136名大学生进行了研究,分析课外体育锻炼对一般自我效能感提高的影响因素。参加课外体育锻炼的大学生一般自我效能感明显提高,但性别差异... 为探讨何种模式的课外体育锻炼有利于培养大学生的一般自我效能感,采用问卷调查对来自3所高校的136名大学生进行了研究,分析课外体育锻炼对一般自我效能感提高的影响因素。参加课外体育锻炼的大学生一般自我效能感明显提高,但性别差异不显著(P>0.05);集体锻炼项目优于个人锻炼项目,差异非常显著(P<0.01);课外体育锻炼的强度、时间及经历对大学生一般自我效能感的提高均有影响,差异非常显著(P<0.01)。为提高大学生一般自我效能感应以集体锻炼的体育项目为主、适当加大运动强度和持续时间,并且使大学生持之以恒、养成长期坚持锻炼的好习惯。 展开更多
关键词 大学生 课外体育锻炼 一般自我效能感
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副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的原核表达及其表达产物的免疫原性 被引量:6
17
作者 朱小宁 余兴龙 +7 位作者 盛益颖 李润成 罗维 刘俊奇 刘春红 肖利军 将大良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期158-163,共6页
根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因。将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析。结果表明,D15基因含... 根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因。将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析。结果表明,D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸,与D15基因参考序列的同源性为99.9%。该HPSD15基因的推导氨基酸序列具有典型Omp85蛋白家族的拓扑结构特征。以pMD18D15质粒为模板,用PCR方法扩增HPSD15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE和Western-blot检测诱导物。结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白的分子质量约为94ku,融合蛋白能被HPS阳性血清识别,提示该融合蛋白具有反应原性。昆明小鼠和豚鼠免疫试验结果表明,D15重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 外膜蛋白 原核表达 免疫原性
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猪圆环病毒2型感染性克隆的构建及拯救病毒的双抗体夹心ELISA鉴定
18
作者 贺紫琴 宁李纳 +6 位作者 范杰 凌同 刘甜甜 李欣 陈志雄 黎满香 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期95-101,共7页
旨在构建猪圆环病毒2型(PCV2)感染性克隆,并利用双抗体夹心ELISA对拯救病毒进行鉴定。通过PCR从阳性病料中扩增出PCV2两种基因型2b与2d的全基因组DNA,并分别克隆入pMD-19T载体,获得2个重组质粒,命名为p19T-PCV2b与p19T-PCV2d。利用Sac... 旨在构建猪圆环病毒2型(PCV2)感染性克隆,并利用双抗体夹心ELISA对拯救病毒进行鉴定。通过PCR从阳性病料中扩增出PCV2两种基因型2b与2d的全基因组DNA,并分别克隆入pMD-19T载体,获得2个重组质粒,命名为p19T-PCV2b与p19T-PCV2d。利用SacⅡ酶切获得l 767 bp的PCV2全基因组,并在体外分别用T4连接酶连接而环化,将环状基因组转染至PK-15细胞,传至P6代,利用间接免疫荧光试验(IFA)对拯救病毒进行鉴定,结果表明PCV2b与PCV2d感染性克隆可拯救出病毒。利用PCV2单克隆抗体(单抗)作为捕获抗体,用辣根过氧化酶(HRP)标记的PCV2多抗作为检测抗体,建立检测PCV2病毒粒子的双抗体夹心ELISA方法,用于PCV2拯救病毒的鉴定。将该检测方法与IFA和半数组织细胞感染量(TCID_(50))结果进行对比分析,结果显示,ELISA检测值与Image-J所计算的IFA荧光强度及TCID_(50)的相关系数分别达到0.7和0.8以上,说明该方法与IFA及TCID_(50)检测结果均具有较强的一致性,可以用于PCV2拯救病毒的快速鉴定。 展开更多
关键词 PCV2 感染性克隆 ELISA
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PCV4 Cap抗体ELISA检测方法的建立及血清流行病学调查
19
作者 宋晓晴 邓瑞德 +5 位作者 李欣 李姣 李润成 杜丽飞 董伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2072-2079,共8页
旨在建立一种猪圆环病毒4(porcine circovirus type 4, PCV4)Cap蛋白间接ELISA抗体检测方法,对猪群中PCV4抗体进行检测,并与以往的关于PCV4血清流行病学的调查结果进行对比研究,从而更全面地了解PCV4在猪群中的感染和流行情况。本研究... 旨在建立一种猪圆环病毒4(porcine circovirus type 4, PCV4)Cap蛋白间接ELISA抗体检测方法,对猪群中PCV4抗体进行检测,并与以往的关于PCV4血清流行病学的调查结果进行对比研究,从而更全面地了解PCV4在猪群中的感染和流行情况。本研究利用原核表达系统成功表达PCV4 Cap蛋白,对反应条件进行优化,建立了基于PCV4 Cap蛋白的间接ELISA方法。采用建立的ELISA方法对中国18个省份的不同阶段的2 298份猪血清样本进行检测,以调查中国猪群中PCV4的血清学流行情况。同时将Cap-ELISA检测方法与之前建立的Rep-ELISA进行对比,平行检测845份血清样本。结果显示,在18个省份中,17个省的血清样本中检测到PCV4抗体。PCV4总血清阳性率为34.94%,母猪和育肥猪阳性率分别为59.95%和31.64%,仔猪阳性率为21.14%,保育猪中检出的阳性率最低,为4.20%。两种方法共同检测845份血清样本,符合率为82.84%,其中Cap-ELISA检测总阳性率为31.83%,Rep-ELISA检测总阳性率为35.03%。研究表明,PCV4在中国广泛传播,不同年龄阶段的猪只均能感染。Cap-ELISA和Rep-ELISA两种方法一致性高,从抗体消长规律来分析,两种方法都说明猪群感染PCV4主要在育肥猪和母猪阶段。本研究提供了中国PCV4的最新血清流行病学特征和PCV4在不同阶段猪群中的感染情况,进一步证实了PCV4在我国猪群中有一定的感染率,其危害值得进一步研究和关注。 展开更多
关键词 猪圆环病毒4 原核表达 间接ELISA 血清流行病学调查
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3种亚群PCV-2感染性克隆的构建及体内外感染性 被引量:6
20
作者 李薇 罗维 +6 位作者 余兴龙 李润成 白霞 王亚 向卫军 李晶 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期68-72,共5页
通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)3个亚群(1A、1B、1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8(1A)、P0(1B)和P4-1(1C)。将3个重组质粒分别用SacⅡ切出l 767 bp的PCV-2全基因... 通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)3个亚群(1A、1B、1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8(1A)、P0(1B)和P4-1(1C)。将3个重组质粒分别用SacⅡ切出l 767 bp的PCV-2全基因组,并在体外分别用T4连接酶连接而环化。用脂质体将3种自身环化的基因组转染无PCV-1污染的PK-15细胞,并按常规病毒培养方法分别传代,第5代细胞培养物分别用间接免疫荧光试验(IFA)及PCR方法检测转染的细胞,检测结果均为阳性,说明已获得PCV-2共3个亚群1A、1B、1C的感染性克隆。用1A、1B、1C感染性克隆的第5代细胞培养物分别接种小鼠,可在接种小鼠的血液中分别检测到相应PCV-2亚型的基因组DNA,表明本试验构建的自身环化的1A、1B、1C亚型的PCV-2的全基因组DNA在体内、体外均具有感染性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 感染性克隆 基因亚群 毒力
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