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四逆散对抑郁大鼠NLRP3炎症小体及抑郁样行为的作用 被引量:15
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作者 王威 周艳艳 +3 位作者 喻小明 江晓翠 田代志 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期22-30,共9页
目的观察四逆散对慢性温和不可预知应激(CUMS)诱导的抑郁症大鼠行为学及NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体的作用,进一步探讨四逆散抗抑郁的作用机制。方法将50只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、NLRP3抑制剂(MCC950)组、四逆散... 目的观察四逆散对慢性温和不可预知应激(CUMS)诱导的抑郁症大鼠行为学及NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体的作用,进一步探讨四逆散抗抑郁的作用机制。方法将50只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、NLRP3抑制剂(MCC950)组、四逆散低、高剂量,每组10只。除正常组外,均采用为期42 d的CUMS诱导各组大鼠抑郁。造模第22天开始药物干预,四逆散低、高剂量每天以四逆散(2.5、5 g·kg^(-1))进行灌胃,MCC950组以每天腹腔注射MCC950(10 mg·kg^(-1))。同时,除MCC950组外,余下4组腹腔注射10 mg·kg^(-1)生理盐水;而模型组、正常组、MCC950组灌胃3 mL生理盐水。21 d后进行糖水偏好实验、旷场实验;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马组织NLRP3、相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、离子钙结合衔接蛋白1(Iba1)、CD68蛋白表达量。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠海马组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)含量。尼氏染色评估大鼠海马CA1区病理改变,原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠CA1区凋亡水平。结果与正常组比较,模型组大鼠糖水偏好率及消耗体积,旷场实验中总距离、中央区运动距离百分比和停留时间百分显著下降(P<0.01);与模型组比较,四逆散高、低剂量组和MCC950组大鼠抑郁行为,海马CA1区凋亡水平及神经元丢失不同程度的减轻。四逆散可明显降低海马组织IL-1β、IL-18、Bax、Iba1、CD68水平(P<0.05,P<0.01),上调Bcl-2水平(P<0.05,P<0.01),并且抑制NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.05,P<0.01)。结论四逆散可改善CUMS大鼠的抑郁样行为、海马区神经元病理性损伤,其机制可能与NLRP3炎症小体信号通路介导的炎症反应有关。 展开更多
关键词 四逆散 慢性温和不可预知应激(CUMS) 神经炎症 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体 抑郁症 凋亡
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扫描电镜对中药饮片浙贝母的真伪鉴别 被引量:15
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作者 吴莹 《湖北中医杂志》 2017年第1期57-59,共3页
虽有良医而药味为伪药,则良医无济于事。因此,严格控制生药的真伪优劣等质量问题是保证用药安全有效的最好方法。而扫描电子显微镜作为一种观察样品表面形态的检测技术手段,可通过对生药的茎叶表皮,种子与果实,孢子及花粉等微观形态的观... 虽有良医而药味为伪药,则良医无济于事。因此,严格控制生药的真伪优劣等质量问题是保证用药安全有效的最好方法。而扫描电子显微镜作为一种观察样品表面形态的检测技术手段,可通过对生药的茎叶表皮,种子与果实,孢子及花粉等微观形态的观察,应用于植物的真伪鉴别与来源分类, 展开更多
关键词 浙贝母 提取 扫描电子显微镜
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基于Nlrp3/ASC/Caspase-1通路探讨加减薯蓣丸对APP/PS1痴呆小鼠神经炎症的影响 被引量:14
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作者 王小燕 谭子虎 +4 位作者 喻小明 王威 余何 汤琪 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期8-14,共7页
目的:观察加减薯蓣丸对淀粉样蛋白前体蛋白/早老素1(APP/PS1)痴呆小鼠认知障碍的治疗效果并探讨其作用机制。方法:将10只野生型小鼠设为正常组,40只APP/PS1小鼠,分为模型组,加减薯蓣丸低、高剂量组(14,64 g·kg^(-1))和多奈哌齐组(1... 目的:观察加减薯蓣丸对淀粉样蛋白前体蛋白/早老素1(APP/PS1)痴呆小鼠认知障碍的治疗效果并探讨其作用机制。方法:将10只野生型小鼠设为正常组,40只APP/PS1小鼠,分为模型组,加减薯蓣丸低、高剂量组(14,64 g·kg^(-1))和多奈哌齐组(1 mg·kg^(-1)),每组10只,正常组、模型组给予等体积生理盐水,连续灌胃35 d。给药结束后,Morris水迷宫检测小鼠记忆和空间探索能力;尼氏(Nissl)染色观察小鼠海马神经元形态;免疫组化检测小鼠海马β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)沉积;免疫荧光检测海马小胶质细胞(MG)标志物离子钙结合衔接分子1(Iba1)和激活状态标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马NOD样受体3(Nlrp3),接头蛋白指向相关斑点蛋白(ASC),半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马IL-1β,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-18(IL-18)mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠记忆和空间探索能力明显降低(P<0.05),海马神经元数量减少,Aβ1-42沉积增多,MG激活标记物Iba1,iNOS增加,Nlrp3,ASC,Caspase-1,IL-1β蛋白的表达均明显增高(P<0.05),IL-1β,IL-18,TNF-αmRNA表达均明显增加(P<0.05);与模型组比较,加减薯蓣丸组能够明显改善APP/PS1小鼠的空间探索能力和记忆能力(P<0.05),增加海马神经元数量,减少Aβ1-42沉积,减轻MG的激活,降低Nlrp3,ASC,Caspase-1,IL-1β蛋白的表达(P<0.05),减少炎症因子mRNA的表达(P<0.05)。结论:加减薯蓣丸能够通过抑制Nlrp3/ASC/Caspase-1通路,降低APP/PS1小鼠海马IL-1β等炎症因子的表达,缓解神经炎症,减轻阿尔兹海默症(AD)病理损伤。 展开更多
