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侧脑室注射链脲佐菌素致大鼠脑内胰岛素通路障碍和认知水平降低 被引量:8
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作者 杨文青 马晶 +2 位作者 刘争 余华荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期462-468,共7页
目的:本文旨在研究胰岛素信号通路在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病中的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:于实验第1 d和第3 d侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射链脲佐菌素(streptozo-tocin,STZ;3 mg/kg)建立大鼠模... 目的:本文旨在研究胰岛素信号通路在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病中的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:于实验第1 d和第3 d侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射链脲佐菌素(streptozo-tocin,STZ;3 mg/kg)建立大鼠模型。第1次注射后21 d采用Morris水迷宫检测大鼠的学习和记忆水平;采用West-ern blotting检测胰岛素降解酶(insulin-degrading enzyme,IDE)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)、tau和磷酸化tau(p-tau)的表达;采用免疫组化检测淀粉样β蛋白(Aβ1-40和Aβ1-42)在大脑皮质的沉积;用real-time RT-PCR法检测胰岛素、胰岛素受体、tau、IDE mRNA的表达。结果:Morris水迷宫结果显示ICV-STZ明显降低大鼠的认知能力(P<0.05);Western blotting结果显示ICV-STZ能降低IDE的表达,增加GSK-3β的活性和tau的磷酸化水平(P<0.05);免疫组化结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑皮质Aβ1-40和Aβ1-42均明显增加;PCR结果显示ICV-STZ处理的大鼠大脑胰岛素和胰岛素受体的mRNA水平均降低,IDE mRNA的水平亦下降。结论:ICV-STZ通过影响脑内胰岛素通路导致大鼠出现AD样行为学及病理改变,表明胰岛素信号通路在AD发病中可能起到了一定的重要作用。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 胰岛素 淀粉样Β蛋白 Tau蛋白质 胰岛素降解酶 糖原合成酶激酶3Β
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肝泡型棘球蚴病患者中性粒细胞胞外诱捕网表达及吞噬功能初探 被引量:1
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作者 仁增卓嘎 樊海宁 +4 位作者 杨康洁 王志鑫 张耀刚 王海久 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期25-33,共9页
目的探索肝泡型棘球蚴病(hepatic alveolar echinococcosis,HAE)患者外周血中中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)表达水平及吞噬功能变化,以及其与临床炎性指标和肝生化指标间的相关性。方法选取2022年8月—202... 目的探索肝泡型棘球蚴病(hepatic alveolar echinococcosis,HAE)患者外周血中中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)表达水平及吞噬功能变化,以及其与临床炎性指标和肝生化指标间的相关性。方法选取2022年8月—2023年6月青海大学附属医院肝胆外科收治的50例HAE患者作为HAE患者组,选择同期在该院体检中心体检的年龄、性别匹配的50例健康志愿者作为健康对照组,采用酶联免疫吸附法(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组研究对象外周血中NETs标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和中性粒细胞弹性酶(neutrophil elastase,NE)水平。同时,采用密度梯度离心法分离两组研究对象外周血中性粒细胞;经佛波酯(phorbol 12⁃myristate 13⁃acetate,PMA)体外刺激后,采用流式细胞术分别定量检测中性粒细胞胞外释放的MPO和瓜氨酸化组蛋白(citrullinated histone H3,CitH3)水平。采用流式细胞术比较两组研究对象中性粒细胞吞噬能力差异,采用Spearman相关分析评价HAE患者NETs标志物含量与临床炎性指标及肝生化指标水平间的相关性。结果HAE患者外周血中NETs标志物MPO、NE、CitH3水平分别为(417.15±76.08)、(23.16±6.75)、(33.93±18.93)ng/mL,均显著高于健康对照组[(255.70±80.84)、(11.92±3.17)、(19.52±13.89)ng/mL](t=10.28、10.65、4.34,P均<0.05);但HAE组中性粒细胞吞噬率[(70.85±7.32)%]较健康对照组[(94.04±3.90)%]下降(t=20.18,P<0.05);经PMA体外刺激后,HAE患者组中性粒细胞形成NETs能力较健康对照组显著提高。Spearman相关分析显示,HAE组外周血中性粒细胞吞噬水平和血小板与淋巴细胞比例(platelet⁃to⁃lymphocyte ratio,PLR)、中性粒细胞与淋巴细胞比例(neutrophil⁃to⁃lymphocyte ratio,NLR)、白细胞介素(interleukin,IL)⁃6、C反应蛋白(C reactive protein,CRP)水平呈负相关(rs=−0.515~−0.392,P均<0.05),NETs标志物MPO、NE水平与NLR、PLR、CRP、IL⁃6水平均� 展开更多
