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基于HER2靶标的抗体偶联药物T-DM1内吞机制研究 被引量：3
1
作者 张茂桃 白海红 +6 位作者 胡百卉 车津晶 蔡继锋 鲁杰 刘运龙 陈知航 程远国 《生物技术通讯》 CAS 2016年第3期331-334,共4页
目的:研究抗体偶联药物T-DM1与乳腺癌细胞SKBR3表面人表皮生长因子受体2(HER2)的相互作用及内吞机制。方法:采用基于表面等离子共振(SPR)原理的Biacore方法测试配体T-DM1与受体HER2的相互作用,通过流式细胞仪测定药物在体外内吞清除率,... 目的:研究抗体偶联药物T-DM1与乳腺癌细胞SKBR3表面人表皮生长因子受体2(HER2)的相互作用及内吞机制。方法:采用基于表面等离子共振(SPR)原理的Biacore方法测试配体T-DM1与受体HER2的相互作用,通过流式细胞仪测定药物在体外内吞清除率,利用激光扫描共聚焦显微镜原位检测药物在细胞中的内吞过程。结果:T-DM1与HER2具有高亲和力,ka为6.234×10~6mol/(L·s),kd为3.077×10^(-4)/s,KD为4.936×10^(-11)mol/L,流式细胞实验证明受体与配体的结合具有饱和性;利用免疫荧光方法检测到T-DM1在SKBR3细胞内的消除呈时间-剂量依赖关系,实验表明4 h内荧光强度减低32%,48 h时降低约90%;共聚焦显微镜实验表明T-DM1先与SKBR3细胞表面的HER2受体结合,进入细胞内,反应1 h到达溶酶体,48 h时在显微镜下已消失。结论:T-DM1与HER2具有高亲和力及结合饱和性,在1 h内通过HER2介导内吞进入细胞,随后定位于溶酶体,最后于48 h裂解。 展开更多
关键词 抗体偶联药物 T-DM1 人表皮生长因子受体2 表面等离子共振 内吞机制
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抗体偶联小分子药物T-DM1的ELISA检测方法的建立 被引量：2
2
作者 胡百卉 车津晶 +5 位作者 许先兴 谌瑛 刘运龙 陈知航 程远国 许丽娜 《生物技术通讯》 CAS 2014年第5期693-696,共4页
目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测猕猴血清中T-DM1的含量。方法：采用双抗夹心ELISA法对T-DM1进行定量。以DM1单抗作为一抗包被到96孔板中,加入待检样品,之后再加入稀释好的猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP（二抗）,使之... 目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测猕猴血清中T-DM1的含量。方法：采用双抗夹心ELISA法对T-DM1进行定量。以DM1单抗作为一抗包被到96孔板中,加入待检样品,之后再加入稀释好的猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP（二抗）,使之与结合到一抗上的T-DM1特异性结合,加底物显色,在酶标仪上读取D450nm值。结果：建立了检测T-DM1的ELISA方法并得到确证,方法的线性范围为0.625~80 ng/mL,定量下限为0.625 ng/mL,板内及板间精密度和准确度均在±15%以内,室温、冻融、稀释效应稳定性良好。结论：方法学验证表明ELISA法测定猴血清中T-DM1浓度的特异性、精密度和准确度均满足新生物制药临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于T-DM1的检测。 展开更多
关键词 T-DM1 抗体偶联小分子药物 酶联免疫吸附法 药代动力学 人表皮生长因子受体2
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重组抗CD52人源化单克隆抗体ELISA检测方法的建立
3
作者 李金龙 胡百卉 +4 位作者 许先兴 张代超 刘运龙 陈知航 程远国 《生物技术通讯》 CAS 2015年第5期667-671,共5页
目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体的含量。方法：采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD52单克隆抗体进行定量。以猴血清吸附的羊抗人Ig G作为包被抗体,稀释的猴血清吸附的羊抗人Ig G-HRP... 目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体的含量。方法：采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD52单克隆抗体进行定量。以猴血清吸附的羊抗人Ig G作为包被抗体,稀释的猴血清吸附的羊抗人Ig G-HRP（二抗）作为检测抗体,加入底物显色剂后在酶标仪上读取D450nm值。结果：建立并确证了检测重组抗CD52单克隆抗体的ELISA方法,方法的线性范围为7.81~500 ng/m L,定量下限为7.81 ng/m L,板内及板间精密度和准确度均在±15%以内,室温、冻融、稀释效应稳定性良好。结论：方法学验证表明ELISA法测定食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体浓度的特异性、精密度和准确度均满足新生物制药临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于重组抗CD52单克隆抗体的检测。 展开更多
关键词 重组抗CD52单克隆抗体 酶联免疫吸附法 药代动力学
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帕妥珠单抗在食蟹猴体内的药代动力学检测方法
4
作者 杨越明 程远国 +6 位作者 车津晶 陈知航 刘运龙 胡百卉 李丽 任欣怡 张茂桃 《生物技术通讯》 CAS 2016年第2期233-236,共4页
目的：建立一种灵敏度高、特异性好且快速的ELISA方法,用以检测食蟹猴体内的帕妥珠单抗含量。方法：采用双抗夹心的ELISA方法对帕妥珠单抗进行定量。以Erb B2单抗作为一抗,将其包被至96孔板上,加入待检样品,之后加入稀释好的二抗（猴血... 目的：建立一种灵敏度高、特异性好且快速的ELISA方法,用以检测食蟹猴体内的帕妥珠单抗含量。方法：采用双抗夹心的ELISA方法对帕妥珠单抗进行定量。以Erb B2单抗作为一抗,将其包被至96孔板上,加入待检样品,之后加入稀释好的二抗（猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP）,令结合到一抗上的帕妥珠单抗与其特异性结合,再加入底物进行显色,在酶标仪上用双波长读取D450/560nm值。结果：建立了室温稳定性、冻融稳定性、稀释效应稳定性良好的检测帕妥珠单抗的ELISA方法并得到确证,其定量下限为0.78 nm/m L,线性范围为0.78～50 nm/m L,板间及板内的准确度、精密度均在±15%之内。结论：该ELISA方法学的确证表明用该方法测定帕妥珠单抗浓度具有特异性好、灵敏度高、速度快的特点,能够满足新生物制药临床前药代动力学的指导要求,可应用于帕妥珠单抗的检测。 展开更多
关键词 帕妥珠单抗 人表皮生长因子2 酶联免疫吸附法 药代动力学
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