三种磷脂酶A1活力测定方法的比较 被引量：5

1

作者 赵梦梦 薛正莲 +2 位作者 黄祖耀 苏燕南 马琦亚 《食品与发酵科技》 CAS 2012年第3期74-77,85,共5页

三种常用的磷脂酶A1活力测定的方法分别为碱滴定法、双层平板法和分光光度法。通过对磷脂酶A1标准品和实验室产磷脂酶A1菌株的活力进行测定,比较这三种方法在时间、准确性和精确性方面的差异。结果得出分光光度法具有耗时短、底物用量... 三种常用的磷脂酶A1活力测定的方法分别为碱滴定法、双层平板法和分光光度法。通过对磷脂酶A1标准品和实验室产磷脂酶A1菌株的活力进行测定,比较这三种方法在时间、准确性和精确性方面的差异。结果得出分光光度法具有耗时短、底物用量少、结果稳定、精确性好的优点。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 活力 分光光度法 棕榈酸

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基因组改组选育产酯化酶地衣芽孢杆菌 被引量：4

2

作者 薛正莲 刘阳 +3 位作者 王洲 马琦亚 赵世光 苏燕南 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期43-48,共6页

从高温大曲中筛选到一株产酯化酶的地衣芽胞杆菌G2。采用低温等离子体对G2进行诱变,以筛选酶活提高最多的3株菌株作为亲本。将亲本原生质体灭活后对其进行基因组改组。将融合后的菌体进行筛选纯化之后,对融合子进行发酵测定其酶活并挑... 从高温大曲中筛选到一株产酯化酶的地衣芽胞杆菌G2。采用低温等离子体对G2进行诱变,以筛选酶活提高最多的3株菌株作为亲本。将亲本原生质体灭活后对其进行基因组改组。将融合后的菌体进行筛选纯化之后,对融合子进行发酵测定其酶活并挑选酶活较高菌株进行传代测定其酶活稳定性。结果表明6#融合子酶活最高且稳定为10.7U/ml,相对于初始菌株的5.3U/ml提高了102%。对其发酵液进行气相色谱分析表明,6#融合子代谢产一定量的酸类、酯类及醇类等物质,其中乙偶姻含量达2565mg/L。 展开更多

关键词 酯化酶 基因组改组 地衣芽孢杆菌 等离子诱变

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一种电击转化枯草芽孢杆菌方法的优化 被引量：4

3

作者 张爽 薛正莲 +2 位作者 陈环 苏燕南 王洲 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 2014年第8期60-63,80,共5页

提出了一种电击转化枯草芽孢杆菌的方法。该方法通过调节细胞培养和电击转化过程中培养基和溶液成分来调节细胞渗透压,提高细胞在高电场强度电击后的存活率而达到提高转化效率的目的。优化前的转化率为5.0×105cfu/μg,经优化后转... 提出了一种电击转化枯草芽孢杆菌的方法。该方法通过调节细胞培养和电击转化过程中培养基和溶液成分来调节细胞渗透压,提高细胞在高电场强度电击后的存活率而达到提高转化效率的目的。优化前的转化率为5.0×105cfu/μg,经优化后转化效率可达8×106cfu/μg,比优化前提高了15倍。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 电击转化 转化率

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粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因大肠杆菌优化表达 被引量：4

4

作者 苏燕南 薛正莲 +1 位作者 陈涛 马琦亚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期36-42,共7页

以粘质沙雷氏菌PL-06基因组为模板扩增得到磷脂酶A1基因plaA和含有辅助蛋白的磷脂酶A1基因plaB。plaA和plaB基因与pET-28a(+)连接后转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,得到基因工程菌AP28和BP28。AP28最佳的诱导表达条件为诱导初始OD600值0.5,I... 以粘质沙雷氏菌PL-06基因组为模板扩增得到磷脂酶A1基因plaA和含有辅助蛋白的磷脂酶A1基因plaB。plaA和plaB基因与pET-28a(+)连接后转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,得到基因工程菌AP28和BP28。AP28最佳的诱导表达条件为诱导初始OD600值0.5,IPTG浓度为0.2mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为4h,优化后磷脂酶A1蛋白表达水平从32%上升至46%,包涵体复性的磷脂酶A1酶活从10.8U/ml上升到12U/ml,相对于BP28工程菌,目的蛋白的表达对宿主细胞毒性小,而且得到的蛋白容易纯化。因此通过优化磷脂酶A1基因plaA的诱导条件,使磷脂酶A1以大量的包涵体形式表达,从而得到较高活性的磷脂酶A1并避免其对宿主细胞的毒性是可行的,而且可以得到大量纯化的磷脂酶A1蛋白,方便下一步的研究。 展开更多