关键词 肝泡型棘球蚴病 吞噬能力 中性粒细胞胞外诱捕网 炎症水平
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Wnt3a过表达对小鼠胚胎肝干细胞凋亡的抑制作用 被引量:5
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作者 张锡峰 胡代曦 +2 位作者 冯涛 黄佳祎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1277-1280,共4页
目的研究Wnt3a对ELSC14.5小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体系统(Ad-GFP-Wnt3a)转入小鼠ELSC14.5细胞,以Ad-GFP组为空白对照组,Ad-wnt3a组为实验组。实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blo... 目的研究Wnt3a对ELSC14.5小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体系统(Ad-GFP-Wnt3a)转入小鼠ELSC14.5细胞,以Ad-GFP组为空白对照组,Ad-wnt3a组为实验组。实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测Wnt3a及凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Mcl-1的mRNA和蛋白的表达;Hoechst33258染色法结合annexin-PE/7-ADD法检测细胞的凋亡情况。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示,Wnt3a在ELSC14.5细胞中特异性表达,表明腺病毒系统Ad-Wnt3a能高效感染ELSC14.5细胞。与对照组相比,抗凋亡因子Bcl-2、mcl-1的mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),而促凋亡因子Bax的mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05)。Hoechst33258染色结合annexin-PE/7-ADD法结果显示,Wnt3a高表达的ELSC14.5细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染的细胞数量很少,细胞凋亡率降低。结论 Wnt3a通过上调Bcl-2家族中抗凋亡因子和下调促凋亡因子来抑制小鼠胚胎肝干细胞的凋亡,延长其生存。 展开更多
关键词 胚胎肝干细胞 抗凋亡 WNT3A
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中性粒细胞胞外诱捕网(NET)与肝脏疾病的关系
4
作者 仁增卓嘎 杨康洁 +2 位作者 王志鑫 王海久 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期639-643,共5页
中性粒细胞通过释放中性粒细胞弹性蛋白酶和髓过氧化物酶等蛋白酶,形成中性粒细胞胞外诱捕网(NET),在体内发挥免疫防御作用,并参与多种肝病的炎性反应,但其过度释放会加重肝组织损伤,成为肝脏疾病的危险因素之一。近年来,有研究发现NET... 中性粒细胞通过释放中性粒细胞弹性蛋白酶和髓过氧化物酶等蛋白酶,形成中性粒细胞胞外诱捕网(NET),在体内发挥免疫防御作用,并参与多种肝病的炎性反应,但其过度释放会加重肝组织损伤,成为肝脏疾病的危险因素之一。近年来,有研究发现NET的过度释放可促进病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝脏缺血再灌注损伤等疾病向肝癌进展,阐明NET作用机制对肝脏疾病的诊断和进展过程具有重要意义。本文主要阐述NET在肝脏疾病中的最新研究进展,为肝脏疾病的诊疗和预防提供新的思路。 展开更多
关键词 胞外诱捕网 肝疾病 肝肿瘤
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多房棘球蚴原头节诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成
5
作者 陈佳昕 张耀刚 +4 位作者 王志鑫 朱鑫琳 仁增卓嘎 王海久 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2024年第2期115-123,共9页
