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NRG1FP对小鼠精原细胞系GC-1细胞增殖的影响及作用机制研究
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作者 王程 苗馨月 +5 位作者 金祉延 刘佳豪 胡烨玮 赵玮 陈丽丽 金玉姬 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期110-116,142,共8页
为了研究神经调节蛋白1功能肽段(NRG1FP)对小鼠精原细胞系GC-1细胞增殖的影响及其作用机制,试验采用Western-blot验证精原细胞系GC-1细胞中是否存在NRG1受体——ErbB2和ErbB4。利用大肠杆菌原核表达体系制备NRG1FP蛋白,用NRG1FP和/或细... 为了研究神经调节蛋白1功能肽段(NRG1FP)对小鼠精原细胞系GC-1细胞增殖的影响及其作用机制,试验采用Western-blot验证精原细胞系GC-1细胞中是否存在NRG1受体——ErbB2和ErbB4。利用大肠杆菌原核表达体系制备NRG1FP蛋白,用NRG1FP和/或细胞外钙离子(Ca^(2+))作用于精原细胞系GC-1细胞后,采用CCK-8试剂盒评价细胞增殖情况,采用Fura-2AM荧光染色观察和测定细胞质Ca^(2+)浓度变化,Western-blot测定基质相互作用分子1(STIM1)、钙通道蛋白Orai1、钙调蛋白(CaM)、CaM依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的表达量以及CaMKⅣ、CREB的磷酸化水平。结果表明:精原细胞系GC-1细胞中存在NRG1受体——ErbB2和ErbB4蛋白。大肠杆菌原核表达系统制备的NRG1FP蛋白可显著促进精原细胞系GC-1细胞增殖(P<0.05),且在细胞外存在Ca^(2+)条件下增殖活性最高,显著高于对照组(P<0.05)。NRG1FP蛋白可触发钙池操纵性钙内流(SOCE)。STIM1、Orai1、CaM相对表达量及p-CaMKⅣ、p-CREB蛋白的相对表达量显著上调(P<0.05)。说明NRG1FP可调控SOCE并激活CaM/CaMKⅣ/CREB信号通路,进而促进小鼠精原细胞系GC-1细胞的增殖。 展开更多
关键词 神经调节蛋白1 功能肽段 精原细胞 增殖 钙池操纵性钙内流
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