关键词 粘质沙雷氏菌 磷脂酶A1 诱导表达 包涵体复性 细胞毒性

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磷脂酶A1产生菌株的筛选 被引量：4

5

作者 司武阳 薛正莲 +1 位作者 赵梦梦 苏燕南 《食品与发酵科技》 CAS 2010年第2期27-30,共4页

磷脂酶A1是专一水解天然磷脂Sn-1位酰基的酶,可以得到Sn-2酰基溶血磷脂和脂肪酸。磷脂酶在商业上可用于在炼油过程(油脱胶)磷脂的去除。实验以卵磷脂为唯一碳源,从富油土壤中筛选具有较高磷脂酶A1活力的菌株PL-06。以其为出发菌株,从碳... 磷脂酶A1是专一水解天然磷脂Sn-1位酰基的酶,可以得到Sn-2酰基溶血磷脂和脂肪酸。磷脂酶在商业上可用于在炼油过程(油脱胶)磷脂的去除。实验以卵磷脂为唯一碳源,从富油土壤中筛选具有较高磷脂酶A1活力的菌株PL-06。以其为出发菌株,从碳源、氮源、无机盐等几个方面对菌株产酶的发酵条件进行了优化。确定菌株PL-06最佳氮源为氯化铵,麦芽糖和卵磷脂为最佳复合碳源,浓度分别为2.0%和0.5%,最佳无机盐为FeSO4。发酵48h后酶活较优化前的6.83U/mL提高到18.68U/mL,提高了1.73倍。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 筛选 发酵 条件优化

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紫外-微波复合诱变原生质体选育那西肽高产菌株 被引量：3

6

作者 秦艳飞 薛正莲 +1 位作者 苏燕南 王栋 《食品与发酵科技》 CAS 2011年第3期39-42,共4页

以UV-19为出发菌种,研究了紫外、微波以及紫外-微波复合对活跃链霉菌原生质体的诱变效应。结果表明复合诱变对该菌原生质体有明显的致死作用。通过紫外-微波复合诱变,筛选到一株优良菌株PUM-13,其摇瓶含量达到883.450μg/mL,较出发菌株... 以UV-19为出发菌种,研究了紫外、微波以及紫外-微波复合对活跃链霉菌原生质体的诱变效应。结果表明复合诱变对该菌原生质体有明显的致死作用。通过紫外-微波复合诱变,筛选到一株优良菌株PUM-13,其摇瓶含量达到883.450μg/mL,较出发菌株提高了17.14%,5代后生产性能稳定。 展开更多

关键词 活跃链霉菌 那西肽 原生质体 紫外诱变 微波诱变

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分光光度计法测定磷脂酶A1酶活条件优化 被引量：3

7

作者 苏燕南 薛正莲 +2 位作者 马琦亚 王洲 赵世光 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 2013年第3期22-27,共6页

优化了分光光度计法测定Lecitase Ultra的磷脂酶A1活力的相关参数。根据单因素实验结果选择底物浓度、酶稀释倍数、pH值3个因素进行正交实验,经分析得到酶活测定的最佳条件为:酶稀释倍数为1 250倍,缓冲体系pH值为6.5,离子强度为50 mM,... 优化了分光光度计法测定Lecitase Ultra的磷脂酶A1活力的相关参数。根据单因素实验结果选择底物浓度、酶稀释倍数、pH值3个因素进行正交实验,经分析得到酶活测定的最佳条件为:酶稀释倍数为1 250倍,缓冲体系pH值为6.5,离子强度为50 mM,底物浓度为6%,终止酶反应方式为加入0.4M TCA溶液。优化后酶活最高值为4 876.9 U/mL,较原工艺提高了18.42%。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 LECITASE ULTRA 分光光度计法 正交实验