关键词 加减薯蓣丸 淀粉样蛋白前体蛋白/早老素1(APP/PS1) NOD样受体3(Nlrp3) 炎症 小胶质细胞
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中药红油膏对大鼠创面愈合影响的实验研究 被引量:13
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作者 王勇 章敏 +1 位作者 施厚银 《现代中西医结合杂志》 CAS 2010年第11期1313-1314,共2页
目的探讨红油膏促进大鼠创面愈合的作用机制。方法实验大鼠经手术造成背部创面,随机分为2组,实验组用红油膏涂布创面,对照组采用龙珠软膏。观察大鼠创面愈合时间;动物造模后第3,5,7天,创面取分泌物检测巨噬细胞以及创面肉芽组织测定蛋... 目的探讨红油膏促进大鼠创面愈合的作用机制。方法实验大鼠经手术造成背部创面,随机分为2组,实验组用红油膏涂布创面,对照组采用龙珠软膏。观察大鼠创面愈合时间;动物造模后第3,5,7天,创面取分泌物检测巨噬细胞以及创面肉芽组织测定蛋白质含量;造模后第1,3,5,7天,测定血清C反应蛋白(CRP)含量。结果与对照组比较,实验组能缩短大鼠创面愈合时间;实验组在相应时间内的巨噬细胞数量高于或显著高于对照组(P<0.05或0.01);经红油膏治疗的大鼠皮肤创面,其组织中蛋白含量高于对照组(P<0.05或0.01);术后第1天,实验组与对照组CRP均升高,之后实验组CRP下降,较对照组有显著性差异(P<0.05或0.01)。结论红油膏能有效促进大鼠创面愈合。 展开更多
关键词 红油膏 巨噬细胞 肉芽组织 C反应蛋白
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火麻仁油与藻油混合物对营养肥胖大鼠的降脂减肥作用研究 被引量:11
5
作者 李全胜 《湖北中医药大学学报》 2016年第4期12-15,共4页
目的探讨火麻仁油与藻油对营养肥胖型大鼠的降脂减肥作用。方法大鼠喂饲高脂饲料以建立营养性肥胖模型。造模成功后,分为空白对照组、模型对照组、火麻仁油藻油低剂量组(75mg/kg)、火麻仁油藻油中剂量组(150mg/kg)、火麻仁油藻油高剂量... 目的探讨火麻仁油与藻油对营养肥胖型大鼠的降脂减肥作用。方法大鼠喂饲高脂饲料以建立营养性肥胖模型。造模成功后,分为空白对照组、模型对照组、火麻仁油藻油低剂量组(75mg/kg)、火麻仁油藻油中剂量组(150mg/kg)、火麻仁油藻油高剂量组(300mg/kg),给予相应剂量药物连续灌胃30d。检测大鼠体重、Lee’s指数、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。结果模型对照组大鼠的体质量、Lee’s指数明显增高,且肾及附睾周围脂肪组织显著增多,TG、TC含量显著升高,HDL-C显著降低,LDL-C显著增高,血清和肝脏MDA升高,而SOD活力均降低(P<0.05,P<0.01)。与模型对照组相比,中、高剂量火麻仁油藻油均可显著降低高胆固醇血症动物大鼠的Lee’s指数、总脂体比和减少大鼠附睾周围脂肪组织的增加,TG含量显著降低、TC含量升高,HDL-C含量显著升高,MDA含量显著降低,SOD含量显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论火麻仁油藻油对营养肥胖型大鼠有降脂减肥的作用。 展开更多
关键词 营养肥胖 火麻仁油藻油 降脂 减肥
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金香丹抑制NLRP3/IL-1β/Caspase-1信号通路缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤 被引量:10
6
作者 向晶晶 +1 位作者 王威 王朝阳 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期87-94,共8页
目的:观察金香丹预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型心肌组织NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路的影响,探讨金香丹对MIRI的保护作用及其机制。方法:50只雄... 目的:观察金香丹预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型心肌组织NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路的影响,探讨金香丹对MIRI的保护作用及其机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型组,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组,每组10只。造模前7 d开始,金香丹组给予金香丹片高、低剂量(0.72,0.18 g·kg^(-1))灌胃;假手术组和模型组每天给予等体积生理盐水灌胃;地奥心血康组给予地奥心血康(1.29 g·kg^(-1))灌胃。末次灌胃12 h后,结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。