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Dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种人肿瘤细胞系中的表达分析 被引量:16
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作者 余艳军 万晓桢 +4 位作者 于彬 游海燕 姚根富 覃文新 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1109-1112,共4页
目曲:检测dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法:采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果:肝癌组织检测RT—PCR... 目曲:检测dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法:采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果:肝癌组织检测RT—PCR,10/15肝癌中高表达;Real—time PCR方法检测,8/8肝癌中高表达;Western blot方法检测,5/8肝癌中高表达。酶联免疫吸附实验检测到DKK1在多种恶性肿瘤细胞系的细胞培养液上清液中均有表达,蛋白质表达量波动于5~210ng/mL之间;10种人恶性肿瘤细胞系在mRNA水平和蛋白质水平DKK1的表达均能检测到。结论:DKK1高表达于肝癌组织及广泛表达于多种恶性肿瘤细胞系,提示DKK1可能在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。 展开更多
关键词 肝细胞 基因 DKK1 肿瘤细胞 培养的
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四环素调控的真核表达体系Hep3B Tet-On细胞株的建立 被引量:11
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作者 王俊茹 覃文新 +3 位作者 潘勇 张玉燕 万大方 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期191-193,共3页
目的 建立可受四环素诱导调控的高表达外源基因的真核表达体系Hep3BTet On细胞株 ,用于基因功能的研究。方法 将pTet On质粒用脂质体介导法转染Hep3B细胞 ,经G4 18筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化。单克隆分别扩增后 ,瞬时转染p... 目的 建立可受四环素诱导调控的高表达外源基因的真核表达体系Hep3BTet On细胞株 ,用于基因功能的研究。方法 将pTet On质粒用脂质体介导法转染Hep3B细胞 ,经G4 18筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化。单克隆分别扩增后 ,瞬时转染pTRE luc(编码荧光素酶蛋白 )质粒 ,Dox诱导表达后 ,检测荧光素酶活性 ,逐一筛选四环素调控高表达外源基因的Hep3BTet On细胞株。结果 成功构建了一株受Dox调控的高表达低背景的Hep3BTet On细胞株。结论 Hep3BTet On细胞株可用于外源基因的真核调控高表达 ,为研究真核基因功能提供了一种有力的实验手段。 展开更多
关键词 真核表达体系 Hep3BTet-On细胞株 诱导表达 四环素调控 基因治疗 基础研究 基因表达
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肝癌DKK1基因的表达及突变分析 被引量:8
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作者 于彬 余艳军 +4 位作者 游海燕 程勤 姚根富 覃文新 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期662-665,共4页
目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变。方法:Northernblot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1mRNA表达水平。采用PCRSSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采... 目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变。方法:Northernblot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1mRNA表达水平。采用PCRSSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采用DNA测序对PCRSSCP突变分析结果加以验证。结果:Northernblot显示12例肝癌患者中7例存在癌组织DKK1mRNA高表达而癌旁肝组织微弱表达或不表达。突变检测发现20例肝癌患者及8种人肝癌细胞株中仅1例肝癌患者存在DKK1基因的同义突变(单核苷酸多态现象)。结论:DKK1在中国人肝癌中存在高表达,但未发现突变发生,提示DKK1基因参与肝癌的癌变过程可能并不依赖于该基因的突变。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝细胞 多态现象 单链构象 多态现象 单核苷酸 基因 DKK1
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肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐 被引量:5
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作者 倪星忠 +1 位作者 田箐 万炸 《上海医学检验杂志》 1996年第3期142-143,共2页
肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐倪星忠,舒惠群,田箐,万炸上海市临检中心(200052)肌酐测定是临床生化中常规项目。常用的苦味酸法由于干扰因素多,变异大,故误差大。1983年,Fassati等提出了肌氨酸氧化酶测定法[1... 肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐倪星忠,舒惠群,田箐,万炸上海市临检中心(200052)肌酐测定是临床生化中常规项目。常用的苦味酸法由于干扰因素多,变异大,故误差大。1983年,Fassati等提出了肌氨酸氧化酶测定法[1].近年来国外已有该法的商品试剂盒... 展开更多
关键词 血清 肌酐 测定 肌氨酸氧化酶法
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肝癌细胞中WIF-1的甲基化状态分析 被引量:2
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作者 程勤 金洁 +5 位作者 于彬 万晓桢 游海燕 姚根富 覃文新 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期843-847,共5页