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一株产灵菌红素菌的筛选及其等离子体诱变 被引量：3

8

作者 张德伟 薛正莲 +3 位作者 王洲 苏燕南 何阳登 张国锋 《安徽工程大学学报》 CAS 2016年第1期10-15,共6页

为获得能高效合成灵菌红素的菌株,首先对土壤中的微生物进行分离,筛选得到一株优势菌株.分别采用形态学、生理生化实验以及16SrDNA测序分析,鉴定该菌株为粘质沙雷氏菌属,命名为Serratiamarcescens ZX-01.对该菌株分别采用常压室温等离子... 为获得能高效合成灵菌红素的菌株,首先对土壤中的微生物进行分离,筛选得到一株优势菌株.分别采用形态学、生理生化实验以及16SrDNA测序分析,鉴定该菌株为粘质沙雷氏菌属,命名为Serratiamarcescens ZX-01.对该菌株分别采用常压室温等离子体(Atmospheric and Room Temperature Plasma,ARTP)诱变,并进行平板初筛和摇瓶复筛.经多轮诱变后,得到一株灵菌红素优势菌株ZX-3-10,其产量可达128.7mg/L,比诱变前提高123%.五代产量稳定性试验结果表明,该菌株具有良好的产量传代稳定性. 展开更多

关键词 粘质沙雷氏菌 灵菌红素 筛选鉴定

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灵菌红素微孔板发酵条件优化 被引量：3

9

作者 刘瑞华 张敏 +3 位作者 何阳登 余飞 苏燕南 薛正莲 《食品与发酵科技》 CAS 2018年第4期16-20,共5页

为建立灵菌红素高产突变株快速培养和检测方法,比较了酶标仪与分光光度计检测灵菌红素产量之间的一致性及摇瓶、24孔板、48孔板发酵灵菌红素产量之间的关联性,结果表明:酶标仪与分光光度法之间具有很好的一致性,24株突变株产灵菌红素孔... 为建立灵菌红素高产突变株快速培养和检测方法,比较了酶标仪与分光光度计检测灵菌红素产量之间的一致性及摇瓶、24孔板、48孔板发酵灵菌红素产量之间的关联性,结果表明:酶标仪与分光光度法之间具有很好的一致性,24株突变株产灵菌红素孔板发酵液两种测定方法的相关系数R^2=0.9788。摇瓶灵菌红素产量要高于24孔板,24孔板产量高于48孔板,而且三者具有很好的关联性。通过单因素试验对24孔板发酵产灵菌红素条件进行了优化,结果表明:当接种量6%、装液量2mL、转速200r/min时,24孔板发酵产灵菌红素产量最高,达到了0.948g/L,较最初产量的0.833g/L提高了13.8%。 展开更多

关键词 灵菌红素 发酵优化 微孔板 酶标仪

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产磷脂酶A1菌株的筛选及其发酵条件的优化 被引量：3

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作者 赵梦梦 薛正莲 +2 位作者 苏燕南 赵世光 陈涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期901-904,908,共5页

目的筛选产磷脂酶A1(Phospholipase A1,PLA1,EC 3.1.1.32)的菌株,并优化其发酵条件。方法从富油土壤中筛选产PLA1的菌株,并对PLA1活力高的菌株进行分子生物学鉴定及发酵条件的优化。结果筛选出的5个菌株中Dx208菌株PLA1活力最高,摇瓶发... 目的筛选产磷脂酶A1(Phospholipase A1,PLA1,EC 3.1.1.32)的菌株,并优化其发酵条件。方法从富油土壤中筛选产PLA1的菌株,并对PLA1活力高的菌株进行分子生物学鉴定及发酵条件的优化。结果筛选出的5个菌株中Dx208菌株PLA1活力最高,摇瓶发酵酶活力达4.52 U/ml。根据该菌株的形态特征分析和16S rDNA基因序列,初步鉴定其为链霉菌属(Streptomyces)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。该菌株的最佳发酵条件为:初始pH 7.0,培养温度30℃,发酵时间5 d,摇床转速200 r/min,发酵液中PLA1活力可达7.15 U/ml,为优化前的1.58倍。结论已筛选出1株高产PLA1的菌株,并优化了其发酵条件,为PLA1的生产及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 灰色链霉菌 筛选 发酵 优化