目的通过定性和定量方法初步探析多房棘球蚴原头节诱导中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)的形成情况。方法1.从沙鼠模型中分离出多房棘球蚴原头节,并检测原头节的存活率;2.用Polymorph Prep梯度离心法提取中... 目的通过定性和定量方法初步探析多房棘球蚴原头节诱导中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)的形成情况。方法1.从沙鼠模型中分离出多房棘球蚴原头节,并检测原头节的存活率;2.用Polymorph Prep梯度离心法提取中性粒细胞,用PE-CD66b标记分离的中性粒细胞,以流式细胞术鉴定分离的中性粒细胞纯度;3.将原头节与中性粒细胞共培养于体外,用PicoGreen dsDNA定量检测试剂盒检测共培养上清液中的dsDNA浓度;4.在激光共聚焦显微镜下观察形成的NETs结构;5.用流式细胞仪检测共培养后形成NETs标志物髓过氧化酶(Myeloperoxidase,MPO)、瓜氨酸化组蛋白H3(Citrulline H3,H3Cit)的水平;6.用PCR技术鉴定NETs中DNA的来源。结果1.从沙鼠中分离出的原头节存活率可达90%以上;2.从健康人外周血中提取的中性粒细胞经分离纯化后,其纯度达到87%以上;3.PicoGreen dsDNA定量检测结果显示,NETs的产生随原头节数量和共培养时间的增加而增加(P<0.01);4.在激光共聚焦显微镜下观察到共培养后产生的NETs,其DNA骨架呈网状分布,被标记的MPO、H3Cit的数量比对照组显著增多;5.流式细胞术检测结果显示,与原头节共培养的实验组中的MPO+、H3Cit+的中性粒细胞数量(6.83±1.87)%与阴性对照组(0.53±0.12)%相比明显增加(P<0.05),与阳性对照组(17.33±2.59)%相比差异显著(P<0.01);6.共培养产生的NETs,其DNA既来源于核DNA,也来源于线粒体DNA。结论感染多房棘球蚴后,可以诱导NETs形成。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 中性粒细胞 胞外诱捕网
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稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响 被引量:4
6
作者 申利红 +5 位作者 李红丽 胡代曦 张锡峰 胡斌 冯涛 黄佳祎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期256-260,共5页
目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组... 目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P<0.05);G1细胞比例明显减少(P<0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P<0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P<0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P>0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X蛋白 肝前体细胞 细胞增殖 WNT β-catenin信号途径
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肝泡型包虫病肝组织和血清中巨噬细胞极化特点及临床意义 被引量:5
7
作者 鄂维建 +2 位作者 张灵强 宇文昊 王志鑫 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期1198-1202,共5页
目的探讨肝泡型包虫病肝组织和血清中巨噬细胞极化特点及临床意义。方法收集2017年1月至2019年2月30例肝泡型包虫病患者的肝组织标本和血液标本,均来自于青海大学附属医院手术室,将肝脏标本分为病灶邻近(PL)组织和正常(N)肝脏组织,进行H... 目的探讨肝泡型包虫病肝组织和血清中巨噬细胞极化特点及临床意义。方法收集2017年1月至2019年2月30例肝泡型包虫病患者的肝组织标本和血液标本,均来自于青海大学附属医院手术室,将肝脏标本分为病灶邻近(PL)组织和正常(N)肝脏组织,进行HE染色,并进行Child-Pugh肝功能分型;采用免疫组化法检测CD86、CD11c和CD206阳性表达状态。另外收集30例健康人群地血液样本,采用ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平,另外采用Pearson相关性分析M2/M1比值与肝功能指标的关系。结果经HE染色,PL肝组织中有大量炎症细胞浸润,且CD86^+巨噬细胞和CD206^+ M2型巨噬细胞阳性表达率和阳性细胞百分比/视野明显高于N肝组织(P <0.05);但PL肝组织和N肝组织中CD11c^+ M1型巨噬细胞阳性表达率和阳性细胞百分比/视野比较差异无统计学意义(P> 0.05)。肝泡型包虫病PL肝组织中M2/M1比值(3.98±0.76)明显高于N肝组织(1.09±0.12),差异有统计学意义(P <0.05)。并且M2/M1比值与患者谷丙转氨酶水平呈正相关性,与白蛋白水平呈负相关(P <0.05),且随着Child-Pugh肝功能分级升高,M2/M1比值增加。另外,肝泡型包虫病患者血清IL-6、TNF-ɑ和TGF-β1水平明显高于健康人群(P <0.05)。结论肝泡型包虫病患者病灶邻近肝组织中存在大量CD86^+巨噬细胞浸润,且以CD206^+ M2型巨噬细胞为主,M2/M1比值与患者肝功能有关。 展开更多
关键词 肝泡型包虫病 巨噬细胞极化 病灶邻近肝组织 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-Α
