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猪伪狂犬病病毒变异株在国内的研究进展 被引量：13
1
作者 徐宁 栾美慧 +6 位作者 郜艳雪 葛桂阳 李东丽 刘艺 宫庆龙 冷雪 杜锐 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第10期132-137,共6页
猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的猪病毒性传染病。免疫接种疫苗是防控伪狂犬病的有效途径之一,但是近年来在我国很多地区的伪狂犬病疫苗免疫猪群中接连暴发了新的伪狂犬病疫情,主要原因是由于伪狂犬病病毒发... 猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的猪病毒性传染病。免疫接种疫苗是防控伪狂犬病的有效途径之一,但是近年来在我国很多地区的伪狂犬病疫苗免疫猪群中接连暴发了新的伪狂犬病疫情,主要原因是由于伪狂犬病病毒发生了新的变异,新的PRV流行变异株与传统的PRV相比抗原性已发生较大变化。本文从PRV的特征、PRV变异株流行情况、PRV变异株主要毒力蛋白及其遗传变异、PRV变异株疫苗的研制及PRV感染的防控等方面进行阐述,旨在为PRV流行变异株的防控提供参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 变异株 主要毒力蛋白 疫苗 防控
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牛传染性鼻气管炎疫苗的研究进展 被引量：8
2
作者 李东丽 葛桂阳 +7 位作者 刘艺 郜艳雪 徐宁 栾美慧 时坤 李健明 冷雪 杜锐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期360-365,共6页
牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)即牛疱疹病毒1型(BoHV-1)感染所引起的一种高度接触性传染病。该病给我国养牛业带来了巨大的经济损... 牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)即牛疱疹病毒1型(BoHV-1)感染所引起的一种高度接触性传染病。该病给我国养牛业带来了巨大的经济损失。由于缺乏有效的治疗性药物,疫苗免疫仍然是防控该病的有效措施。当前,牛传染性鼻气管炎疫苗主要包括灭活疫苗、弱毒疫苗2种常规疫苗和亚单位疫苗、DNA疫苗、IBRV基因缺失疫苗、病毒活载体疫苗4种基因工程疫苗,各种疫苗各有优点。现对上述疫苗的最新研究进展进行综述,以期为IBRV疫苗的研究与开发提供参考。 展开更多
关键词 IBRV 常规疫苗 基因工程疫苗 防控
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牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定及其遗传进化分析 被引量：7
3
作者 冷雪 李东丽 +7 位作者 葛桂阳 孙志博 宫庆龙 刘艺 郜艳雪 栾美慧 徐宁 杜锐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1006-1012,共7页
采集内蒙古地区疑似发生牛传染性鼻气管炎的发病牛的鼻拭子液,经MDBK细胞连续传代培养,分离获得1株病毒,该病毒在MDBK细胞上增殖致细胞病变。经PCR鉴定、间接免疫荧光试验和动物回归试验,证明该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),对... 采集内蒙古地区疑似发生牛传染性鼻气管炎的发病牛的鼻拭子液,经MDBK细胞连续传代培养,分离获得1株病毒,该病毒在MDBK细胞上增殖致细胞病变。经PCR鉴定、间接免疫荧光试验和动物回归试验,证明该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),对牛具有较强的致病性,将其命名为IBRV NM8株。通过PCR扩增分别获得gB和gE全基因序列,遗传进化分析表明,IBRV NM8株g B和g E基因与BHV-1型参考毒株的同源性较高,位于同一进化分支,而与BHV-5型参考毒株位于不同的进化分支。NM8株gB基因与Cooper株、MN12株、Los Angeles株和NM06株等的亲缘关系相对较近,而g E基因与瑞典的Salwa株的亲缘关系较近,位于同一分支。上述研究结果将为我国IBRV流行病学研究提供新的数据,并为相关后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 分离 鉴定 遗传进化分析
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猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其部分毒力基因序列遗传变异分析 被引量：5
4
作者 徐宁 葛桂阳 +8 位作者 李东丽 刘艺 宫庆龙 麻宝艺 盛陈艳 时坤 李健明 冷雪 杜锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1794-1803,共10页