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磷脂酶A1高产菌株的筛选及其等离子体诱变 被引量：2

11

作者 马琦亚 薛正莲 +2 位作者 苏燕南 王洲 赵世光 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1656-1662,共7页

目的从富油土壤中筛选磷脂酶A1高产菌株,优化其发酵条件,并经等离子诱变提高其产酶能力。方法用筛选培养基和发酵培养基分别对富油土壤中磷脂酶A1产生菌进行初筛和复筛,经气相色谱鉴定产酶类型;对获得的高产菌株进行形态、生理生化特征... 目的从富油土壤中筛选磷脂酶A1高产菌株,优化其发酵条件,并经等离子诱变提高其产酶能力。方法用筛选培养基和发酵培养基分别对富油土壤中磷脂酶A1产生菌进行初筛和复筛,经气相色谱鉴定产酶类型;对获得的高产菌株进行形态、生理生化特征和分子生物学鉴定;优化该菌株的发酵时间,温度,pH值及摇床转速;从该菌株出发进行等离子体诱变,绘制致死率曲线,进行平板初筛及摇瓶复筛,并检测获得菌株的遗传稳定性。结果经初筛和复筛,获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,经气相色谱鉴定其产酶为磷脂酶A1;该菌株在普通琼脂培养基上呈圆形,质地软,表面光滑、扁平,乳白色,晕圈明显,为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌;最佳发酵条件为:发酵时间12 h,初始pH 8.0,温度32℃,摇床转速200 r/min,优化后酶活为9.12 U/ml,较优化前(6.74 U/ml)提高了35.3%;等离子体诱变后,经平板及摇瓶筛选,获得的菌株W22-5酶活最高,为12.80 U/ml,较诱变前(9.12 U/ml)提高了89.91%,且具有良好的遗传稳定性。结论成功获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,优化了该菌的发酵条件,且经等离子诱变进一步提高了菌株的产酶能力,为磷脂酶A1的生产和应用奠定了基础。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 筛选 等离子体 诱变

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粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1在大肠杆菌中的分泌表达及其条件优化 被引量：2

12

作者 陈环 薛正莲 +3 位作者 王洲 张爽 苏燕南 胡艳瑾 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期193-197,202,共6页

克隆粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因pla A,与载体p ET-22b(+)连接构建重组质粒p ET-22b(+)-pla A,并将重组质粒导入受体菌E.coli BL21(DE3)中表达,构建得到重组菌AP22,IPTG诱导表达目的蛋白后将培养基蛋白进行SDS-PAGE分析显示:重组蛋... 克隆粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因pla A,与载体p ET-22b(+)连接构建重组质粒p ET-22b(+)-pla A,并将重组质粒导入受体菌E.coli BL21(DE3)中表达,构建得到重组菌AP22,IPTG诱导表达目的蛋白后将培养基蛋白进行SDS-PAGE分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式大量存在于发酵液中,分子质量约35 ku,与预期蛋白大小一致。以磷脂酶A1酶活为指标,在单因素实验的基础之上,通过正交实验得到摇瓶培养最佳条件为:氨苄青霉素终浓度30μg/m L,IPTG加量0.25 mmol/L,温度为34℃,OD600值为0.3,诱导时间4 h。在此条件下重组胞外磷脂酶A1酶活可高达8.6 U/m L,比优化前提高了43.3%。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 粘质沙雷氏菌 分泌表达 优化

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L-天冬氨酸-β-脱羧酶发酵条件的响应面优化 被引量：1

13

作者 薛正莲 高理所 +2 位作者 赵世光 赵梦梦 苏燕南 《工业微生物》 CAS CSCD 2011年第6期11-14,共4页

利用Plackett-Burman设计和响应面分析方法对L-天冬氨酸-β-脱羧酶产生菌德阿昆哈假单孢菌XG-2-81的发酵条件进行优化。得出影响产L-天冬氨酸-β-脱羧酶的3个重要的因素为:玉米浆,多肽朊和装液量。通过对实验结果的方差分析,得到其最适... 利用Plackett-Burman设计和响应面分析方法对L-天冬氨酸-β-脱羧酶产生菌德阿昆哈假单孢菌XG-2-81的发酵条件进行优化。得出影响产L-天冬氨酸-β-脱羧酶的3个重要的因素为:玉米浆,多肽朊和装液量。通过对实验结果的方差分析,得到其最适条件分别为:玉米浆浓度0.64%,多肽朊浓度1.21%,装液量14.71%,此时酶活力达到1 107μg/mL·h,比优化前提高了10.83%。 展开更多

