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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白基因导入棉花获得转基因植株 被引量:139
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作者 谢道昕 +1 位作者 倪万潮 黄骏麒 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1991年第4期367-373,共7页
苏云金芽孢杆菌的两个变种中B.t.aizawai 7-29和B.t.kurstaki HD-1是毒杀棉铃虫、红铃虫等鳞翅目害虫的优良菌株.本文通过花粉管途径将B.t.aizawai 7-29和 B.t.kurstaki HD-1的杀虫基因分别导入我国棉花品种(无毒棉、中棉12, 3118,3414)... 苏云金芽孢杆菌的两个变种中B.t.aizawai 7-29和B.t.kurstaki HD-1是毒杀棉铃虫、红铃虫等鳞翅目害虫的优良菌株.本文通过花粉管途径将B.t.aizawai 7-29和 B.t.kurstaki HD-1的杀虫基因分别导入我国棉花品种(无毒棉、中棉12, 3118,3414)中,经Dot blotting证明,有3株棉花(A1,A2, A5)带有B.t.aizawai 7-29的杀虫基因,18株棉花(B1-4,B6, B7,B9-15,B17—21)带有B.t.kurstaki HD-1的杀虫基因.取2株点杂交呈阳性的植株(A1,A2,)进行Southern blotting,结果表明,A1和A2植物DNA经Hind Ⅲ酶切后均出现了杀虫晶体蛋白基因片段,没有酶切的A1植株DNA在50kb处具有杂交性,表明杀虫基因均已整合到棉花基因组中.组织化学法检测的结果证明,与aizawai 7-29杀虫基因融合的GUS基因(二者共用1个CaMV 35S启动子和1个终止子.)在棉花(A1,A2)中得到了表达,为杀虫基因在转基因棉花中的表达提供了证据. 展开更多
关键词 棉花 杀虫 转基因植侏 芽孢杆菌
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高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母 被引量:79
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作者 姚斌 张春义 +1 位作者 王建华 《中国科学(C辑)》 CSCD 1998年第3期237-243,共7页
对来源于Aspergillusniger 96 3的植酸酶基因 phyA2进行了改造 ,包括去掉基因中的内含子和信号肽编码序列 ,在不改变所编码氨基酸的情况下 ,定点突变优化了对此基因在酵母中高效表达起关键作用的Arg密码子 .经改造的植酸酶基因按正确的... 对来源于Aspergillusniger 96 3的植酸酶基因 phyA2进行了改造 ,包括去掉基因中的内含子和信号肽编码序列 ,在不改变所编码氨基酸的情况下 ,定点突变优化了对此基因在酵母中高效表达起关键作用的Arg密码子 .经改造的植酸酶基因按正确的阅读框架融合到毕赤酵母 (Pichiapastoris)高效表达载体 pPIC9上的α 因子信号肽编码序列 3′端 ,重组表达载体电击转化毕赤酵母得到重组转化子 ,经Southernblotting分析证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中 ,并确定了基因整合的拷贝数 .Northernblotting分析证明植酸酶基因能进行正常的转录 .SDS PAGE分析和表达产物的酶活性研究证明 ,植酸酶能有效分泌和高效表达 (Arg密码子优化后其表达量可达每毫升培养液 1 5 0 0 0U ,比Arg密码子没有优化的表达量高约 37倍 ,比原菌株A .niger 96 3的表达量高约 30 0 0倍 ) ,表达产物具有正常的生物学活性 .这是迄今为止我国饲料工业中 ,构建的第 展开更多
关键词 植酸酶基因 毕赤酵母 高效表达 饲料 生物学活性
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苏云金芽孢杆菌杀虫基因导入中国栽培水稻品种中花11号获得转基因植株 被引量:109
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作者 谢道昕 倪丕冲 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1991年第8期830-834,共5页