心电图检测ST段升高评价模型;比色法检测心脏组织肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织损伤情况,DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织NLRP3,Caspase-1和IL-1β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌组织中NLRP3,Caspase-1和IL-1βmRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组心电图ST段显著升高(P<0.01),心肌组织CK和LDH活性显著增加(P<0.01),心肌组织凋亡细胞显著增加(P<0.01),NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,金香丹高、低剂量组及地奥心血康组心电图ST明显降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织CK和LDH活性明显降低(P<0.05,P<0.01),心肌细胞凋亡明显改善(P<0.05,P<0.01),降低NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);与地奥心血康组比较,金香丹低剂量组心电图ST段明显升高(P<0.05),金香丹高剂量组明显降低(P<0.05),金香丹高、低剂量组和地奥心血康组心肌组织绿色荧光强度明显降低(P<0.05,P<0.01),金香丹高剂量NLRP3,IL-1β,Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05)。结论:金香丹可以降 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注损伤 金香丹 NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3) 半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1) 细胞凋亡
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补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能 被引量:10
7
作者 赵井苓 谢莉 +3 位作者 江晓翠 李成银 吴思 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第15期29-35,共7页
目的:观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关因子改善卵巢储备功能下降(DOR)大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法:运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠,将其随机分为模型组... 目的:观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关因子改善卵巢储备功能下降(DOR)大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法:运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠,将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组(0.000 9 g·kg^(-1)),补肾活血方高、中、低剂量组(33,16.5,8.25 g·kg^(-1)),同时另设正常组,每组12只;各组相应药物治疗,正常组和模型组给予等体积生理盐水,连续灌胃14 d,每天1次。治疗结束后,苏木素-伊红(HE)染色卵巢组织,光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化;免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织中PI3K,Akt,mTOR,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测卵巢组织中PI3K,Akt,mTOR mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少(P<0.05,P<0.01),卵巢组织中VEGF,Caspase-3表达升高(P<0.05),PI3K,Akt,mTOR蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升(P<0.05,P<0.01),VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显(P<0.05),补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降,补肾活血方中、高剂量组PI3K,Akt,mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05,P<0.01),且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论:补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能,促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关,进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,从而调节Caspase-3的含量,最后促进卵泡数量的增加。 展开更多
关键词 卵巢储备功能下降(DOR) 补肾活血方 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路 半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3) 血管内皮生长因子(VEGF)
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补肾化痰活血方调控PI3K/AKT通路改善多囊卵巢综合征-胰岛素抵抗大鼠的作用机制研究 被引量:7
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作者 刘菏婧 刘雪峰 +4 位作者 张楚楚 朱卓颖 刘春山 徐昕 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期753-760,共8页
