目的建立稳定表达候选抑癌基因DMBT1(deleted in malignant brain tumours1)的胆囊癌细胞系GBC—SD,研究其迁移能力并探讨分子机制。方法以脂质体为介导在体外建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系。细胞分组:(1)GBC-SD/DMBT1为转染D...目的建立稳定表达候选抑癌基因DMBT1(deleted in malignant brain tumours1)的胆囊癌细胞系GBC—SD,研究其迁移能力并探讨分子机制。方法以脂质体为介导在体外建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系。细胞分组:(1)GBC-SD/DMBT1为转染DMBT1组;(2)GBC.SD/Vector为转染空载体组;(3)GBC—SD为未处理组。免疫组化、Westernblot及RT-PCR检测DMBT1蛋白、mRNA表达,确证转染成功,划痕法与Transwell法检测细胞迁移能力,Westemblot检测E-钙粘蛋白、CD44V6、CD15等黏附转移分子表达。统计学采用配对或独立样本t检验,P〈0.01为差异有统计学意义。结果稳定转染后,实验组DMBT1蛋白及mRNA表达较对照组分别提高3.2倍、2.7倍;划痕法显示实验组细胞在迁移距离、迁移速率、迁移面积均显著小于对照组(P〈0.01);Transwell法表明转染DMBT1后,迁移细胞数亦显著少于对照组(P〈0.01);免疫印迹表明转染实验组较对照组E-钙粘蛋白表达上调,CD15表达量减少(P〈0.01),而CD44V6、α与β连环素、整合素击在转染前后表达量无明显差异。结论在体外成功建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系;DMBT1在体外过表达显著抑制GBC—SD的迁移,至少部分依赖于上调E-钙粘蛋白表达,下调CD15表达。展开更多
文摘目的建立稳定表达候选抑癌基因DMBT1(deleted in malignant brain tumours1)的胆囊癌细胞系GBC—SD,研究其迁移能力并探讨分子机制。方法以脂质体为介导在体外建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系。细胞分组:(1)GBC-SD/DMBT1为转染DMBT1组;(2)GBC.SD/Vector为转染空载体组;(3)GBC—SD为未处理组。免疫组化、Westernblot及RT-PCR检测DMBT1蛋白、mRNA表达,确证转染成功,划痕法与Transwell法检测细胞迁移能力,Westemblot检测E-钙粘蛋白、CD44V6、CD15等黏附转移分子表达。统计学采用配对或独立样本t检验,P〈0.01为差异有统计学意义。结果稳定转染后,实验组DMBT1蛋白及mRNA表达较对照组分别提高3.2倍、2.7倍;划痕法显示实验组细胞在迁移距离、迁移速率、迁移面积均显著小于对照组(P〈0.01);Transwell法表明转染DMBT1后,迁移细胞数亦显著少于对照组(P〈0.01);免疫印迹表明转染实验组较对照组E-钙粘蛋白表达上调,CD15表达量减少(P〈0.01),而CD44V6、α与β连环素、整合素击在转染前后表达量无明显差异。结论在体外成功建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系;DMBT1在体外过表达显著抑制GBC—SD的迁移,至少部分依赖于上调E-钙粘蛋白表达,下调CD15表达。