目的研究肝癌细胞miRNA-138(miR-138)通过调控细胞周期蛋白D3(CCND3)、波形蛋白对肝癌细胞的影响。方法利用RT-PCR对肝癌组织及癌旁组织(对照)、4种肝癌细胞系(HepG2、HHCC、HUH7、BEL-7402)及正常肝细胞系HL-7702(对照)的miR-138的mRN...目的研究肝癌细胞miRNA-138(miR-138)通过调控细胞周期蛋白D3(CCND3)、波形蛋白对肝癌细胞的影响。方法利用RT-PCR对肝癌组织及癌旁组织(对照)、4种肝癌细胞系(HepG2、HHCC、HUH7、BEL-7402)及正常肝细胞系HL-7702(对照)的miR-138的mRNA表达进行检测;设计合成miR-138的模拟物(mimics)及抑制剂(inhibitor)。分别将空载体(对照)、miR-138的模拟物及抑制剂转染至HepG2细胞,与相应对照相比,分析miR-138对CCND3、波形蛋白表达及肝癌细胞活力的影响。应用CCK-8法、细胞创伤愈合试验和Transwell细胞迁移试验分别对转染空载体、miR-138 mimics 及inhibitor后的HepG2肝癌细胞增殖及迁移能力进行检测。Western blot检测上调或下调miR-138后miR-138相关靶蛋白CCND3及波形蛋白的表达。结果与相应对照相比,miR-138的表达水平在肝癌组织及肝癌细胞系中明显降低( P <0.01)。当miR-138 mimics转染肝癌细胞后,HepG2细胞的活力降低,创伤愈合能力较弱,迁移能力明显降低( P <0.01),经Western blot检测,波形蛋白和CCND3的表达水平降低( P <0.01)。转染miR-138 inhibitor 后,HepG2细胞的增殖能力升高,肝癌细胞的创伤愈合能力和迁移能力提升( P <0.01),与此同时,波形蛋白和 CCND3的表达水平升高( P < 0.01 )。结论通过调节波形蛋白和 CCND3的表达,miR-138在肝癌细胞的增殖活力、迁移能力的变化机制中发挥重要的作用。展开更多
文摘目的研究肝癌细胞miRNA-138(miR-138)通过调控细胞周期蛋白D3(CCND3)、波形蛋白对肝癌细胞的影响。方法利用RT-PCR对肝癌组织及癌旁组织(对照)、4种肝癌细胞系(HepG2、HHCC、HUH7、BEL-7402)及正常肝细胞系HL-7702(对照)的miR-138的mRNA表达进行检测;设计合成miR-138的模拟物(mimics)及抑制剂(inhibitor)。分别将空载体(对照)、miR-138的模拟物及抑制剂转染至HepG2细胞,与相应对照相比,分析miR-138对CCND3、波形蛋白表达及肝癌细胞活力的影响。应用CCK-8法、细胞创伤愈合试验和Transwell细胞迁移试验分别对转染空载体、miR-138 mimics 及inhibitor后的HepG2肝癌细胞增殖及迁移能力进行检测。Western blot检测上调或下调miR-138后miR-138相关靶蛋白CCND3及波形蛋白的表达。结果与相应对照相比,miR-138的表达水平在肝癌组织及肝癌细胞系中明显降低( P <0.01)。当miR-138 mimics转染肝癌细胞后,HepG2细胞的活力降低,创伤愈合能力较弱,迁移能力明显降低( P <0.01),经Western blot检测,波形蛋白和CCND3的表达水平降低( P <0.01)。转染miR-138 inhibitor 后,HepG2细胞的增殖能力升高,肝癌细胞的创伤愈合能力和迁移能力提升( P <0.01),与此同时,波形蛋白和 CCND3的表达水平升高( P < 0.01 )。结论通过调节波形蛋白和 CCND3的表达,miR-138在肝癌细胞的增殖活力、迁移能力的变化机制中发挥重要的作用。