在水稻的遗传转化中,迄今尚未见到将优良性状基因导入生产推广品种并获得转基因植株的报道。我们首次将B.t.杀虫基因导入到生产推广品种中花11号中,并建立了一套转导外源DNA的有效方法。应用剪掉内颖,同时去掉柱头保留完整外颖的方法可... 在水稻的遗传转化中,迄今尚未见到将优良性状基因导入生产推广品种并获得转基因植株的报道。我们首次将B.t.杀虫基因导入到生产推广品种中花11号中,并建立了一套转导外源DNA的有效方法。应用剪掉内颖,同时去掉柱头保留完整外颖的方法可使种子结实率提高到50%。遗传转化植株经分子杂交实验室证实,B.t.杀虫基因已整合到水稻基因组中,得到了转杀虫基因水稻工程植株。用Jefferson的组织化学法测定转基因植株的β-glucuronidase的活性,与B.t.杀虫基因形成翻译融合的GUS基因得到了表达,这为B.t.杀虫基因在转基因水稻植株中的表达提供了证据。 展开更多
关键词 水稻 转基因植株 杀虫基因 转化
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植酸酶的分子生物学与基因工程 被引量:91
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作者 姚斌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期1-5,共5页
植酸酶是一种新型的、可作为动物饲料添加剂的重要酶制剂,它对提高饲料中磷的利用率,提高动物的生产性能,以及减轻因动物高磷粪便所导致的环境水域的磷污染有着重要意义。本文综述了植酸酶的分子生物学及基因工程研究的最新进展,讨论了... 植酸酶是一种新型的、可作为动物饲料添加剂的重要酶制剂,它对提高饲料中磷的利用率,提高动物的生产性能,以及减轻因动物高磷粪便所导致的环境水域的磷污染有着重要意义。本文综述了植酸酶的分子生物学及基因工程研究的最新进展,讨论了其进一步的研究发展方向。 展开更多
关键词 植酸酶 分子生物学 基因工程 饲料添加剂
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苜蓿高含硫氨基酸蛋白转基因植株再生 被引量:41
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作者 吕德扬 +3 位作者 俞梅敏 唐顺学 侯宁 汪清 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第4期331-337,共7页
通过农杆菌介导法将高含硫氨基酸蛋白基因转入苜蓿,成功地诱导转基因植株再生。转化植株生长和发育良好。苜蓿子叶外植体是较理想的转化受体。冷凉湿润的环境条件是苜蓿移栽成活率高所必需的。
关键词 苜蓿 HNP 基因转化 植株再生 子叶外植体
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杨树NL-80106转Bt基因植株的获得及抗虫性 被引量:53
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作者 饶红宇 陈英 +3 位作者 黄敏仁 王明庥 伍宁丰 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2000年第2期1-5,共5页
通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导将苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)毒蛋白基因Bt转入杨树NL 80 10 6 (美洲黑杨×小叶杨 ,Populusdeltoides×Populussimonii) ,获得了再生植株。PCR及PCR Southernblotting... 通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导将苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis)毒蛋白基因Bt转入杨树NL 80 10 6 (美洲黑杨×小叶杨 ,Populusdeltoides×Populussimonii) ,获得了再生植株。PCR及PCR Southernblotting的分析结果表明 ,Bt基因已整合到基因组中。部分转基因植株的杀虫实验表明 ,转基因植株B45和B6 4对一龄舞毒蛾 (LymantriadisparLinn .)幼虫有明显抗性 ,饲喂转基因杨树叶片的幼虫死亡率显著高于未转基因的对照植株。 展开更多
关键词 杨树 转基因 抗虫性 BT基因导入
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迎接21世纪农作物生物技术的挑战 被引量:62