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基于PD-1/PD-L1信号通路的肝棘球蚴病免疫逃逸研究 被引量:1
8
作者 杨康洁 鄂维建 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2023年第1期218-225,共8页
PD-1/PD-L1共同组成适应性免疫反应的刺激信号通路,现已被广泛应用于肿瘤免疫逃逸机制及肿瘤治疗的研究中。同时,其信号通路也被证实与肝棘球蚴病的免疫逃逸有密切联系。本文回顾了PD-1和PD-L1的化学结构及其信号通路的作用机理,综述了P... PD-1/PD-L1共同组成适应性免疫反应的刺激信号通路,现已被广泛应用于肿瘤免疫逃逸机制及肿瘤治疗的研究中。同时,其信号通路也被证实与肝棘球蚴病的免疫逃逸有密切联系。本文回顾了PD-1和PD-L1的化学结构及其信号通路的作用机理,综述了PD-1/PD-L1信号通路在肝棘球蚴病免疫逃逸中的作用,即PD-1/PD-L1信号通路在三种理论下参与肝棘球蚴病的免疫逃逸,以期从新的角度探讨肝棘球蚴病的免疫逃逸,为肝棘球蚴病的诊断和治疗提供依据和思路。 展开更多
关键词 棘球蚴病 程序性死亡受体1 程序性死亡配体1 肿瘤逃逸
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血清巨噬细胞极化相关因子与多房棘球蚴病肝纤维化的相关性分析 被引量:5
9
作者 鄂维建 +4 位作者 祁秉民 庞明泉 王志鑫 张灵强 樊海宁 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2021年第12期2813-2818,共6页
目的探究血清巨噬细胞极化相关因子与多房棘球蚴病(AE)患者肝纤维化的关系。方法选择2018年9月—2020年10月青海大学附属医院肝胆胰外科AE患者120例,另外选取33例健康对照者作为正常对照组。比较2组受试者间及不同肝纤维化程度患者IL-6... 目的探究血清巨噬细胞极化相关因子与多房棘球蚴病(AE)患者肝纤维化的关系。方法选择2018年9月—2020年10月青海大学附属医院肝胆胰外科AE患者120例,另外选取33例健康对照者作为正常对照组。比较2组受试者间及不同肝纤维化程度患者IL-6、IL-10、TNFα、TGFβ1水平。符合正态分布的计量资料2组间比较采用独立样本t检验;不符合正态分布的计量资料组间比较采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验。计数资料组间比较采用χ^(2)检验。采用单因素及多因素logistic回归分析法分析血清巨噬细胞极化相关因子与AE患者肝纤维化的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清学检查对AE患者肝纤维化的诊断价值。采用Spearman法分析各指标与HAI评分和Metavir分期的相关性。结果与正常对照组比较,AE组血清IL-6[13.97(9.64~23.62)pg/mL vs 1.30(0.35~2.71)pg/mL,Z=-5.980,P<0.001]、TNFα[2.26(1.65~4.13)pg/mL vs 1.40(1.04~2.10)pg/mL,Z=-3.114,P<0.01]、TGFβ1[3.64(2.71~5.72)pg/mL vs 2.91(2.20~3.35)pg/mL,Z=-2.594,P<0.05]水平均显著升高。且血清IL-6、TNFα水平升高是肝AE患者发生肝纤维化的独立危险因素[HR(95%CI):2.721(1.730~4.280)、3.527(1.158~10.747),P值均<0.05]。经ROC曲线分析,包虫抗体IgG联合血清IL-6、TNFα对于肝纤维化的诊断敏感度和特异度分别为88.4%和95.8%,曲线下面积为0.951(95%CI:0.937~0.964),均高于IL-6、TNFα、包虫抗体IgG的单独诊断(Z值分别为-3.458、-4.011、2.379,P值均<0.05)。经Spearman分析,血清IL-6、TNFα、TGFβ水平与HAI评分(r值分别为0.560、0.644、0.465,P值均<0.001)、Metavir纤维化评分(r值分别为0.530、0.758、0.567,P值均<0.001)均呈正相关性,而血清IL-10与HAI评分(r=-0.232,P=0.011)和Metavir纤维化评分(r=-0.288,P=0.001)则呈负相关性。结论肝AE患者普遍存在巨噬细胞极化状态,且巨噬细胞极化相关因子IL-6、TNFα、TGFβ1水平与肝纤维化发生和进展有关,对� 展开更多
关键词 棘球蚴病 肝硬化 巨噬细胞 白细胞介素类 肿瘤坏死因子Α 转化生长因子Β
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HBx诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化 被引量:3
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作者 申利红 +4 位作者 李红丽 胡代曦 张锡峰 冯涛 黄佳祎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期146-149,共4页
