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酵母双杂交技术应用进展 被引量:26
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作者 王婷 怀 郭宏 《生物技术进展》 2015年第5期392-396,共5页
酵母双杂交技术是鉴定蛋白互作最有效和最广泛的分子生物学技术。该技术能直接作用于活细胞,检测细胞内蛋白质互作,具有成本低、易操作、可达到全基因组水平、能进行品种间的互作鉴定等诸多优点。较之传统的检测方法有明显优势,已在越... 酵母双杂交技术是鉴定蛋白互作最有效和最广泛的分子生物学技术。该技术能直接作用于活细胞,检测细胞内蛋白质互作,具有成本低、易操作、可达到全基因组水平、能进行品种间的互作鉴定等诸多优点。较之传统的检测方法有明显优势,已在越来越多的领域得到应用。对酵母双杂交的技术原理以及应用进行了综述,介绍了该技术在发现新蛋白质、探究蛋白质功能、建立基因组蛋白连锁图、研究人类DNA文库和筛选药物作用位点等方面的重要应用,以期为该技术的广泛应用提供参考。 展开更多
关键词 酵母双杂交 技术原理 应用
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苦瓜皂苷的纯化及降血糖活性的研究 被引量:14
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作者 尤玲玲 刘金福 +3 位作者 王媛 张平平 怀 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2015年第17期32-35,共4页
主要研究纯化后苦瓜皂苷的成分组成及对Hep G2胰岛素抵抗的缓解效果,为苦瓜皂苷降血糖活性的深入研究提供参考。本试验利用AB-8大孔吸附树脂纯化苦瓜皂苷粗提物,以人参皂苷Rg1和Rb1为参照物,通过薄层层析(TLC)技术初步分析纯化后样品的... 主要研究纯化后苦瓜皂苷的成分组成及对Hep G2胰岛素抵抗的缓解效果,为苦瓜皂苷降血糖活性的深入研究提供参考。本试验利用AB-8大孔吸附树脂纯化苦瓜皂苷粗提物,以人参皂苷Rg1和Rb1为参照物,通过薄层层析(TLC)技术初步分析纯化后样品的组成,然后利用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)验证分析的结果,最后采用高浓度胰岛素诱导Hep G2细胞建立胰岛素抵抗模型,考察不同剂量的苦瓜皂苷对葡萄糖消耗量的影响。结果表明,经AB-8大孔吸附树脂纯化后苦瓜皂苷含量由35.8%提高到了69.1%,薄层层析显色分析提取物中至少含有5种皂苷类物质,HPLC-ELSD得出纯化后苦瓜皂苷样品中除含有人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1外,还有含有其他6种组分。与模型组细胞相比,纯化后的苦瓜皂苷在一定程度上可以改善产生Hep G2/IR细胞的葡萄糖消耗量,其中300μg/m L的苦瓜皂苷效果最好。 展开更多
关键词 苦瓜皂苷 纯化 薄层层析 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 胰岛素抵抗
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李斯特菌免疫检测用胶体金的制备及抗体标记 被引量:9
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作者 刘珊 怀 +2 位作者 孟繁桐 范志华 刘金福 《食品科技》 CAS 北大核心 2016年第1期321-324,共4页
单增李斯特菌是重要的食源性致病菌,可危害人体健康,造成经济损失。加强食品中单增李斯特菌的检测,是降低食品安全风险的有效手段。胶体金免疫层析技术以胶体金作为示踪物,结合抗原抗体反应应用于食品安全快速检测领域。通过柠檬酸三钠... 单增李斯特菌是重要的食源性致病菌,可危害人体健康,造成经济损失。加强食品中单增李斯特菌的检测,是降低食品安全风险的有效手段。胶体金免疫层析技术以胶体金作为示踪物,结合抗原抗体反应应用于食品安全快速检测领域。通过柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制备胶体金溶液。胶体金最佳制备条件为:25 m L 0.01%氯金酸水溶液中加入1 m L 1%柠檬酸三钠水溶液,反应时间5 min。利用李斯特菌菌体蛋白抗体标记胶体金来制备探针,最佳标记p H值为8.4,最佳标记蛋白抗体量为12μg/m L。制备的胶体金探针具有生物活性,可用于食品中单增李斯特菌快速检测方法的开发。 展开更多
关键词 胶体金 柠檬酸三钠 标记 李斯特菌菌体蛋白抗体
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犬脂肪间充质干细胞静脉移植临床安全性研究
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作者 罗家明 怀 +1 位作者 白春 秀国 《天津农学院学报》 CAS 2023年第6期62-68,共7页