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作者 张春义 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第5期1-6,共6页
近些年,农作物生物技术在世界范围内取得了飞速的发展,一批抗虫、抗病、耐除草剂和高产优质的农作物新品种已培育成功。与此同时,其产业化步伐在各国政府的大力参予下正在加快,预计在下个世纪初期将成为许多国家经济的重要支柱产业... 近些年,农作物生物技术在世界范围内取得了飞速的发展,一批抗虫、抗病、耐除草剂和高产优质的农作物新品种已培育成功。与此同时,其产业化步伐在各国政府的大力参予下正在加快,预计在下个世纪初期将成为许多国家经济的重要支柱产业之一,并在解决人类目前所面临的粮食安全、环境恶化、资源匮乏、效益衰减等问题上发挥巨大作用。本文综述了农作物生物技术的发展现状,对下一世纪该学科的发展动态作了展望。 展开更多
关键词 农作物 生物技术 21世纪
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木聚糖酶的分子生物学及其应用 被引量:58
8
作者 张红莲 姚斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第3期23-26,30,共5页
木聚糖是一种多聚五碳糖 ,是植物细胞中的主要半纤维素成分。木聚糖酶是可将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的复合酶系。综述了木聚糖酶分子生物学上的研究进展及其在饲料、造纸、食品、能源工业上的应用。
关键词 木聚糖酶 分子生物学 应用
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含苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因的杨树工程植株的建立 被引量:47
9
作者 伍宁丰 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1991年第9期705-708,共4页
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, B.t.)制剂是杨树鳞翅目害虫的有效微生物农药,安全无毒,无环境污染问题。但无论施用化学农药或B.t.制剂防治叶部害虫时,都需要高压喷雾,困难很大。施用后如遇雨天,农药被冲走,达不到治虫效果;... 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, B.t.)制剂是杨树鳞翅目害虫的有效微生物农药,安全无毒,无环境污染问题。但无论施用化学农药或B.t.制剂防治叶部害虫时,都需要高压喷雾,困难很大。施用后如遇雨天,农药被冲走,达不到治虫效果;而在阳光直接照射下,又由于B.t.杀虫晶体蛋白对紫外线敏感,使杀虫效果大为减低。因此将B.t. 展开更多
关键词 杀虫蛋白基因 芽孢杆菌 杨树 植株
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抗虫的转AaIT基因杨树的获得 被引量:56
10
作者 伍宁丰 孙芹 +4 位作者 姚斌 饶红宇 黄敏仁 王明庥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期129-133,共5页
通过根癌农杆菌叶盘法将构建在双元载体上的昆虫特异性神经蝎毒素AaIT基因转化至中国南方杨树N106(小叶杨×美洲黑杨,P.deltoides×P.simonii)中,共获得了62株再生植株。PCR分析及PCR产物Southernblotting的分析结果表明,AaIT... 通过根癌农杆菌叶盘法将构建在双元载体上的昆虫特异性神经蝎毒素AaIT基因转化至中国南方杨树N106(小叶杨×美洲黑杨,P.deltoides×P.simonii)中,共获得了62株再生植株。PCR分析及PCR产物Southernblotting的分析结果表明,AaIT基因整合在再生植株的基因组上。对部分转AaIT基因植株进行了杀虫实验,转基因植株A5对一龄舞毒蛾(Lymantriadispar)幼虫有明显的抗性,饲喂转基因杨树叶片的幼虫死亡率显著高于未转基因对照植株,其取食面积小,存活幼虫体重明显小于对照。ELISA分析证明了AaIT蛋白的表达。 展开更多
关键词 昆虫特异性神经蝎毒素AaIT 杨树 遗传转化 抗虫
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获得高抗虫转双基因烟草 被引量:46
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作者 赵荣敏 +2 位作者 石西平 王京红 纵微星 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期1-5,共5页