目的探讨WIF-1基因在肝癌细胞中的甲基化状态及其与蛋白表达的关系,并初步研究了WIF-1与肝癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和测序方法分析了9种肝癌细胞系中WIF-1启动子区的甲基化状态,用RT-PCR检测了其mRNA的表达。用... 目的探讨WIF-1基因在肝癌细胞中的甲基化状态及其与蛋白表达的关系,并初步研究了WIF-1与肝癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和测序方法分析了9种肝癌细胞系中WIF-1启动子区的甲基化状态,用RT-PCR检测了其mRNA的表达。用去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理肝癌细胞株并分析其mRNA和蛋白的表达的变化。结果6种肝癌细胞中检测到异常的甲基化,甲基化率为66.7%。在用5-Aza-CdR处理细胞后,WIF-1表达缺失的肝癌细胞系不同程度地恢复了表达。MTT法分析发现WIF-1对SMMC-7721(7721)细胞生长有较为显著的抑制效果。结论推断WIF-1启动子区频繁甲基化的现象可能是它在肝癌中表达沉默的主要机制,并在肝癌的发生发展起作用。 展开更多
关键词 WNT信号通路 WIF-1 DNA甲基化 肝癌
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靶向ATP6L的RNA干扰抑制乳腺癌细胞的体外侵袭能力
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作者 游海燕 金洁 +4 位作者 唐宁 邓云 沈秋瑾 覃文新 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第2期126-130,135,共6页
目的:通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能,检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。方法:采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7/ADR细胞,通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光... 目的:通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能,检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。方法:采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7/ADR细胞,通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光量;用实时荧光定量PCR检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况;用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2活性;用细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞体外侵袭能力。结果:在MCF-7/ADR细胞中,下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌H+能力减弱;细胞中MMP-2表达水平无变化;细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱;细胞的体外侵袭能力下降。结论:靶向ATP6L的RNA干扰可抑制质子泵的功能,从而抑制MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。 展开更多
关键词 ATP6L RNA干扰 侵袭 肿瘤
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2006年早稻种植情况调查
7
作者 熊学华 +1 位作者 高永莉 江国英 《中国粮食经济》 2006年第7期22-26,共5页
关键词 种植情况 早稻 长江中下游地区 种粮积极性 农业生产资料 粮食生产 市场调研 最低收购价 价格上涨 生产成本
原文传递
人肝癌中SLIT2基因表达及启动子甲基化分析
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作者 金洁 游海燕 +5 位作者 余艳军 黄明辉 姚根富 杨胜利 覃文新 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期202-206,共5页
目的研究SLIT2在肝癌组织中表达和沉默的机制。方法32个肝癌病人的癌组织及癌旁肝组织、3例正常肝组织及8个肝癌细胞系样本DNA和RNA抽提后,半定量RT-PCR检测SLIT2的表达。亚硫酸氢钠处理DNA,用MSP和测序法检测SLIT2启动子甲基化状态。结... 目的研究SLIT2在肝癌组织中表达和沉默的机制。方法32个肝癌病人的癌组织及癌旁肝组织、3例正常肝组织及8个肝癌细胞系样本DNA和RNA抽提后,半定量RT-PCR检测SLIT2的表达。亚硫酸氢钠处理DNA,用MSP和测序法检测SLIT2启动子甲基化状态。结果SLIT2启动子在肝癌组织中的甲基化率为84.3%,在相对应的癌旁肝组织中甲基化率为56.3%。肝癌细胞系的甲基化率为75%。而在正常肝组织中无甲基化。SLIT2启动子甲基化与肝癌的临床病理指标无相关性,但和患者的年龄有关。在用甲基化酶抑制剂5-aza-dC处理细胞后,SLIT2表达缺失的肝癌细胞系恢复了mRNA的表达。结论SLIT2启动子甲基化是肝癌发生过程中的早期事件,可能是SLIT2在肝癌中表达沉默的主要机制。 展开更多
关键词 肝癌 SLIT2 DNA甲基化 抑癌基因
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一种新型RF胶乳诊断试剂的制备及其初步应用 被引量:1
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作者 郭春祥 周梅菁 《上海医学检验杂志》 1993年第3期174-176,共3页
类风湿因子(RF)发现已有几十年历史,过去曾使用曙红胶乳试验,但该法为非特异性方法,目前已被淘汰.现在常用的胶乳凝集试验所用试剂是将人丙种球蛋白通过物理吸附的方法致敏到聚苯乙烯胶乳的表面上,此法制备虽不复杂,但重复性较差,特别... 类风湿因子(RF)发现已有几十年历史,过去曾使用曙红胶乳试验,但该法为非特异性方法,目前已被淘汰.现在常用的胶乳凝集试验所用试剂是将人丙种球蛋白通过物理吸附的方法致敏到聚苯乙烯胶乳的表面上,此法制备虽不复杂,但重复性较差,特别是在大批量致敏时,条件掌握稍有不当,便易产生胶乳自凝现象。近来,我们分别采用羧化聚苯乙烯白色胶乳和羧化聚苯乙烯彩色胶乳为原料,参照金属阳离子致敏羊红细胞的原理,设计一种新的致敏RF胶乳的方法。 展开更多
关键词 类风湿因子 胶乳诊断试剂 制备
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紫外速率法的误差分析 被引量:1
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作者 倪星忠 张万忠 《分析科学学报》 CAS CSCD 1999年第1期47-51,共5页
对紫外速率法的误差来源作了实验分析,并在此基础上提出了相应的控制措施,以保证紫外速率法及自动分析仪测定的准确性。
关键词 紫外法 速率法 自动分析仪 紫外速率法
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