为了验证犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)临床应用的安全性,本试验取第4代犬ASCs,显微镜下观察细胞形态,并进行成脂、成骨及成软骨诱导分化和细胞表面标志蛋白分析。结果显示ASCs呈纺锤体状贴壁生长,形态均匀一致... 为了验证犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)临床应用的安全性,本试验取第4代犬ASCs,显微镜下观察细胞形态,并进行成脂、成骨及成软骨诱导分化和细胞表面标志蛋白分析。结果显示ASCs呈纺锤体状贴壁生长,形态均匀一致,体外ASCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞。犬ASCs表达标记蛋白CD29、CD44、CD105和CD166,不表达CD34和CD45,符合典型的脂肪间充质干细胞特征。犬ASCs以1×10^(6)/kg进行静脉移植,速度10 mL/(kg·h),注射过程中未见任何不良反应。长期观察3个月,未见明显相关并发症。与移植前相比,血液检查发现白细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数、嗜酸性粒细胞数、红细胞数、血红蛋白和血小板数等均无显著差异(P>0.05);血清生化检查发现白蛋白、ALT、AKP等肝指标差异不显著(P>0.05),肾指标肌酐、血清尿素、血磷和血钙差异不显著(P>0.05),胰腺相关指标血糖和血清淀粉酶均无显著差异(P>0.05),心肌损伤指标肌酸激酶和血脂指标胆固醇,在细胞移植前后也无显著差异(P>0.05)。本试验结果表明了犬ASCs应用的临床安全性,为细胞移植治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 移植 安全性
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不同有机质对滨海盐渍土碱解氮含量及羊草生长特性的影响 被引量:3
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作者 周艳 王婷 +2 位作者 怀 马妍 张涛 《天津农学院学报》 CAS 2015年第4期24-28,共5页
采用盆栽实验法,对在滨海盐渍土条件下生长的羊草进行了有机质施肥,以了解有机质对碱解氮和羊草生长的影响。试验采取3因素2水平组合设计,在土壤中添加不同有机质(秸秆粉、微生物菌肥和鸡粪),对羊草的出苗率、鲜重、碱解氮含量进行了分... 采用盆栽实验法,对在滨海盐渍土条件下生长的羊草进行了有机质施肥,以了解有机质对碱解氮和羊草生长的影响。试验采取3因素2水平组合设计,在土壤中添加不同有机质(秸秆粉、微生物菌肥和鸡粪),对羊草的出苗率、鲜重、碱解氮含量进行了分析比较。结果表明:与对照相比,施加有机质可以增加羊草的出苗率和鲜重。添加单一有机质对羊草鲜重、出苗率的影响效果均为正相关,影响效果由大至小均为秸秆粉>鸡粪>微生物菌肥。不同改良物质及其各种组合处理之间的影响效果有显著差异,说明不同类型的有机质对羊草生长的影响较大。土壤碱解氮含量在单独添加单一有机质时无显著差异,但组合后添加差异显著。 展开更多
关键词 滨海盐渍土 碱解氮 羊草 出苗率 鲜重 相关性
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苦瓜皂苷提取物微胶囊化缓释性能及体外对糖苷酶活性影响研究 被引量:2
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作者 靳晓明 尤玲玲 +2 位作者 冯超 怀 刘金福 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期145-148,共4页
以壳聚糖和海藻酸钠为壁材,采用锐孔凝固浴法制备苦瓜皂苷提取物微胶囊,并对其进行了缓释性能及在模拟胃肠酸碱环境中对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性影响的研究。结果显示,微胶囊在体外模拟胃肠液中具有良好的缓释性能,在模拟胃液中苦... 以壳聚糖和海藻酸钠为壁材,采用锐孔凝固浴法制备苦瓜皂苷提取物微胶囊,并对其进行了缓释性能及在模拟胃肠酸碱环境中对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性影响的研究。结果显示,微胶囊在体外模拟胃肠液中具有良好的缓释性能,在模拟胃液中苦瓜皂苷1h释放率为31.19%,2h累积释放率为52.14%,转至肠液中10h累积释放率达到81.20%;在模拟胃肠液中微胶囊对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均有一定的抑制作用,抑制率随着苦瓜皂苷释放量的增加有上升趋势。表明苦瓜皂苷经微胶囊化后能够保护其活性,缓解副作用和延长对糖苷酶的作用时间。 展开更多
关键词 苦瓜皂苷 微胶囊 缓释 Α-葡萄糖苷酶 Α-淀粉酶