关键词 响应面设计法 L-天冬氨酸-β-脱羧酶 德阿昆哈假单孢菌 优化

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紫外-激光复合诱变选育天冬氨酸转氨酶高产菌株 被引量：1

14

作者 薛正莲 江荣珍 +2 位作者 杨超英 王洲 苏燕南 《氨基酸和生物资源》 CAS 2010年第4期46-49,共4页

对天冬氨酸转氨酶产生菌大肠杆菌XJ-1原生质体进行紫外-激光复合诱变筛选,结果表明,复合诱变对该菌的原生质体有明显的致死作用。以致死率和正突变率为指标,确定了紫外和He-Ne激光照射的最佳时间分别为45 s和40min。在此条件下对大肠杆... 对天冬氨酸转氨酶产生菌大肠杆菌XJ-1原生质体进行紫外-激光复合诱变筛选,结果表明,复合诱变对该菌的原生质体有明显的致死作用。以致死率和正突变率为指标,确定了紫外和He-Ne激光照射的最佳时间分别为45 s和40min。在此条件下对大肠杆菌原生质体进行紫外-激光复合诱变,得到3株高产菌株,分别命名为XJ-1-45、XJ-1-86和XJ-1-99,酶活较出发菌株XJ-1分别提高了12.82%、17.37%和26.27%。传代培养表明突变株生产性能稳定。 展开更多

关键词 紫外线 HE-NE激光 天冬氨酸转氨酶 原生质体 复合诱变

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产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及鉴定

15

作者 黄祖耀 薛正莲 +2 位作者 苏燕南 陈涛 赵世光 《工业微生物》 CAS CSCD 2012年第5期35-39,共5页

从泡菜汁样品中初步筛选得到6株乳酸菌,采用纸层析和分光光度法对含1%谷氨酸的GYP发酵液中GABA含量分析,复筛得到一株产量较高的3#菌株,培养3d其GABA含量可达8.006g/L。经形态学、生理生化特性分析及16S rDNA鉴定,所筛乳酸菌株为乳酸肠... 从泡菜汁样品中初步筛选得到6株乳酸菌,采用纸层析和分光光度法对含1%谷氨酸的GYP发酵液中GABA含量分析,复筛得到一株产量较高的3#菌株,培养3d其GABA含量可达8.006g/L。经形态学、生理生化特性分析及16S rDNA鉴定,所筛乳酸菌株为乳酸肠球菌。 展开更多

关键词 乳酸菌 Γ-氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 筛选

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当代大学生关于“美丽中国”践行度的调查分析——以安徽工程大学为例

16

作者 苏燕南 苗万青 +1 位作者 陶叶炯 李林 《高校辅导员学刊》 2014年第5期72-75,共4页

本文通过问卷调查的形式,从生态文明的自然之美、科学发展的和谐之美和温暖感人的人文之美三个方面来探寻大学生对于"美丽中国"的践行度。践行情况表现出性别和年级差异,女生和高年级同学的践行度高于其他。因此,建议通过学... 本文通过问卷调查的形式,从生态文明的自然之美、科学发展的和谐之美和温暖感人的人文之美三个方面来探寻大学生对于"美丽中国"的践行度。践行情况表现出性别和年级差异,女生和高年级同学的践行度高于其他。因此,建议通过学校教育宣传、管理监督,学生自主认知、学习、实践等方面提高当代大学生"美丽中国"践行度。 展开更多

关键词 大学生 自然之美 和谐之美 人文之美

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响应面法优化谷氨酸脱羧酶转化条件

17

作者 薛正莲 张珂 +2 位作者 陈涛 苏燕南 王洲 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第3期61-66,共6页

