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HIV-1 Tat蛋白抑制骨髓间充质干细胞的造血支持功能 被引量：1
1
作者 袁雅红 赵珊珊 +3 位作者 王小莉 腾智平 李东升 曾毅 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1-8,共8页
目的:通过研究人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)Tat蛋白对骨髓间充质干细胞(BMSC)造血支持功能的影响,进一步揭示HIV-1感染者造血损伤的机理。方法:原代培养BMSC,流式检测其表面标志,诱导分化鉴定其多向分化潜能;免疫磁珠分选造血干细胞(HSC)... 目的:通过研究人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)Tat蛋白对骨髓间充质干细胞(BMSC)造血支持功能的影响,进一步揭示HIV-1感染者造血损伤的机理。方法:原代培养BMSC,流式检测其表面标志,诱导分化鉴定其多向分化潜能;免疫磁珠分选造血干细胞(HSC),流式检测其纯度;HIV-1 Tat蛋白添加到培养基中培养20天的BMSC(BMSC_(Tat))与对照BMSC(BMSC_(Con))分别作为滋养层与HSC分6组进行共培养,随后计数各组造血细胞总数,诱导分化检测造血细胞集落形成能力;RT-PCR检测BMSC_(Tat)和BMSC_(Con)造血相关因子mRNA的表达强度,ELISA检测BMSC_(Tat)和BMSC_(Con)条件培养液中造血相关因子GM-CSF及IL-6的浓度。结果:经鉴定成功培养获得原代BMSC;免疫磁珠分选的HSC纯度可达95%以上;分6组共培养进行比较,以BMSC_(Tat)为滋养层培养的造血细胞总数及造血细胞形成的集落总数均明显少于以BMSC_(Con)为滋养层;BMSC_(Tat)的造血相关因子的mRNA的表达明显弱于BMSC_(Con),BMSC_(Tat)的条件培养液中GM-CSF和IL-6的浓度均明显低于BMSC_(Con)。结论:HIV-1 Tat蛋白对BMSC的造血支持功能有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 HIV-1 TAT蛋白 骨髓间充质干细胞 造血干细胞 造血支持
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人鼻咽癌肝转移灶裸小鼠移植瘤模型(CNT—1)的建立及特性研究 被引量：1
2
作者 焦伟 周微雅 +7 位作者 张兴 王培中 黎而介 黄立国 陆胜经 曾毅 于庚庚 腾智平 《广西医学》 CAS 1995年第1期10-12,共3页
从１例鼻咽癌肝转移患者尸检时取出肝组织接种于裸小鼠，成功地建立了１株鼻咽移植瘤动物模型，命名为中国鼻咽移植瘤株１号，简称ＣＮＴ－１，该移植瘤株选用鼠均为Ｔ淋巴细胞免疫缺陷型的黑皮（ＮＣ）品系及白皮（ＮＭＲＩ）品系裸小... 从１例鼻咽癌肝转移患者尸检时取出肝组织接种于裸小鼠，成功地建立了１株鼻咽移植瘤动物模型，命名为中国鼻咽移植瘤株１号，简称ＣＮＴ－１，该移植瘤株选用鼠均为Ｔ淋巴细胞免疫缺陷型的黑皮（ＮＣ）品系及白皮（ＮＭＲＩ）品系裸小鼠，雌雄兼用，具有潜伏期短，生长稳定，传递成功率为１００％之特点。至今已保存３年余，传递２３代，病理检查，原代为典型的低分化鳞状细胞癌。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 肿瘤移植 裸小鼠 动物模型
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打靶恒河猴CD4^+ T细胞的TRIM5α基因影响其感染HIV的能力 被引量：1
3
作者 王小莉 余庆 +3 位作者 袁雅红 腾智平 李东升 曾毅 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期15-19,共5页
目的:探讨打靶恒河猴CD4^+ T细胞的TRIM5α基因对其感染HIV-1能力的影响。方法:从恒河猴的外周血中通过磁珠分选获得CD4^+ T细胞,并采用流式检测阳性率。构建打靶TRIM5α基因的TALEN质粒,通过电转导入CD4^+ T细胞,流式分选出转染TALEN... 目的:探讨打靶恒河猴CD4^+ T细胞的TRIM5α基因对其感染HIV-1能力的影响。方法:从恒河猴的外周血中通过磁珠分选获得CD4^+ T细胞,并采用流式检测阳性率。构建打靶TRIM5α基因的TALEN质粒,通过电转导入CD4^+ T细胞,流式分选出转染TALEN质粒的细胞,提取基因组T7E1酶切检测打靶效率。HIV-1病毒感染打靶TRIM5α的CD4^+ T细胞,并通过ELASA检测病毒感染的情况。结果:成功地从恒河猴的外周血中分选出了CD4^+ T细胞,流式检测阳性率为99.5%。打靶TRIM5α基因的TALEN质粒转染CD4^+ T细胞的转染效率约为24.8%,并可成功打靶TRIM5α,打靶效率约为40%。ELASA检测结果表明打靶TRIM5α的恒河猴CD4^+ T细胞对HIV病毒的感染能力增强。结论打靶恒河猴CD4^+ T细胞的TRIM5α基因可使其易感HIV病毒,为进一步建立恒河猴HIV-1感染动物模型奠定基础。 展开更多
