文摘核因子I/B(nuclear factor I/B,NFIB)是一个重要的转录因子,在细胞增殖、凋亡和组织发育等生物学过程中发挥重要作用。前期研究发现,绵羊NFIB基因存在3个转录异构体(transcript isoform),分别编码3个不同的蛋白质异构体(protein isoform):NFIB-1(48 k Da)、NFIB-2(43 k Da)和NFIB-3(39 k Da)。目前,这些蛋白质异构体之间的功能差异还不清楚。为此,该研究分别设计了羊NFIB基因转录异构体的特异性表达检测引物,采用Real-time PCR开展NFIB基因3个转录异构体的组织表达谱分析;分别构建NFIB基因的3个蛋白质异构体的真核表达载体,转染Ha CAT细胞,采用CCK-8、Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒比较了这3个NFIB异构体对Ha CAT细胞增殖和凋亡的影响。结果显示,NFIB基因3个转录异构体在绵羊的皮肤、脂肪、肾脏等多种组织和器官中表达,但它们在不同组织和器官中的相对表达量不同。CCK-8细胞增殖分析显示,与对照相比,NFIB-1具有促进Ha CAT细胞增殖的作用(P<0.01),NFIB-2的作用不明显,而NFIB-3显著抑制Ha CAT细胞的增殖(P<0.01)。Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测发现,这3个蛋白质异构体在一定程度上均促进Ha CAT细胞的凋亡,其中,NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡的作用强于NFIB-2(P<0.01),但NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡作用的差异不显著。这些结果表明,羊NFIB的3个蛋白质异构体在细胞增殖和凋亡中发挥不同作用。