利用DNA合成仪人工合成了豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)的cDNA编码全序列。合成的基因经过克隆和序列分析后,克隆到植物高效表达载体上,并转化农杆菌,通过共转化的方法,将CpTI基因和经人工改造的苏云金芽孢杆菌(B.t)δ-内毒素基因共转化烟草... 利用DNA合成仪人工合成了豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)的cDNA编码全序列。合成的基因经过克隆和序列分析后,克隆到植物高效表达载体上,并转化农杆菌,通过共转化的方法,将CpTI基因和经人工改造的苏云金芽孢杆菌(B.t)δ-内毒素基因共转化烟草,得到经PCR扩增并Southern-blotting验证的分别含有CpTI和B.t基因的植株以及同时含有CpTI和B.t基因的植株。利用棉铃虫幼虫进行的杀虫测试表明,转基因烟草和对照烟草相比具有明显的杀虫活性,同时转双基因的烟草和转单一基因的烟草相比具有增强的杀虫活性。 展开更多
关键词 烟草 高抗虫烟草 转基因烟草 植物基因工程
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来源于Bacillus subtilis的中性植酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:41
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作者 姚斌 袁铁铮 +4 位作者 王元火 操时树 王亚茹 史秀 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期11-15,共5页
通过PCR的方法从Bacillussubtilis基因组中克隆了中性植酸酶基因nphy ,DNA全序列分析表明其结构基因全长 115 2个核苷酸 (编码 383个氨基酸 ) ,5′端有一编码 2 6个氨基酸的信号肽序列。去除信号肽编码序列的nphy克隆到大肠杆菌IPTG诱... 通过PCR的方法从Bacillussubtilis基因组中克隆了中性植酸酶基因nphy ,DNA全序列分析表明其结构基因全长 115 2个核苷酸 (编码 383个氨基酸 ) ,5′端有一编码 2 6个氨基酸的信号肽序列。去除信号肽编码序列的nphy克隆到大肠杆菌IPTG诱导表达载体pTYB40上 ,在大肠杆菌中得到了高效表达 ,表达量达到大肠杆菌可溶性蛋白的 40 %以上 ,表达产物具有生物学活性 ,证实了克隆到的中性植酸酶的编码基因有正常的生物学功能。 展开更多
关键词 中性植酸酶 基因克隆 高效表达 大肠杆菌
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表达Harpin蛋白的转基因马铃薯降低晚疫病斑生长率 被引量:40
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作者 李汝刚 《中国科学(C辑)》 CSCD 1999年第1期56-61,共6页
以苹果火疫病菌 (Erwiniaamylovora)的Harpin蛋白基因和马铃薯 prp1 1基因启动子为主要元件 ,探索了以利用病原侵染诱导植物过敏性反应为目标的抗病基因工程新策略 .通过构建Harpin蛋白基因的 3个植物表达载体和遗传转化 ,获得68个转基... 以苹果火疫病菌 (Erwiniaamylovora)的Harpin蛋白基因和马铃薯 prp1 1基因启动子为主要元件 ,探索了以利用病原侵染诱导植物过敏性反应为目标的抗病基因工程新策略 .通过构建Harpin蛋白基因的 3个植物表达载体和遗传转化 ,获得68个转基因马铃薯植株 .Southern ,Northern和Westernblot分析证明 ,Harpin蛋白基因实现了在转基因植株中的插入、转录和蛋白表达 ,用Phytophthorainfestans复合生理小种测定表明 ,Harpin蛋白在转基因植株中的组成型表达和病原侵染诱导表达均能降低病斑的扩展速率 ;在病原侵染诱导Harpin蛋白基因表达的转基因植株中 ,发现有 2个植株共 3 0个接种叶片上无菌丝形成 ,病斑局限于接种点内 ,表明过敏性反应的遗传操作在植物抗真菌病基因工程中具有广阔的应用前景 . 展开更多
关键词 真菌病害 HARPIN 马铃薯 晚疫病 转基因马铃薯
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枯草芽孢杆菌中性植酸酶的纯化和酶学性质 被引量:39