关键词 TRIM5α 恒河猴 CD4+ T细胞 HIV-1病毒感染
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HIV P55-gag蛋白促进骨髓间充质干细胞的老化
4
作者 袁雅红 赵珊珊 +3 位作者 王小莉 腾智平 李东升 曾毅 《生物医学工程研究》 北大核心 2017年第1期52-56,61,共6页
探索HIV P55-gag蛋白对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)老化的影响,进一步阐明HIV P55-gag蛋白抑制BMSC成骨分化的机理。原代分离、培养、纯化BMSC,再将其分两组进行处理,一组为常规培养对照组(BMSC_(con)),... 探索HIV P55-gag蛋白对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)老化的影响,进一步阐明HIV P55-gag蛋白抑制BMSC成骨分化的机理。原代分离、培养、纯化BMSC,再将其分两组进行处理,一组为常规培养对照组(BMSC_(con)),另一组为添加HIV P55-gag蛋白培养组(BMSC_(gag));通过计算培养5、10、15及20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)的群体倍增水平,比较增殖能力;将培养20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)分别标记Brdu,免疫荧光法检测Brdu掺入率,比较两组细胞的增殖水平;通过检测细胞衰老生物标记β-半乳糖苷酶,比较两组细胞的衰老程度;Western检测两组细胞衰老相关蛋白P21的表达强度;将两组细胞诱导成骨分化,比较其成骨分化能力。在培养15天和20天时,BMSC_(gag)群体倍增水平明显低于BMSC_(con);BMSC_(gag)的Brdu掺入率明显低于BMSC_(con),分别为(26±4.1)%和(45±3.7)%;β-半乳糖苷酶染色检测显示,BMSC_(gag)的衰老细胞数明显多于BMSC_(con),分别为(21±4.7)%和(8±2.1)%;BMSC_(gag)的P21的表达强度明显强于BMSC_(con);成骨诱导后,茜素红染色和ALP染色均显示,BMSC_(gag)的成骨分化能力明显弱于BMSC_(con)。HIV P55-gag蛋白促进BMSC老化,进而抑制其成骨分化能力。 展开更多
关键词 HIV P55-gag蛋白 骨髓间充质干细胞 老化 成骨分化 骨代谢
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利用TALEN技术建立恒河猴TRIM5α基因突变细胞株
5
作者 王小莉 余庆 +3 位作者 袁雅红 腾智平 李东升 曾毅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期53-57,共5页
利用TALEN技术建立恒河猴TRIM5α基因突变细胞株,为进一步研究TRIM5α基因的功能奠定基础。构建针对TRIM5α打靶基因的TALEN,通过点突变的方法获得包含TRIM5α第7个外显子中打靶位点1 211-1 224的基因序列并构建点突变donor载体。将打靶... 利用TALEN技术建立恒河猴TRIM5α基因突变细胞株,为进一步研究TRIM5α基因的功能奠定基础。构建针对TRIM5α打靶基因的TALEN,通过点突变的方法获得包含TRIM5α第7个外显子中打靶位点1 211-1 224的基因序列并构建点突变donor载体。将打靶TRIM5α基因的TALEN质粒和donor质粒电转入恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中,无限稀释法获得单克隆细胞系,通过抽提基因组DNA,再利用PCR技术扩增目标序列并测序筛选出TRIM5α碱基缺失(1 215-1 216)和点突变(1 213-1 215,1 217)的细胞系。通过共转TALEN质粒和点突变的donor质粒筛选获得了TRIM5α基因敲除和TRIM5α基因点突变的LLC-MK2细胞系。 展开更多
关键词 TRIM5α TALEN 恒河猴 点突变
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