目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14... 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,经稻瘟菌素(blasticidin)筛选,获得稳定表达HBx的HP14.5细胞。观察其形态变化,通过实时定量PCR(real time-PCR)及Western blot法检测其间质细胞标志物和上皮标志物在mRNA和蛋白水平的表达量,并采用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果 HP14.5细胞稳定表达HBx蛋白后细胞由多角形变为长梭形;与对照组相比,神经钙黏素(N-cadherin)、Snail、vimentin的mRNA和蛋白水平表达均升高,具有统计学差异(P<0.05)而上皮性钙黏素(E-cadherin)、细胞角蛋白18(CK18)的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05;同时其迁移能力显著升高(P<0.05)。结论 HBx能诱导肝前体细胞发生EMT,并增强其迁移能力。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X蛋白 肝前体细胞 上皮-间质转化
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MAPK信号通路——肝棘球蚴病治疗新靶点 被引量:1
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作者 董琳琳 +2 位作者 鄂维建 张翔 赵玲莉 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期714-718,共5页
MAPK信号通路可介导多种细胞因子参与炎症、癌症、免疫紊乱和神经退行性疾病等过程,其在肝棘球蚴病发生发展过程中也发挥重要作用。本文回顾了MAPK信号通路的结构及调节过程,重点阐述了肝棘球蚴病中MAPK信号通路的作用,即MAPK信号通路... MAPK信号通路可介导多种细胞因子参与炎症、癌症、免疫紊乱和神经退行性疾病等过程,其在肝棘球蚴病发生发展过程中也发挥重要作用。本文回顾了MAPK信号通路的结构及调节过程,重点阐述了肝棘球蚴病中MAPK信号通路的作用,即MAPK信号通路在肝棘球蚴病中存在虫体与宿主的双重激活,参与了疾病的发生、发展过程,并对其治疗产生影响,以MAPK信号通路为靶点的药物治疗有望成为肝棘球蚴病治疗新的策略。 展开更多
关键词 棘球蚴病 丝裂原激活蛋白激酶类 MAP激酶信号系统
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全反式维甲酸诱导肝前体细胞向肝细胞分化的研究
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作者 白光文 李红丽 +2 位作者 申利红 冯涛 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期201-204,共4页
目的:探讨全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对肝前体细胞分化的影响。方法:取孕14.5 d胎鼠制备肝前体细胞,瞬时转染带白蛋白启动子(Albumin promoter)的荧光素酶报告质粒pALB-Luc,以便实时检测细胞的分化状态。优化ATRA诱导... 目的:探讨全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对肝前体细胞分化的影响。方法:取孕14.5 d胎鼠制备肝前体细胞,瞬时转染带白蛋白启动子(Albumin promoter)的荧光素酶报告质粒pALB-Luc,以便实时检测细胞的分化状态。优化ATRA诱导条件,分别于诱导后3、6、9 d收集细胞总RNA,半定量RT-PCR检测分化相关指标的变化。并于诱导后11 d用苏木精-伊红染色法观察细胞形态的改变,PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果:ATRA浓度为1μmol/L时对肝前体细胞分化诱导作用最强。与对照组相比,随培养时间的延长,ATRA组分化早期指标膜蛋白(Delta like,DLK)、细胞角蛋白(Cytokeratin19,CK19)表达降低更为明显,而甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)、白蛋白(Albumin,ALB)表达更为升高。形态学观察细胞体积增大,呈多边形,核浆比率降低,相嵌紧密排列,可见双核细胞。PAS染色阳性率上升。结论:浓度1μmol/L的ATRA对肝前体细胞分化诱导作用最强,ATRA能诱导肝前体细胞分化为类肝细胞。 展开更多
关键词 肝前体细胞 全反式维甲酸 诱导分化 PAS染色法
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Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化 被引量:3
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作者 李红丽 +2 位作者 申利红 冯涛 黄佳祎 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第9期1155-1159,共5页
目的了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组)。分别给... 目的了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组)。分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9 d提取细胞总RNA,荧光定量real-time(RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6 d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达。结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Westernblot检测显示Ad-β-catenin组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞。 展开更多