为了解吉林省猪伪狂犬病毒(PRV)的遗传变异情况,本研究将采集自吉林省疑似发生猪伪狂犬病的临床样品,通过细胞传代、PCR检测和测序分析进行病毒分离鉴定。TCID50法测定分离毒株的病毒滴度,通过家兔感染试验测定分离毒株对家兔的致病性。... 为了解吉林省猪伪狂犬病毒(PRV)的遗传变异情况,本研究将采集自吉林省疑似发生猪伪狂犬病的临床样品,通过细胞传代、PCR检测和测序分析进行病毒分离鉴定。TCID50法测定分离毒株的病毒滴度,通过家兔感染试验测定分离毒株对家兔的致病性。对TK、gB、gC、gD和gE基因进行PCR扩增和测序,分析其遗传变异情况。结果表明,临床样品经PK15细胞传代后,有3份样品出现细胞病变,经PCR鉴定和测序分析表明,分离获得3株PRV,分别命名为PRV JL03、JL12和JL15株。通过PK15细胞测定分离毒株的病毒滴度分别为10^(6.5)、10^(6.5)和10^(7.5)TCID50/mL。6只家兔分别接种3株分离毒株(10^(3.5)TCID50/只)后均表现为体温升高、注射部位奇痒和四肢麻痹等症状,且于病毒接种后3~4 d全部死亡。3株分离病毒TK、gB、gC、gD和gE基因推导氨基酸序列分析结果表明,与参考毒株相比,分离株TK基因未发生氨基酸变异;gB、gC、gD和gE基因部分位点发生氨基酸缺失、插入或突变,其中gE基因在第48和496位分别存在1个天冬氨酸的插入,与国内报道的流行毒株变异特征一致。遗传进化树分析结果表明,3株分离毒株TK、gB、gC、gD和gE基因与国内2012年以后分离的参考毒株JS-2012和ZJ01等的上述基因均表现出较高的同源性,说明毒株间亲缘关系较近,位于同一分支;与国外分离毒株NIA3和Becker等亲缘关系较远,位于不同的分支;而与国内早期流行的毒株SC和Ea等亲缘关系介于二者之间。本研究成功分离鉴定了3株PRV变异株,分离毒株对家兔具有较强的致病性,该结果为吉林省PRV流行病学研究提供了新的数据,并为相关后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 分离鉴定 遗传变异分析
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水貂阿留申病毒诱导CrFK细胞凋亡信号通路的研究 被引量：3
5
作者 葛桂阳 栾美慧 +8 位作者 宫庆龙 刘艺 李东丽 麻宝艺 盛陈艳 时坤 李健明 冷雪 杜锐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1089-1095,共7页
本实验室前期研究表明水貂阿留申病毒(AMDV)G株感染猫肾细胞(CrFK)可以引起其凋亡,为研究AMDV在体外通过何种途径诱导CrFK细胞的凋亡,本实验采用MOI 1的AMDV G株感染CrFK细胞,于感染后不同时间(2 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h,下同... 本实验室前期研究表明水貂阿留申病毒(AMDV)G株感染猫肾细胞(CrFK)可以引起其凋亡,为研究AMDV在体外通过何种途径诱导CrFK细胞的凋亡,本实验采用MOI 1的AMDV G株感染CrFK细胞,于感染后不同时间(2 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h,下同)通过分光光度法检测试剂盒检测Caspase-8、Caspase-9的活性;利用western blot检测Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。采用Caspase-8和Caspase-9抑制剂处理CrFK细胞后感染AMDV G株,于不同时间检测Caspase-3的活性。于AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间,利用荧光定量PCR检测细胞中死亡受体通路分子Caspase-8、Fas、FasL和线粒体通路分子Caspase-9、Bax、Bcl-2、Cyt C以及凋亡执行因子Caspase-3的mRNA转录水平;采用JC-10线粒体膜电位试剂盒检测各时间点细胞线粒体膜电位的去极化情况。结果显示,AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8的活性均无明显变化,而Caspase-9的活性则随感染时间的延长而明显增强;western blot结果显示,Caspase-8蛋白的表达不受影响,而Caspase-9在AMDV感染后12 h被切割活化。Caspase-3活性的检测结果显示,抑制CrFK细胞中Caspase-8的活性后再感染AMDV,Caspase-3的活性逐渐增强,而抑制细胞中Caspase-9的活性后再感染AMDV,则Caspase-3的活性无明显变化,即抑制了Caspase-9再感染AMDV并不能诱导细胞凋亡;荧光定量PCR结果显示,AMDV感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8、Fas、FasL基因的转录水平均无明显变化,而Caspase-9、Caspase-3、Cyt C基因mRNA转录水平及Bax/Bcl-2的比值则随感染时间的延长而逐渐升高。线粒体膜电位结果显示,AMDV感染的CrFK细胞线粒体膜电位下降,发生了明显去极化现象,表现为细胞发生了凋亡。综上,本研究首次证实AMDV G株感染CrFK细胞后激活了线粒体途径的细胞凋亡执行分子Caspase-3及线粒体通路相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-9和Cyt C,并未激活死亡受体通路相关分子,AMDV G株是通� 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒 CrFK细胞 凋亡 信号通路
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水貂阿留申病毒研究进展 被引量：3
6
作者 葛桂阳 李东丽 +9 位作者 徐宁 栾美慧 郜艳雪 刘艺 宫庆龙 麻宝艺 盛陈艳 孙志博 冷雪 杜锐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2276-2280,共5页
