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牛支原体武威株脂蛋白P48基因的克隆、原核表达及亚细胞定位 被引量：8
1
作者 胡国明 邢小勇 +5 位作者 李娜 苏炜德 温峰琴 项海涛 胡永浩 包世俊 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期1-7,共7页
【目的】验证牛支原体P48蛋白在细胞中的位置,并为后续功能的研究奠定基础.【方法】运用Overlap PCR扩增获得点突变后的牛支原体武威分离株P48基因,并将其克隆至pGEM-T Easy,将测序正确的质粒克隆至表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒p... 【目的】验证牛支原体P48蛋白在细胞中的位置,并为后续功能的研究奠定基础.【方法】运用Overlap PCR扩增获得点突变后的牛支原体武威分离株P48基因,并将其克隆至pGEM-T Easy,将测序正确的质粒克隆至表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-P48,表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并在IPTG诱导下成功获得融合蛋白表达产物rMbP48,大小约为51ku.重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.在分离牛支原体膜蛋白的基础上应用Western-blot及间接ELISA对P48蛋白在细胞中的分布进行分析.【结果】P48蛋白主要存在于牛支原体的膜分离相.全菌免疫荧光试验进一步证实脂蛋白P48位于牛支原体的膜表面.【结论】牛支原体P48蛋白是存在于牛支原体表面的一种具有免疫原性的脂蛋白.本研究为进一步研究P48蛋白的生物学特性及建立高效的牛支原体诊断方法奠定了基础. 展开更多
关键词 牛支原体 P48 基因克隆 原核表达 亚细胞定位
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金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道健康的影响
2
作者 陈将 宋琼莉 +9 位作者 吴东 邹志恒 龚建平 陈小连 宋文静 熊平文 徐川辉 李梦楚 苏炜德 艾高祥 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期3631-3641,共11页
本试验旨在研究金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道健康的影响。将360只36日龄宁都黄鸡母鸡随机分为5个组,每组6个重复,每个重复12只鸡。5组分别是基础饲粮组(CON组)、基础饲粮中添加150 mg/kg金霉素组(ANT组... 本试验旨在研究金银花茎叶粉对宁都黄鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及肠道健康的影响。将360只36日龄宁都黄鸡母鸡随机分为5个组,每组6个重复,每个重复12只鸡。5组分别是基础饲粮组(CON组)、基础饲粮中添加150 mg/kg金霉素组(ANT组)以及基础饲粮中分别添加1%、2%和3%金银花茎叶粉的试验组(HO1组、HO2组、HO3组)。试验期28 d。结果显示:1)与CON组和ANT组相比,HO1组、HO2组和HO3组宁都黄鸡63日龄体重、平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)均无显著差异(P>0.05)。2)与CON组相比,HO2组和HO3组宁都黄鸡血清中二胺氧化酶(DAO)含量显著降低(P<0.05)。3)与CON组相比,HO1组、HO2组和HO3组血清中丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),HO1组和HO2组血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著升高(P<0.05)。4)与CON组和ANT组相比,HO1组、HO2组和HO3组宁都黄鸡空肠绒毛高度(VH)均显著升高(P<0.05);与CON组相比,HO2组和HO3组空肠绒毛高度和隐窝深度比值(VH/CD)显著升高(P<0.05)。5)与CON组相比,ANT组、HO1组、HO2组和HO3组盲肠菌群中酸杆菌门(Acidobacteriota)和普雷沃氏菌科_UCG-001(Prevotellaceae_UCG-001)的相对丰度显著降低(P<0.05),HO2组和HO3组盲肠菌群中黏螺旋菌属(Mucispirillum)的相对丰度显著升高(P<0.05)。与CON组和ANT组相比,HO1组、HO2组和HO3组盲肠菌群中脱硫杆菌门(Desulfobacterota)的相对丰度以及HO2组、HO3组盲肠菌群中脱铁杆菌门(Deferribacterota)的相对丰度显著升高(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加1%~3%的金银花茎叶粉虽无显著的促生长效果,但能够提高宁都黄鸡的抗氧化能力和免疫功能,改善小肠形态结构和盲肠菌群组成,其适宜添加量为2%。 展开更多
