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EMS诱变高异丁醇耐受性酿酒酵母的筛选 被引量:6
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作者 温智慧 李敬知 +2 位作者 冯瑞琪 张爱利 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第10期66-71,共6页
利用诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS)对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W303-1A进行诱变,确定了诱变酿酒酵母最佳的EMS质量浓度为40μg/m L,筛选出1株遗传稳定、可耐3.0%(V/V)异丁醇的优势突变株EMS39。同时在菌株EMS39和W303-1A中过表达L... 利用诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS)对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W303-1A进行诱变,确定了诱变酿酒酵母最佳的EMS质量浓度为40μg/m L,筛选出1株遗传稳定、可耐3.0%(V/V)异丁醇的优势突变株EMS39。同时在菌株EMS39和W303-1A中过表达L-缬氨酸代谢途径中的关键基因ILV2、ILV5、ILV3和ARO10得到菌株EMS39 23510和W303-1A 23510,将对应的空载体转入菌株W303-1A中得到菌株W303-1A-EP作为对照菌,同时进行发酵性能检测。结果表明,菌株EMS39 23510异丁醇产量达到404.2 mg/L,比对照菌W303-1A-EP提高了529.6%,比菌株W303-1A 23510提高了3.9%,产率比对照菌W303-1A-EP提高了530.0%。其异丁醇及其他发酵产物的产量明显提高,有一定的研究和工业应用价值。 展开更多
关键词 酿酒酵母 甲基磺酸乙酯 异丁醇 耐受性
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酿酒酵母异源表达纤维二糖转运蛋白LacY与纤维二糖利用菌株的构建 被引量:1
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作者 鲁尚昆 +1 位作者 邵文举 张爱利 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期170-180,共11页
【目的】在酿酒酵母体内设计代谢通路,使酿酒酵母能利用纤维素水解产物纤维二糖生产乙醇。【方法】首先,用大肠杆菌DH5α总DNA为模板克隆编码大肠杆菌乳糖透过酶的LacY基因。为过表达LacY基因,以质粒YEplac181作为载体,将酿酒酵母PGK1p... 【目的】在酿酒酵母体内设计代谢通路,使酿酒酵母能利用纤维素水解产物纤维二糖生产乙醇。【方法】首先,用大肠杆菌DH5α总DNA为模板克隆编码大肠杆菌乳糖透过酶的LacY基因。为过表达LacY基因,以质粒YEplac181作为载体,将酿酒酵母PGK1p强启动子加到LacY基因之前,CYC1t终止子加到LacY基因之后,构建质粒YEplac181-PGK1p-LacY-CYC1t。之后,将纤维二糖转运蛋白LacY表达质粒和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL)表达质粒pRS316-PGK1p-gh1-1-CYC1t依次转入野生型酿酒酵母W303-1A中,使野生型酿酒酵母W303-1A异源表达可转运纤维二糖的LacY蛋白和β-葡萄糖苷酶GH1-1,构建可利用纤维二糖的酿酒酵母工程菌W303-1A GL。最后,通过发酵测定酿酒酵母工程菌W303-1A GL的纤维二糖利用情况和乙醇产量,并对纤维二糖代谢通路中纤维二糖酶活力进行测定。【结果】本研究构建了纤维二糖转运蛋白LacY和β-葡萄糖苷酶GH1-1协同表达的酿酒酵母工程菌W303-1AGL。W303-1AGL可以有效利用纤维二糖发酵生产乙醇,W303-1A GL发酵24 h时乙醇产量达到3.25 g/L,得率为0.325 g乙醇/g纤维二糖,利用葡萄糖产乙醇理论得率为0.511 g乙醇/g纤维二糖,达到葡萄糖产乙醇理论得率的64%,细胞密度最高在第54 h达到OD600=10.84,胞内β-葡萄糖苷酶的酶活在72 h最高,可达到0.51 U/mg。【结论】本研究成功构建了能有效利用纤维二糖的重组酿酒酵母工程菌W303-1A GL,为提高纤维素乙醇生产效率、降低纤维素乙醇生产成本提供了新思路。 展开更多
关键词 酿酒酵母 纤维二糖 纤维素乙醇 Β-葡萄糖苷酶
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