目的 通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3-Kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路研究补肾化痰活血方治疗多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(polycystic ovary syndrome for insulin resistance,PCOS-IR)的作用机制。方法 5... 目的 通过磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3-Kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路研究补肾化痰活血方治疗多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(polycystic ovary syndrome for insulin resistance,PCOS-IR)的作用机制。方法 54只雌性SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、补肾化痰活血方低、中、高剂量组6组,采用皮下注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)联合高脂饲料喂养构建PCOS-IR大鼠模型。21 d造模成功后各组大鼠分别给予相应药物灌胃。连续治疗28 d后检测腹腔葡萄糖耐量试验(intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)、葡萄糖曲线下面积(glucose area under curve,GAUC),各级卵泡数,大鼠血清促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)、促卵泡生成激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、睾酮激素(testosterone,T)、雌二醇激素(estradiol,E_(2))、抗缪勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、胰岛素(insulin,INS)水平,大鼠卵巢组织中PI3K、AKT、葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT)4 mRNA水平和p-PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠糖代谢水平、血清T、LH、INS水平显著升高(P<0.01),E_(2)、FSH、AMH水平显著降低(P<0.01),卵巢组织中PI3K、AKT、GLUT4 mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,补肾活血化痰方组大鼠糖代谢水平、血清T、LH水平显著降低(P<0.01),E_(2)、FSH、AMH水平明显升高(P<0.05,P<0.01),PI3K、AKT、GLUT4 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01)。结论 补肾化痰活血方能够改善PCOS-IR大鼠性激素水平,改善多囊卵巢及胰岛素抵抗状态,其作用机制可能与上调PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 补肾化痰活血方 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗 性激素 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶
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肝司生殖浅析 被引量:9
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作者 周艳艳 +2 位作者 袁芳 陈会敏 徐安莉 《新中医》 CAS 2013年第12期22-25,共4页
人的生殖活动过程非常复杂,与人体各个脏腑都有密切关系。肝具有疏泄、藏血、调节血量的功能;肝气调达、肝血充足,则冲任得以协调,精气得以疏泄,宗筋得以荣养,女子则能胎孕,男子则能生育,从而调节和维持人的生殖机能,故肝司生殖。
关键词 肝司生殖 疏泄 藏血 生殖 中医学理论
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基于Cx43研究产前应激对子代大鼠睾丸发育的影响及左归丸干预作用 被引量:2
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作者 曹继刚 +5 位作者 江晓翠 王朝阳 龚健 陈思易 周艳艳 赵敏 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期197-207,共11页
基于缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)研究产前应激大鼠影响子代睾丸发育的机制及左归丸的防治作用。制备SD孕鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、左归丸高剂量组(18.9 g·kg^(-1))、左归丸低剂量组(9.45 g·kg^(-1))、维生... 基于缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)研究产前应激大鼠影响子代睾丸发育的机制及左归丸的防治作用。制备SD孕鼠40只,随机分为空白对照组、模型组、左归丸高剂量组(18.9 g·kg^(-1))、左归丸低剂量组(9.45 g·kg^(-1))、维生素E组(1.44 mg·kg^(-1))。除空白对照组以外,其余各组通过慢性不可预测轻度应激法复制产前应激(prenatal stress, PS)孕鼠模型。采用糖水偏好实验、旷场实验、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测糖皮质激素(glucocorticoids, GC)含量评估PS孕鼠模型;ELISA法检测血清甲状腺素4(thyroxine 4, T4)、睾酮(testosterone, T)、促卵泡生长激素(follicle-stimulating hormone, FSH)评估肾虚状态及性激素水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色评估睾丸生殖细胞状况;全自动精子分析仪检测精子质量;免疫荧光双染检测子代大鼠睾丸Cx43蛋白、促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor, FSHR)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time fluorescent quantitative PCR, RT-PCR)检测Cx43、促卵泡生长激素受体(FSHR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)基因mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot, WB)法检测子代大鼠睾丸Cx43、PI3K、FSHR、Akt蛋白表达。PS诱发子代大鼠睾丸发育障碍,HE染色结果显示,出生当天子代雄鼠睾丸曲精小管数量减少,血清FSH升高,睾丸组织Cx43水平降低,60日龄子代雄鼠睾丸生精功能降低,精子质量下降,血清FSH升高,T降低,睾丸组织Cx43、FSHR、PI3K、Akt蛋白及mRNA水平均降低;而给予左归丸防治后对子代大鼠上述睾丸发育异常及功能障碍均有改善。综上,左归丸可能通过激活PI3K/Akt通路调节睾丸Cx43表达改善PS对子代大鼠睾丸发育及生精功能的影响。 展开更多