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单增李斯特菌胶体金免疫探针的制备 被引量:1
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作者 孟繁桐 王莹 +1 位作者 怀 刘珊 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期19-21,共3页
利用胶体金标记技术,建立快速检测方法以检测和控制食品中的李斯特菌。通过柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制得胶体金溶液。再用胶体金与李斯特菌抗体蛋白的结合制备胶体金探针。通过对胶体金与蛋白结合时的p H值、与胶体金结合的蛋白量、... 利用胶体金标记技术,建立快速检测方法以检测和控制食品中的李斯特菌。通过柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制得胶体金溶液。再用胶体金与李斯特菌抗体蛋白的结合制备胶体金探针。通过对胶体金与蛋白结合时的p H值、与胶体金结合的蛋白量、胶体金探针的活性等方面的测定,确定出胶体金探针制备的最佳条件。 展开更多
关键词 胶体金 胶体金探针 李斯特菌蛋白抗体 快速检测
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李斯特菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达
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作者 刘珊 怀 刘金福 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第8期72-76,共5页
单核细胞增生李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,存在于多种环境中,造成牛奶、肉类、水产品等的食品安全问题。李斯特菌噬菌体编码的裂解酶能够特异性地裂解宿主细胞,释放胞内的子代噬菌体。本研究旨在构建李斯特菌噬菌体A500裂解酶的... 单核细胞增生李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,存在于多种环境中,造成牛奶、肉类、水产品等的食品安全问题。李斯特菌噬菌体编码的裂解酶能够特异性地裂解宿主细胞,释放胞内的子代噬菌体。本研究旨在构建李斯特菌噬菌体A500裂解酶的细胞壁结合结构域CBD500的异源表达系统,获得重组蛋白。首先通过体外扩增得到CBD500基因,克隆到表达载体p ET32a(+)中,转化表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)。阳性重组菌在30℃,0.1 mmol/L IPTG中诱导4 h后,以可溶形式表达分子质量约35 ku的重组蛋白。利用镍离子亲和层析纯化目的蛋白,纯化产物质量浓度为0.62 mg/mL。间接ELISA试验证实,纯化的重组蛋白具有生物学活性,可用于进一步研究裂解酶的理化性质和作用机制。 展开更多
关键词 噬菌体裂解酶 基因表达 李斯特菌 蛋白纯化
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李斯特菌噬菌体裂解酶CBD蛋白的克隆与表达 被引量:3
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作者 怀 刘珊 +1 位作者 刘金福 范志华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期234-237,共4页
单核细胞增生李斯特菌噬菌体的裂解酶中细胞壁结合结构域(CBD)能够特异识别李斯特菌细胞。本研究将CBDP40基因扩增后插入p ET32a(+)载体,导入大肠杆菌表达系统,获得重组菌株,并对其进行IPTG诱导表达,分析重组蛋白的活性。聚丙烯酰胺凝... 单核细胞增生李斯特菌噬菌体的裂解酶中细胞壁结合结构域(CBD)能够特异识别李斯特菌细胞。本研究将CBDP40基因扩增后插入p ET32a(+)载体,导入大肠杆菌表达系统,获得重组菌株,并对其进行IPTG诱导表达,分析重组蛋白的活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明,经0.1 mmol/L IPTG诱导的重组大肠杆菌BL21(DE3)在38 ku处有明显诱导条带,与预期蛋白分子量相符。经过超声细胞破碎,重组蛋白CBDP40分布在上清液中,通过镍离子螯合亲和层析纯化重组蛋白,洗脱后的蛋白浓度为0.908 mg/m L。经菌体结合和间接ELISA验证,重组蛋白CBDP40具有生物学活性,即对李斯特菌具有识别功能。CBD蛋白的重组表达、纯化及其活性验证,为深入研究裂解酶的理化性质和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 噬菌体裂解酶 基因表达 亲和层析
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