关键词 金银花茎叶粉 宁都黄鸡 生长性能 免疫功能 抗氧化能力 肠道健康
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三叶青藤叶粉对崇仁麻鸡生长性能、血清生化指标及空肠形态结构的影响
3
作者 宋琼莉 陈将 +9 位作者 吴东 邹志恒 龚建平 陈小连 宋文静 熊平文 徐川辉 李梦楚 苏炜德 艾高祥 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2481-2488,共8页
【目的】研究三叶青藤叶粉(THL)对崇仁麻鸡生长性能、血清抗氧化和免疫功能及空肠形态结构的影响。【方法】试验选用360只50日龄崇仁麻鸡母鸡,随机分为5组(每组6个重复,每个重复12只),对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0.5... 【目的】研究三叶青藤叶粉(THL)对崇仁麻鸡生长性能、血清抗氧化和免疫功能及空肠形态结构的影响。【方法】试验选用360只50日龄崇仁麻鸡母鸡,随机分为5组(每组6个重复,每个重复12只),对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0.5%、1%、2%和4%三叶青藤叶粉,试验期56 d。试验结束时以重复为单位称重,记录肉鸡采食量,统计生长性能指标;采集血液和肠道组织样品,检测血清抗氧化、免疫指标,制备空肠组织切片并观察空肠形态,测量空肠绒毛高度和隐窝深度,统计绒隐比(V/C)。【结果】与对照组相比,饲粮中添加1%三叶青藤叶粉后崇仁麻鸡料重比(F/G)显著降低(P<0.05),血清免疫球蛋白A(IgA)、IgM、转化生长因子-β(TGF-β)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);添加2%三叶青藤叶粉后血清IgA、TGF-β含量显著升高(P<0.05),白细胞介素-1β(IL-1β)和TNF-α含量显著降低(P<0.05);添加4%三叶青藤叶粉后血清TGF-β含量显著升高(P<0.05),IL-1β含量显著降低(P<0.05);饲粮中添加0.5%和1%三叶青藤叶粉后空肠绒毛高度和V/C显著增加(P<0.05)。【结论】饲粮中添加0.5%~4%三叶青藤叶粉能在一定程度上促进崇仁麻鸡生长,提高机体免疫力,改善肠道组织形态,本试验条件下三叶青藤叶粉添加水平为1%~2%效果较好。 展开更多
关键词 三叶青藤叶粉 崇仁麻鸡 生长性能 抗氧化 免疫 肠道形态
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牛支原体二氢硫辛酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物酶比活性的测定
4
作者 李娜 包世俊 +5 位作者 苏炜德 邢小勇 伏小平 温峰琴 项海涛 薛慧文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期896-901,共6页
参照GenBank中牛支原体PG45株二氢硫辛酸脱氢酶基因(pdhD)的序列设计特异性引物,应用PCR扩增牛支原体武威株的pdhD基因,然后将其克隆至pMD19-T。在完成测序及点突变的基础上构建重组表达质粒pET-28a(+)-pdhD,转化大肠杆菌BL21(DE3),经I... 参照GenBank中牛支原体PG45株二氢硫辛酸脱氢酶基因(pdhD)的序列设计特异性引物,应用PCR扩增牛支原体武威株的pdhD基因,然后将其克隆至pMD19-T。在完成测序及点突变的基础上构建重组表达质粒pET-28a(+)-pdhD,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后纯化表达产物His-DLD,并对其酶促反应活性进行测定。结果显示,表达产物在底物NADH存在条件下,能将硫辛酰胺催化生成二氢硫辛酰胺,且其最适酶促反应温度为25℃、pH为7.5;其米氏常数Km(NADH)为9.72μmol/L,最大反应速率为25.6μmol/(L·min)。上述结果为研究二氢硫辛酸脱氢酶的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 牛支原体 二氢硫辛酸脱氢酶基因 原核表达
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