关键词 产前应激 连接蛋白43 子代 左归丸 睾丸发育
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恐伤孕鼠对其仔鼠脑皮质神经元早期发育影响的实验研究 被引量:8
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作者 冯新玲 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期2293-2295,共3页
目的根据肾藏精主髓,髓充于脑,肾主脑发育理论,研究先天肾虚影响脑皮质神经元早期发育的情况及补肾法的作用。方法 SD大鼠(雌雄2∶1)合笼,制备孕鼠,分为模型组、空白组、补肾组。模型组、补肾组采用梅花针叩击孕鼠头部和模拟地震平台两... 目的根据肾藏精主髓,髓充于脑,肾主脑发育理论,研究先天肾虚影响脑皮质神经元早期发育的情况及补肾法的作用。方法 SD大鼠(雌雄2∶1)合笼,制备孕鼠,分为模型组、空白组、补肾组。模型组、补肾组采用梅花针叩击孕鼠头部和模拟地震平台两种方法复合不定时恐吓刺激孕鼠整个孕期直至生仔,补肾组在造模过程中同时给予左归丸灌胃治疗,空白组自然喂养至生产;检测出生当日仔鼠脑湿重体质比;血清FT3、FT4含量;光镜及电镜观察脑皮质神经元结构。结果与空白组比较,模型组仔鼠脑湿重体质比下降(P<0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P<0.01),光镜下脑皮质神经元细胞个数明显减少,脑神经元超微结构残缺,轮廓凹凸不平,核形不规整,核膜塌陷;补肾组仔鼠脑湿重体质比下降(P<0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P<0.01),脑皮质神经元细胞个数增多,脑神经元超微结构接近正常。结论复合法恐吓刺激孕鼠可引起胎产数下降,仔鼠脑湿重体质比、血清FT3、FT4变化,脑皮质层神经元发育异常;中药补肾法治疗后,可有效改善先天肾虚仔鼠脑早期不良发育。 展开更多
关键词 恐伤肾 先天肾虚 脑发育 左归丸
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基于脂质与动脉粥样硬化通路探讨菟丝子防治卵巢早衰的作用机制 被引量:2
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作者 谢颖 +4 位作者 江晓翠 张金融 史若怡 张家玮 赵敏 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期109-118,共10页
目的:通过网络药理学及分子对接技术初步预测菟丝子防治卵巢早衰的活性成分、作用靶点及信号通路,并构建卵巢早衰动物模型,基于脂质与动脉粥样硬化信号通路探讨其作用机制。方法:从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Swiss Target... 目的:通过网络药理学及分子对接技术初步预测菟丝子防治卵巢早衰的活性成分、作用靶点及信号通路,并构建卵巢早衰动物模型,基于脂质与动脉粥样硬化信号通路探讨其作用机制。方法:从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Swiss Target Prediction、Pharmmapper等数据库中获取药物的有效成分及对应靶点;使用GeneCards数据库收集疾病的相关靶点;利用Venny2.1.0在线工具筛选出药物与疾病的交集靶点,用STRING数据库及Cytoscape v3.7.2软件构建“药物-成分-靶点”与蛋白质-蛋白质互作网络(PPI)网络图;通过运行R语言脚本对交集靶点进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,利用分子对接技术将药物成分与靶点进行对接,并对其部分对接结果进行可视化;将小鼠随机分为正常组、模型组、菟丝子组与戊酸雌二醇组,采用慢性应激制备卵巢早衰模型,正常组与模型组给予等量生理盐水灌胃,菟丝子组给予菟丝子水煎剂2.6 g·kg^(-1)·d^(-1),戊酸雌二醇组给予戊酸雌二醇溶液0.13 mg·kg^(-1)·d^(-1),4周后取材,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢的组织形态学改变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(AMH)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、核转录因子-κB抑制因子α(IκBα)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等表达水平。结果:共筛选菟丝子防治卵巢早衰靶点171个,主要包括细胞肿瘤抗原(TP53)、蛋白激酶B1(Akt1)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶(SRC)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子受体(EGFR)等,KEGG通路富集分析预测菟丝子防治卵巢早衰主要涉及脂质与动� 展开更多
关键词 菟丝子 网络药理学 卵巢早衰 分子对接 实验验证
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基于自身免疫调节因子探讨左归丸对先天肾虚仔鼠T细胞迁移的影响 被引量:7
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作者 任梅荣 曹继刚 +4 位作者 桑红灵 徐安莉 陈会敏 赵敏 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1934-1939,共6页