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作者 王亚茹 姚斌 +4 位作者 曾虹 史秀 操时树 袁铁铮 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期198-203,共6页
从土壤中分离到了产中性植酸酶的枯草芽孢杆菌菌株并对所产植酸酶进行了分离纯化。此中性植酸酶的反应最适 pH为 7 5,最适温度为 55℃ ,在 37℃下以植酸钠为底物的Km值为 0 1 9mmol/L ,植酸酶活性依赖Ca2 +的存在。酶蛋白的分子量大小... 从土壤中分离到了产中性植酸酶的枯草芽孢杆菌菌株并对所产植酸酶进行了分离纯化。此中性植酸酶的反应最适 pH为 7 5,最适温度为 55℃ ,在 37℃下以植酸钠为底物的Km值为 0 1 9mmol/L ,植酸酶活性依赖Ca2 +的存在。酶蛋白的分子量大小约为 45kD ,纯酶蛋白N端序列为Lys His Lys Leu Ser Asp Pro Tyr His Phe Thr。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 中性植酸酶 酶学性质 纯化
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基因枪法转化籼稻胚性愈伤组织获得可育的转基因植株 被引量:33
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作者 许新萍 卫剑文 +1 位作者 李宝健 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第3期219-227,共9页
以籼稻胚性愈伤组织作为基因枪法转化的靶材料,建立了可重复的、高效的籼稻转化系统。从籼稻成熟胚诱寻生长3~4周的愈伤组织,经过2~6周继代培养后,可以形成足够量的颗粒状胚性意伤组织。用含有bar基因B.t.δ-内毒素基因的质粒pFWZ1... 以籼稻胚性愈伤组织作为基因枪法转化的靶材料,建立了可重复的、高效的籼稻转化系统。从籼稻成熟胚诱寻生长3~4周的愈伤组织,经过2~6周继代培养后,可以形成足够量的颗粒状胚性意伤组织。用含有bar基因B.t.δ-内毒素基因的质粒pFWZ16轰击转化胚性愈伤组织,在含2~4mg/LBasta的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养,并通过干燥处理增加再生频率和出苗数。从接种到获得转化小植株只需要4~5个月。供试的两个品种为华南地区推广的优良籼稻品种,共轰击821块胚性愈伤组织,获得48个系的477株Basta抗性植株。经PCR扩增分析和Southernblot杂交分析证实外源的bar基因和B.t.基因己整合到转基因水稻植株基因组中,Basta抗性鉴定和PNA点杂交分析表明这两个基因在转基因植株中得到表达。87.5%的转基因植株可育。Basta喷施实验和Southernblot分析证明bar基因和B.t.基因已遗传至子代,并且主要按孟德尔规律进行分离。 展开更多
关键词 籼稻 胚性愈伤组织 基因枪法转化 育种
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马铃薯抗晚疫病研究进展 被引量:38
16
作者 李汝刚 伍宁丰 +1 位作者 宋伯符 《马铃薯杂志》 1997年第4期243-250,共8页
关键词 马铃薯 晚疫病 抗性
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转双基因抗虫烟草延缓棉铃虫抗性的作用评价 被引量:35
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作者 赵建周 +2 位作者 贤林 石西平 卢美光 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第15期1635-1639,共5页
用转单 (Bt)、双 (Bt+CpTI)基因抗虫烟草按平均校正死亡率约 6 0 %汰选棉铃虫 1 8代 ,棉铃虫对Cry1Ac型Bt杀虫蛋白的抗性指数分别增长为 1 3.1 ,3.0 2倍 ,其中转单基因烟草汰选的种群在两种抗虫烟草上的死亡率显著降低 ,而转双基因烟草... 用转单 (Bt)、双 (Bt+CpTI)基因抗虫烟草按平均校正死亡率约 6 0 %汰选棉铃虫 1 8代 ,棉铃虫对Cry1Ac型Bt杀虫蛋白的抗性指数分别增长为 1 3.1 ,3.0 2倍 ,其中转单基因烟草汰选的种群在两种抗虫烟草上的死亡率显著降低 ,而转双基因烟草汰选的种群与对照种群相比无显著差异 .研究结果首次在室内人工汰选的条件下证明 ,转双基因抗虫烟草可显著延缓棉铃虫的抗性形成 . 展开更多
关键词 转基因烟草 棉铃虫 抗药性 抗虫烟草 杀虫活性