水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)引起的一种慢性、进行性传染病,是危害世界养貂业的重要疫病之一。由于AMDV具有抗体依赖性增强作用和特殊的致病机制,目前尚未开发出有... 水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)引起的一种慢性、进行性传染病,是危害世界养貂业的重要疫病之一。由于AMDV具有抗体依赖性增强作用和特殊的致病机制,目前尚未开发出有效的疫苗。本文从AMDV的起源、遗传进化、宿主范围、传播途径和病毒的复制机制等几方面对AMDV的研究现状进行探讨,为今后AMD的致病机制及防控的研究提供参考。 展开更多
关键词 细小病毒 水貂阿留申病毒 遗传进化
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PCV3吉林野毒株全基因组序列分析及其Cap蛋白的亚细胞定位
7
作者 刘东旭 刘宏莹 +5 位作者 苏诺 葛桂阳 麻宝艺 盛陈艳 李东丽 刘艺 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期27-32,共6页
为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实... 为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实验室已构建的兔源PCV3-Cap多克隆抗体,通过激光共聚焦检测Cap蛋白在PAM中的定位。序列分析结果显示,10株PCV3吉林野毒株与国内外参考株之间的全基因组核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,处于PCV3a和PCV3b两个亚群;基因重组分析结果显示,仅中国参考株MF589102(2016年)、MH445396(2019年)和分离株JL-2在80~303 nt、840~1196 nt和1885~2001 nt处发生3处重组。激光共聚焦检测结果显示,Cap蛋白大部分定位于细胞核,少部分定位于细胞质。结果表明,目前吉林省PCV3比较保守,没有出现较大变异,Cap蛋白在PAM的细胞核和细胞质中均有分布。 展开更多
关键词 野毒株 猪圆环病毒3型 CAP蛋白 亚细胞定位
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水貂阿留申病毒诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡 被引量：1
8
作者 栾美慧 葛桂阳 +9 位作者 宫庆龙 徐宁 郜艳雪 时坤 李健明 刘艺 李东丽 孙志博 冷雪 杜锐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期56-61,共6页
为研究水貂阿留申病毒(AMDV)在体外诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡情况,用AMDV-G株感染CrFK细胞,采用CCK-8法检测CrFK细胞感染后的细胞存活率,用AO/EB染色法检测CrFK细胞核的形态变化,用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,并通过... 为研究水貂阿留申病毒(AMDV)在体外诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡情况,用AMDV-G株感染CrFK细胞,采用CCK-8法检测CrFK细胞感染后的细胞存活率,用AO/EB染色法检测CrFK细胞核的形态变化,用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,并通过分光光度计法检测细胞凋亡执行分子Caspase-3活性。结果显示,AMDV-G株感染可导致CrFK细胞增殖率下降,产生明显的形态学凋亡特征;流式细胞术检测结果显示,AMDV-G株感染可引起CrFK细胞凋亡并随着感染时间的延长凋亡率增加,同时Caspase-3活性显著升高。上述结果表明,AMDV-G株在体外能够诱导CrFK细胞凋亡,为进一步研究AMDV致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒 猫肾细胞 细胞凋亡
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梅花鹿接种卡介苗对信号通路影响的RNA-seq分析
9
作者 姜棋文 杨雪瑶 +4 位作者 葛楠 孙江洋 葛桂阳 尹纪营 苏凤艳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第17期118-121,149-151,共7页
为了研究梅花鹿接种卡介苗前后信号通路的变化情况,取接种卡介苗(DF组)和未接种卡介苗(SY组)的梅花鹿外周血进行转录组测序,构建mRNA文库,利用DESeq软件对获得的mRNA进行差异表达分析,根据分析结果,选取免疫相关表达上调基因进行qPCR验... 为了研究梅花鹿接种卡介苗前后信号通路的变化情况,取接种卡介苗(DF组)和未接种卡介苗(SY组)的梅花鹿外周血进行转录组测序,构建mRNA文库,利用DESeq软件对获得的mRNA进行差异表达分析,根据分析结果,选取免疫相关表达上调基因进行qPCR验证。结果表明:DF组和SY组共有1 337个显著差异表达的基因,其中上调基因658个,下调基因679个;差异基因主要参与机体应激、信号转导、调节白细胞迁移等生物学过程。梅花鹿接种卡介苗后主要富集到PI3K-Akt、Notch、NF-κB、Toll样受体以及细胞外基质受体相互作用等免疫相关的信号通路。qPCR检测结果与高通量测序结果一致。说明接种卡介苗后,梅花鹿体内的蛋白质及细胞外基质修饰过程得到了增强,受体活性肽、转录因子的结合能力和细胞因子活性增强。 展开更多
关键词 卡介苗 梅花鹿 转录组测序 GO功能注释 KEGG富集
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