目的:观察左归丸对先天肾虚仔鼠胸腺和胸腺上皮细胞(TECs)内自身免疫调节因子(AIRE)、胰岛素样生长因子2(IGF2)、套膜蛋白(Involucrin)的表达和T细胞分类的影响。方法:构建先天肾虚仔鼠模型,各组孕鼠分别给予0.9%氯化钠溶液,胸腺肽,左... 目的:观察左归丸对先天肾虚仔鼠胸腺和胸腺上皮细胞(TECs)内自身免疫调节因子(AIRE)、胰岛素样生长因子2(IGF2)、套膜蛋白(Involucrin)的表达和T细胞分类的影响。方法:构建先天肾虚仔鼠模型,各组孕鼠分别给予0.9%氯化钠溶液,胸腺肽,左归丸大、小剂量混悬液灌胃,至仔鼠出生。正常仔鼠胸腺TECs做原代培养,分为空白组、左归丸组、抑制剂组和抑制剂左归丸组。流式细胞学检测仔鼠胸腺和脾脏内T细胞分型,Western blot和RT-PCR检测胸腺和TECs内AIRE、IGF2、Involucrin蛋白和基因表达。结果:与对照组比较,模型组仔鼠脾脏内CD_4^(+)/CD_(8)^(+)T细胞,胸腺内AIRE、IGF2、Involucrin蛋白和基因表达均降低(P<0.05),胸腺内SP细胞增加(P<0.05);胸腺肽组及左归丸低、高剂量组仔鼠脾脏内CD_4^(+)/CD_(8)^(+)T细胞,胸腺内AIRE、IGF2、Involucrin蛋白和基因表达升高(P<0.05),胸腺内SP细胞减少(P<0.05)。与空白组比较,抑制剂组TECs内AIRE、IGF2、Involucrin蛋白和基因表达减少(P<0.05);与抑制剂组比较,左归丸组和抑制剂左归丸组TECs内AIRE、IGF2、Involucrin蛋白和基因的表达上升(P<0.05)。结论:先天肾虚仔鼠脾脏内CD_4^(+)/CD_(8)^(+)失衡,左归丸可以通过提高胸腺内AIRE、IGF2、Involucrin的表达,促进T细胞在胸腺正常成熟和外迁,纠正外周免疫器官脾脏的失衡状态。 展开更多
关键词 先天肾虚 补肾填精法 左归丸 自身免疫调节因子 套膜蛋白 胰岛素样生长因子2
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恐伤孕鼠对其仔鼠长骨早期发育影响的研究 被引量:7
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作者 桑红灵 +4 位作者 周安方 孙旭莹 刘健 章程鹏 喻小明 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2017年第8期1744-1747,共4页
目的:根据肾主骨生长发育理论,研究先天肾虚影响长骨早期发育的情况,论证补肾填精法的作用。方法:采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓孕鼠造成子代先天肾虚。将孕鼠分为正常、模型、补肾3组,补肾组灌服左归丸浓缩剂。动态检测出生... 目的:根据肾主骨生长发育理论,研究先天肾虚影响长骨早期发育的情况,论证补肾填精法的作用。方法:采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓孕鼠造成子代先天肾虚。将孕鼠分为正常、模型、补肾3组,补肾组灌服左归丸浓缩剂。动态检测出生后仔鼠20 d内平均身长、5周内股骨平均长度、Micro CT检测股骨皮质骨及松质骨微结构参数、第5周股骨钙、磷、羟脯氨酸含量。结果:模型组仔鼠平均身长、股骨平均长度显著降低(P<0.05或P<0.01);各时间点模型组皮质骨厚度、外径周长、皮质骨面积、皮质骨密度减少;股骨矿物质、基质胶原含量减少。上述指标与另两组比较差异显著(P<0.05)。结论:先天肾虚可以影响长骨早期生长发育,出现骨量减少,成骨活性降低,皮质骨发育不良。中药补肾填精治疗,可有效改善先天肾虚仔鼠长骨早期发育不良。 展开更多
关键词 恐伤孕鼠 先天肾虚 骨发育 左归丸
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基于PI3K/AKT通路研究针药结合治疗PCOS-IR大鼠的作用机制 被引量:6
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作者 刘菏婧 张楚楚 +5 位作者 刘雪峰 甘雨娟 刘佳文 朱卓颖 徐昕 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2852-2857,共6页
目的 探讨PI3K/AKT信号通路与PCOS-IR的关联及针药联合干预对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗的治疗作用机制,为临床探讨PCOS-IR的新疗法奠定一定的理论基础。方法 雌性SD大鼠54只随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、中药组、电针组及针... 目的 探讨PI3K/AKT信号通路与PCOS-IR的关联及针药联合干预对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗的治疗作用机制,为临床探讨PCOS-IR的新疗法奠定一定的理论基础。方法 雌性SD大鼠54只随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、中药组、电针组及针药联合组,采用皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)联合高脂饲料喂养构建大鼠PCOS-IR模型。造模21d后空白组、模型组给予1mL生理盐水灌胃;二甲双胍组给予二甲双胍(0.265 g·kg^(-1))灌胃;中药组给予补肾化痰活血方颗粒(0.48g·kg^(-1))灌胃;电针组电针针刺子宫、中极、关元和三阴交穴;针药联合组给予补肾化痰活血方颗粒(0.48g·kg^(-1))灌胃及电针针刺子宫、中极、关元和三阴交穴。各组连续治疗28d后采用苏木精-伊红(HE)染色法光镜下观察大鼠卵巢组织病理形态变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清LH、FSH、T、E_(2)、AMH、INS水平;采用血糖仪检测IPGTT,并计算HOMA-IR及(GAUC),并通过RT-PCR、Western blot方法分别检测PCOS-IR模型大鼠卵巢组织中PI3K、AKT、GLUT4 mRNA及p-PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠卵巢呈多囊样改变,体质量、血清LH、T、INS、IPGTT水平升高(P<0.01),E_(2)、FSH、AMH水平降低(P<0.01),卵巢组织中PI3K、AKT、GLUT4 mRNA及p-PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达水平下降(P<0.01);与模型组相比,二甲双胍组、中药组、电针组及针药联合组大鼠卵巢多囊样状况,血清LH、FSH、T、E_(2)、AMH、INS、IPGTT、卵巢组织中PI3K、AKT、GLUT4 mRNA及p-PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达水平均不同程度改善;与二甲双胍组、中药组、电针组相比,针药联合组大鼠p-PI3K和p-AKT蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论 针药联合干预能够通过PI3K/AKT信号通路上调PI3K、AKT、GLUT4 mRNA及p-PI3K、p-AKT、GLUT4蛋白表达,改善大鼠性激素水平,从而改善PCOS大鼠多囊卵巢及胰岛素抵抗状态。 展开更多