采用响应面法对重组大肠杆菌谷氨酸脱羧酶转化谷氨酸生成γ-氨基丁酸的条件进行优化。首先通过单因素实验得出酶转化的初步条件,再经过Plackett-Burman设计法筛选出主要影响因素,并利用响应面分析法对各主要因素进行优化,最终确定的最... 采用响应面法对重组大肠杆菌谷氨酸脱羧酶转化谷氨酸生成γ-氨基丁酸的条件进行优化。首先通过单因素实验得出酶转化的初步条件,再经过Plackett-Burman设计法筛选出主要影响因素,并利用响应面分析法对各主要因素进行优化,最终确定的最佳条件为:底物浓度0.290 mol/L,pH值4.99,转化温度52.10℃,转化时间60 min 22s。采用优化后的转化条件进行转化酶活达到了1461.84μmol/(5 mL·h),比优化前提高了19.11%。 展开更多

关键词 Γ-氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 响应面法 转化条件优化

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基因组改组选育磷脂酶A1生产菌

18

作者 王洲 薛正莲 +2 位作者 马琦亚 苏燕南 赵世光 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期59-66,共8页

以蜡样芽胞杆菌W22为出发菌株,通过紫外诱变和等离子体诱变得到若干株酶活力提高的突变株。以紫外诱变突变菌株W22-a、W22-g和等离子诱变菌株W22-5为基因组改组的亲本,考察了原生质体的制备、灭活条件。原生质体的最佳制备条件是:溶菌... 以蜡样芽胞杆菌W22为出发菌株,通过紫外诱变和等离子体诱变得到若干株酶活力提高的突变株。以紫外诱变突变菌株W22-a、W22-g和等离子诱变菌株W22-5为基因组改组的亲本,考察了原生质体的制备、灭活条件。原生质体的最佳制备条件是:溶菌酶浓度0.5mg/ml,酶解时间90min,反应温度25℃,预处理甘氨酸浓度为20mg/ml。选择紫外灭活160秒、热灭活16分钟的剂量来完成亲本原生质体的灭活。从众多融合子中筛得一株突变株WR2-2,发酵酶活为17.78U/ml,相对于出发菌株W22(9.22U/ml)提高酶活达92.8%。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 紫外诱变 等离子诱变 基因组改组

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美国弗吉尼亚联邦大学微生物学教学模式初探

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作者 刘艳 薛正莲 +3 位作者 温冬华 王洲 钱森和 苏燕南 《滁州学院学报》 2017年第2期99-101,共3页

依据笔者在美国弗吉尼亚联邦大学(VCU)课堂学习为基础,结合与微生物学专业教师的交流及合作,针对教学理念、评价体系及教学方法等方面探讨了"微生物学"课程的教学模式,该教学模式着重以学生为主体,强调对学生批评精神和创新... 依据笔者在美国弗吉尼亚联邦大学(VCU)课堂学习为基础,结合与微生物学专业教师的交流及合作,针对教学理念、评价体系及教学方法等方面探讨了"微生物学"课程的教学模式,该教学模式着重以学生为主体,强调对学生批评精神和创新思维的培养,注重理论教学、实践教学及课外科研活动相互协调。 展开更多

关键词 微生物学 教学模式 弗吉尼亚联邦大学

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易错PCR提高粘质沙雷氏菌磷脂酶A1活性

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作者 王玉满 薛正莲 +2 位作者 王洲 苏燕南 朱昊 《安徽工程大学学报》 CAS 2016年第4期6-11,共6页

利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg^(2+)、Mn^(2+)得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a(+)重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛选出高酶活突变株EPB8.该突变酶相对野生酶酶活提高了... 利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg^(2+)、Mn^(2+)得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a(+)重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛选出高酶活突变株EPB8.该突变酶相对野生酶酶活提高了22.5%,并对突变株EPB8产酶条件进行优化,优化后酶活较野生酶酶活提高41%.序列分析表明:plaB基因有11个碱基发生突变,导致7个氨基酸发生突变,其中磷脂酶A1蛋白有3个氨基酸突变,分别是Y^(97) C、P^(98)S、X^(228) L,辅助蛋白有4个氨基酸突变,分别是P^(46) L、Q^(58) L、N1^(36) D、H^(233) R.该实验结果为进一步在分子水平定向提高磷脂酶A1的活性奠定了基础,也为该酶在其他高表达系统中的表达提供了素材. 展开更多

关键词 粘质沙雷氏菌 磷脂酶A1 易错PCR 产酶条件优化

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