关键词 WNT Β-CATENIN Raw264 7 RANKL TRAP
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乙型肝炎病毒X蛋白对小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 申利红 +2 位作者 李红丽 冯涛 黄佳祎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期771-775,779,共6页
目的研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBx)对小鼠胚胎肝干细胞(embryonic liver stemcell,ELSC)凋亡及相关蛋白Bcl2、Mcl1、Bax表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的腺病毒载体系统将... 目的研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBx)对小鼠胚胎肝干细胞(embryonic liver stemcell,ELSC)凋亡及相关蛋白Bcl2、Mcl1、Bax表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的腺病毒载体系统将HBx基因转入小鼠胚胎肝干细胞ELSC14.5中,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;Hoechst33342染色法观察细胞核的改变;TUNEL法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Real-time PCR和Western blot法检测抗凋亡因子Bcl2、Mcl1和促凋亡因子Bax基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx能有效感染ELSC14.5细胞,HBx基因和蛋白均能特异性表达;感染的ELSC14.5细胞核呈现固缩,且边缘化的细胞数减少,细胞凋亡率降低;细胞中Bcl2和Mcl1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均增高,而Bax的表达降低。结论 HBx可通过调节Bcl2家族中抗凋亡因子和促凋亡因子的比例失衡,来抑制小鼠胚胎肝干细胞的凋亡,促进其存活。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X蛋白 小鼠胚胎肝干细胞 细胞凋亡 肝癌
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Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响 被引量:2
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作者 李红丽 申利红 +2 位作者 冯涛 黄佳祎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期412-415,共4页
目的探讨Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空白组)、实验对照组(感染Ad-GFP组)、阳性对照组(50 ng/ml RANKL诱导组)、实验组(感染Ad-Wnt3a组)。分别给予处理因素后常规细胞培养6 d,通过酒石酸抗酸... 目的探讨Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空白组)、实验对照组(感染Ad-GFP组)、阳性对照组(50 ng/ml RANKL诱导组)、实验组(感染Ad-Wnt3a组)。分别给予处理因素后常规细胞培养6 d,通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分化成熟情况;Western blot检测TRAP、Cathep-sin K蛋白的表达;分别于处理因素后3、6、9 d提取细胞总RNA,荧光定量Real time(RT-PCR)检测核因子κB受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因的表达。结果TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导RAW 264.7成多核(核≥10),空白组和Ad-GFP组有少量多核细胞(3≤核≤5),Ad-Wnt3a组为单核有个别双核;Western blot检测显示Ad-Wnt3a组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测Ad-Wnt3a组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K、MMP-9基因的表达。结论Wnt3a能抑制RAW264.7分化成成熟的破骨细胞。 展开更多
关键词 WNT3A RAW264 7 RANKL TRAP
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乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞中β-连环素表达及定位的影响 被引量:1