关键词 针药结合 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗 性激素
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四逆汤抑制TLR4/NF-κB信号通路改善过敏性哮喘小鼠气道重塑 被引量:6
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作者 李重 程俊敏 +3 位作者 彭红星 姜兴宇 龚建 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第22期6191-6198,共8页
观察四逆汤对过敏性哮喘(AA)小鼠Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。将48只SPF级BALB/c雌性小鼠,随机分为空白对照组,模型组,四逆汤高、中、低剂量组和地塞米松组。除空白对照组外,其他各组利用卵清蛋白和氢氧化... 观察四逆汤对过敏性哮喘(AA)小鼠Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。将48只SPF级BALB/c雌性小鼠,随机分为空白对照组,模型组,四逆汤高、中、低剂量组和地塞米松组。除空白对照组外,其他各组利用卵清蛋白和氢氧化铝粉混合制成的致敏液腹腔注射致敏,空白对照组腹腔内注射等容积的生理盐水,共3次,每次间隔7 d;致敏的同时,每日4℃气候箱中进行时长20 min外寒刺激和冰水灌胃。造模完成后,开始灌胃给予各组小鼠相应药物,连续给药21 d,末次给药后,取材。酚红实验评估气管排泌功能,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织支气管组织病理学变化,Masson染色光镜观察肺组织支气管周围蓝色胶原纤维沉积并计算肺部炎症积分,免疫荧光观察支气管Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织TLR4、NF-κB、caspase-1和IL-13蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测肺组织TLR4、NF-κB、caspase-1和IL-13 mRNA含量。经四逆汤治疗之后,酚红排泄模型中AA小鼠的酚红排泄量增加;肺组织炎症评分、气道上皮下胶原纤维沉积和Col-Ⅰ、α-SMA蛋白显著性降低,小鼠肺组织TLR4、NF-κB、caspase-1和IL-13蛋白表达水平降低,TLR4、NF-κB、caspase-1和IL-13 mRNA水平降低。四逆汤能明显改善AA小鼠气道重塑(AR),其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路相关。 展开更多
关键词 过敏性哮喘 气道重塑 四逆汤 Toll样受体4/核转录因子-κB
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肝郁肾虚型少弱精症大鼠模型的建立及相关指标评价初探 被引量:7
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作者 魏巍 曹继刚 +2 位作者 陈曙辉 任毅轩 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期293-302,共10页
目的:建立肝郁肾虚型少弱精症大鼠模型,探讨其相关的评价指标.方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、肝郁组和肾虚组.模型组大鼠每100 g体质量每天灌胃50 mg腺嘌呤14 d并在开始灌胃的同时给予慢性束缚应激刺激21 d,肝郁组... 目的:建立肝郁肾虚型少弱精症大鼠模型,探讨其相关的评价指标.方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、肝郁组和肾虚组.模型组大鼠每100 g体质量每天灌胃50 mg腺嘌呤14 d并在开始灌胃的同时给予慢性束缚应激刺激21 d,肝郁组采用慢性束缚应激刺激21 d,肾虚组大鼠每100 g体质量每天灌胃50 mg腺嘌呤14 d后正常饲养7 d;建模后观察大鼠一般情况及行为学改变,称量体质量及生殖器官质量、分析精子质量,观察行为学改变,用放免法检测血清cAMP、cGMP的质量浓度ρcAMP、ρcGMP,光镜观察睾丸切片.结果:与空白组相比,肝郁组大鼠的行为学检测与精子质量有明显差异(P<0.01),说明肝郁的少弱精症模型构建成功;与空白组相比,肾虚组大鼠的血清ρcAMP、ρcGMP及ρcAMP/ρcGMP与精子质量有明显差异(P<0.01),说明肾虚的少弱精症模型构建成功;与肝郁组相比,模型组大鼠的行为学检测与精子质量有明显差异(P<0.01),与肾虚组相比,模型组大鼠的血清ρcAMP、ρcGMP及ρcAMP/ρcGMP与精子质量有明显差异(P<0.01),初步说明肝郁肾虚型少弱精症大鼠模型构建成功.结论:腺嘌呤灌胃联合慢性束缚应激刺激可建立肝郁肾虚型少弱精症大鼠模型. 展开更多
关键词 少弱精症 肝郁肾虚 动物模型 腺嘌呤 慢性束缚应激刺激
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疏肝补肾毓麟汤通过PINK1/Parkin通路调控自噬流提高精子活力的研究
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作者 陈曙辉 +2 位作者 姜兴宇 蔚文垚 曹继刚 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第3期178-183,I0022-I0024,共9页
目的 明确疏肝补肾毓麟汤畅通自噬流,通过PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路,调节线粒体功能,提高精子活力的作用机制。方法 通过随机数字表法将SD大鼠分为正常组、模型组、疏肝补肾毓麟... 目的 明确疏肝补肾毓麟汤畅通自噬流,通过PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路,调节线粒体功能,提高精子活力的作用机制。方法 通过随机数字表法将SD大鼠分为正常组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、五子衍宗丸对照组。采用腺嘌呤(0.05 g·kg^(-1))灌胃14 d,复制少弱精症大鼠模型。正常组与模型组给予等容0.9%氯化钠溶液,疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组给药32.4 g/(kg·d)、8.1 g/(kg·d),五子衍宗丸对照组给药2.6 g/(kg·d)。