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木聚糖酶分子结构与重要酶学性质关系的研究进展 被引量:28
18
作者 杨浩萌 姚斌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期6-11,共6页
木聚糖是一种多聚五碳糖 ,是植物细胞中主要的半纤维素成分。木聚糖酶是可将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶 ,它在饲料、造纸、食品、能源工业和环境科学上有着广阔的应用前景。随着分子生物学、结构生物学的发展及蛋白质工程的应... 木聚糖是一种多聚五碳糖 ,是植物细胞中主要的半纤维素成分。木聚糖酶是可将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶 ,它在饲料、造纸、食品、能源工业和环境科学上有着广阔的应用前景。随着分子生物学、结构生物学的发展及蛋白质工程的应用 ,对木聚糖酶结构和功能的研究不断深入。这里重点阐述与酶的活性、热稳定性、作用pH、等电点、底物亲和性及催化效率等重要性质相关的分子结构研究进展 ,讨论了其进一步的研究发展方向。研究木聚糖酶结构与功能的关系 ,对进一步加深木聚糖酶作用机制的了解、指导木聚糖酶的分子改良有重要意义。 展开更多
关键词 木聚糖酶 结构与功能 催化残基 热稳定性 pH性质 底物亲和性
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应用B.t.和SBTi基因提高水稻抗虫性的研究 被引量:31
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作者 卫剑文 许新萍 +3 位作者 陈金婷 张良佑 李宝健 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期603-608,共6页
利用基因枪法将单个B .t.基因或与SBTi基因一起导入到两个华南地区优良籼稻品种中 ,获得 2 1个转B .t.单基因的植株系 ,4个转B .t.和SBTi双基因的植株系。对R1代植株的分子杂交和遗传分析表明 ,3个转双基因系中多个拷贝的B .t.和SBTi基... 利用基因枪法将单个B .t.基因或与SBTi基因一起导入到两个华南地区优良籼稻品种中 ,获得 2 1个转B .t.单基因的植株系 ,4个转B .t.和SBTi双基因的植株系。对R1代植株的分子杂交和遗传分析表明 ,3个转双基因系中多个拷贝的B .t.和SBTi基因均是整合在植株基因组同一染色体上相同或相近位点。Northernblot证明在R2 代转基因植株中B .t .基因稳定表达。对稻纵卷叶螟的抗性实验表明 ,转B .t .单基因或B .t.和SBTi双基因的转基因植株均较原种对照有更强的抗性 ,而转双基因植株较转单基因植株又有更强的抗性。 展开更多
关键词 B.t.基因 SBTi基因 水稻 转基因植株 抗虫性
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表达Osmotin蛋白的转基因马铃薯对晚疫病的抗性分析 被引量:26
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作者 李汝刚 伍宁丰 +3 位作者 宋伯符 G.A.A.Vleeshouwers A.Pereira 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期135-140,共6页
将缺失C端信号肽序列的Osmotin基因和在第96位氨基酸处发生琥珀突变的Osmotin基因置于CaMV双35S启动子驱动下,转化马铃薯,获得NPTI抗性植株。经对20株NPTI抗性植株的Southern检测和对5... 将缺失C端信号肽序列的Osmotin基因和在第96位氨基酸处发生琥珀突变的Osmotin基因置于CaMV双35S启动子驱动下,转化马铃薯,获得NPTI抗性植株。经对20株NPTI抗性植株的Southern检测和对55株NPTI抗性植株的Nouthern分析,证实了Osmotin基因的插入和转录。对21株转Osmotin基因和17株转琥珀突变Osmotin基因植株的抗病性测定,分别筛选出8株和10株抗病性与非转基因植株有显著差异(α=005)的转基因植株。对8株转Osmotin基因植株的DotblotELISA和Western杂交分析,证明Osmotin蛋白胞外分泌能够赋予转基因植株叶片抗晚疫病的能力,研究结果暗示Osmotin蛋白具有抑菌活性的部位可能位于其N端。 展开更多
关键词 OSMOTIN 胞外分泌 转基因植株 马铃薯晚疫病
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