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作者 申利红 +3 位作者 李红丽 吴迪 冯涛 黄佳祎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期603-607,共5页
目的探讨乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B Virus X,protein,HBx)对肝前体(Hepatic progenitor,HP)14-19细胞中β-连环素(β-catenin)表达及定位的影响,为研究HBV相关性肝癌的发生机制提供实验依据。方法分别用重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP感... 目的探讨乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B Virus X,protein,HBx)对肝前体(Hepatic progenitor,HP)14-19细胞中β-连环素(β-catenin)表达及定位的影响,为研究HBV相关性肝癌的发生机制提供实验依据。方法分别用重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP感染HP 14-19细胞,RT-RCR法检测HBx基因mRNA的转录;Real-time PCR法检测β-catenin基因mRNA的水平;Western blot法检测HBx、总糖原合成酶激酶3β(total-glycogen synthase kinase 3β,t-GSK3β)、磷酸化GSK3β(Phospho-GSK3β,p-GSK3β)及β-catenin蛋白的表达;免疫细胞化学法检测β-catenin的分布情况。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP均能高效感染HP 14-19细胞,感染效率均可达到90%;在重组腺病毒Ad-GFP-HBx感染的HP 14-19细胞中可检测到HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;与Ad-GFP感染组相比,Ad-GFP-HBx感染组t-GSK3β蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05),但p-GSK3β蛋白相对表达量增加(P<0.05);β-catenin在基因和蛋白水平上表达明显增高(P<0.05),并在胞质中大量积聚,且有向胞核转位的趋势。结论 HBx可通过促进HP 14-19细胞中GSK3β磷酸化,抑制β-catenin的降解,从而导致β-catenin在胞质中大量积聚并向核内转移。HBx对肝前体细胞中经典Wnt信号通路的激活,可能是导致肝前体细胞恶性转化的分子基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X蛋白 Β-连环素 肝前体细胞 肝癌 WNT信号通路
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Wnt3a诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化
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作者 胡代曦 张锡峰 +2 位作者 冯涛 黄佳祎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第20期2208-2211,共4页
目的探讨Wnt3a对小鼠肝前体细胞发生上皮-间质转化的影响。方法将表达Wnt3a的腺病毒Ad-GFPWnt3a转入小鼠肝前体细胞中,与空白对照组相比,观察其形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察其对小鼠肝前体细胞迁移能力的影响。实时荧光定... 目的探讨Wnt3a对小鼠肝前体细胞发生上皮-间质转化的影响。方法将表达Wnt3a的腺病毒Ad-GFPWnt3a转入小鼠肝前体细胞中,与空白对照组相比,观察其形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察其对小鼠肝前体细胞迁移能力的影响。实时荧光定量Real-time PCR和Western blot分别检测小鼠肝前体细胞中上皮标志物和间质标志物的表达改变。结果镜下观察,高表达Wnt3a的小鼠肝前体细胞由不规则多边形变为长梭形。细胞划痕实验结果显示,Ad-Wnt3a组细胞48h迁移距离为(0.53±0.05)mm,Ad-GFP组细胞48 h迁移距离为(0.33±0.02)mm,相对对照组,其迁移距离增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞迁移实验结果显示,Ad-GFP组24 h穿过小孔的细胞为(10.33±2.08)个,而Ad-Wnt3a组穿过的细胞为(62.00±3.60)个,相对对照组,其穿过小孔的细胞数量增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR和Western blot结果显示,间质标志物N-cadherin、vimentin和snail的mRNA和蛋白水平表达上调,相反上皮标志物E-cadherin和CK-18的mRNA水平和蛋白水平表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Wnt3a能够促使小鼠肝前体细胞发生上皮-间质转化,提示其可能参与了肝纤维化的发展进程。 展开更多
关键词 WNT3A 小鼠肝前体细胞 上皮-间质转化
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