全自动精子分析仪检测精子活力,透射电镜观察睾丸组织中线粒体自噬的超微结构变化、JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测线粒体膜电位水平变化、免疫荧光标记线粒体外膜易位酶20(Translocase of the outer membrane ofmitochondrion 20,TOMM20)与微管相关蛋白1轻链3II(Microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II)的共定位、PCR与Western Blot检测睾丸组织PINK1、Parkin、选择性自噬接头蛋白62(Selective autophagy adaptor protein 62,P62)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3II/I)的表达。结果 与正常组相比,模型组的精子活动力下降(P<0.05),线粒体膜电位比例下降(P<0.05),线粒体超微结构出现核周聚集,嵴受损或丢失,除了碎裂外,还有暗基质,以及外膜不规则,并且受损的线粒体与包括线粒体吞噬体在内的线粒体空泡相关,免疫双染中发现LC3II的存在量明显增多,LC3II与TOMM20的双重标记也增加,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、对照组的精子活动力升高(P<0.05),线粒体膜电位比例增加(P<0.05),超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多,且线粒体溶酶体的数量也减少,免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少,LC3II与TOMM20的双重� 展开更多
关键词 精子活力低下 线粒体自噬 自噬流 疏肝补肾毓麟汤
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三七皂苷R_(1)调控Nrf2介导的铁死亡途径改善ApoE^(−/−)小鼠动脉粥样硬化
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作者 张梦 +3 位作者 蔡婷 李晶晶 全毅红 樊光辉 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期5135-5144,共10页
目的探究三七皂苷R_(1)对高脂诱发的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(−/−))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的治疗作用及机制。方法高脂喂养雄性ApoE^(−/−)小鼠12周建立AS模型,将其随机分为模型组及三七皂苷R_(1)低、高剂量(25、35 mg/kg... 目的探究三七皂苷R_(1)对高脂诱发的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(−/−))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的治疗作用及机制。方法高脂喂养雄性ApoE^(−/−)小鼠12周建立AS模型,将其随机分为模型组及三七皂苷R_(1)低、高剂量(25、35 mg/kg)组和铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1,1 mg/kg)组。以相同周龄的雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,给予普通饲料饲养。给药5周后采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察主动脉粥样斑块程度;加强普鲁士蓝染色法评估斑块铁沉积;生化试剂盒检测主动脉超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;免疫组化法检测主动脉4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)表达;Western blotting检测主动脉核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及4-HNE蛋白表达;qRT-PCR法检测主动脉Nrf2、Gpx4、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,Ptgs2)mRNA表达。结果三七皂苷R_(1)低、高剂量组及Fer-1组不同程度地影响ApoE^(−/−)小鼠的血脂水平(P<0.05、0.01),明显减轻主动脉粥样斑块程度,抑制铁沉积(P<0.01),提高SOD、GSH抗氧化能力(P<0.05、0.01),减少脂质过氧化MDA水平和4-HNE蛋白表达(P<0.05、0.01),上调铁死亡相关核Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白及Nrf2、Gpx4 mRNA的表达(P<0.01),下调Ptgs2 mRNA的表达(P<0.01),以三七皂苷R_(1)高剂量组效果最为显著。结论三七皂苷R_(1)改善ApoE^(−/−)小鼠脂代谢紊乱,抑制动脉粥样斑块形成,具有抗AS� 展开更多
关键词 三七皂苷R_(1) 动脉粥样硬化 铁死亡 核因子E2相关因子2/溶质载体家族7成员11/谷胱甘肽过氧化物酶4通路 脂质过氧化
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周安方运用补肾疏肝法治疗男性不育症经验 被引量:2
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作者 赵敏 雷志伟 +4 位作者 张家玮 卢威 史若怡 周安方 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期722-724,共3页
周安方教授治疗男性泌尿、生殖疾病经验丰富,认为“肾虚肝实”是男性不育的主要病机,不育之虚证责之于“肾虚”,不育之实证责之于“肝实”,临床中常常“肾虚”与“肝实”并见而导致不育症。周师善从“补肾疏肝”着手治疗不育症,临证分... 周安方教授治疗男性泌尿、生殖疾病经验丰富,认为“肾虚肝实”是男性不育的主要病机,不育之虚证责之于“肾虚”,不育之实证责之于“肝实”,临床中常常“肾虚”与“肝实”并见而导致不育症。周师善从“补肾疏肝”着手治疗不育症,临证分清“肾虚”与“肝实”之主次先后,在不同阶段侧重使用“补肾”或“疏肝”法,取得了比较满意的疗效。文章从病因、病机、治法、方药及典型案例等方面对周师运用补肾疏肝法治疗不育症的经验进行系统阐述,为同仁治疗不育症提供一种思路。 展开更多
关键词 不育症 肾虚肝实 名医经验 周安方
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