人红细胞非凝集型单抗(自身全血凝集试验试剂)的研制及鉴定 被引量：6

1

作者 张学述 聂艳桃 +1 位作者 赖军 江咏梅 《微生物学免疫学进展》 2000年第1期34-36,共3页

应用杂交瘤技术 ,混合人O型红细胞免疫纯系BALB/C小鼠 ,包被的红细胞作为固相抗原 ,ELISA法筛选出识别红细胞表面共同抗原的抗体 ,然后利用Coombs原理 ,加入抗球蛋白试剂。用玻片法筛选出非凝集型抗体 ,得到 2株稳定分泌上述抗体的杂交... 应用杂交瘤技术 ,混合人O型红细胞免疫纯系BALB/C小鼠 ,包被的红细胞作为固相抗原 ,ELISA法筛选出识别红细胞表面共同抗原的抗体 ,然后利用Coombs原理 ,加入抗球蛋白试剂。用玻片法筛选出非凝集型抗体 ,得到 2株稳定分泌上述抗体的杂交瘤并进行初步鉴定 ,单抗上清血凝效价可达 1∶5 0～ 1∶10 0 ,腹水血凝效价为 1∶8× 10 4 ～ 1∶16× 10 4 。另外 ,本文特别讨论了凝集型单抗的Fab段作为非凝集型抗体应用的可能性。 展开更多

关键词 人红细胞表面共同抗原 非凝集型抗体 单克隆抗体

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病毒性呼吸道疾病的实验室诊断进展 被引量：6

2

作者 聂艳桃 何太平 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2005年第1期30-31,共2页

本文介绍了病毒性呼吸道疾病的实验室诊断方法 ,包括组织培养、血清学和直接检测技术以及快速诊断和分子检测技术。由于并非所有的病毒感染都需要实验室诊断 ,因此随着这些方法的广泛应用 。

关键词 呼吸道病毒 PCR 实验室诊断

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金黄色葡萄球菌的定量耐药谱分型 被引量：5

3

作者 张燕 张立平 +2 位作者 聂艳桃 刘波 朱超 《中国卫生检验杂志》 2000年第2期129-131,共3页

我们对临床分离的１４４株金黄色葡萄球菌作了定量耐药谱分型和噬菌体分型。将相似性系数Ｅ引人菌株相 似性分析，大大提高了耐药谱分型的辨别力和重复性。我们还采用Ｈｕｎｔｅｒ介绍的辨别力指数Ｄ来评价方法的辨别力， 使辨别力数字... 我们对临床分离的１４４株金黄色葡萄球菌作了定量耐药谱分型和噬菌体分型。将相似性系数Ｅ引人菌株相 似性分析，大大提高了耐药谱分型的辨别力和重复性。我们还采用Ｈｕｎｔｅｒ介绍的辨别力指数Ｄ来评价方法的辨别力， 使辨别力数字化。噬菌体分型除采用国际通用基本分型噬菌体外，还首次将国际中心新建立的一套１０个ＭＲＳＡ分型噬 菌体用于我国临床菌株分型。试验表明，定量耐药谱分型的分型率高（１００％），重复性好（９８．３％），辨别力强 （０．９８８），且方法简便，是金葡菌流行病学分型的有效方法。而噬菌体分型的分型率较低，为６３．２％，有必要继续改进 分型噬菌体。 展开更多

关键词 金葡菌 定量耐药谱分型 噬菌体分型 相似性系数

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长效重组人凝血因子Ⅷ细胞培养条件的优化

4

作者 向雨秘 费保进 +3 位作者 聂艳桃 胡珍霞 侯仰帅 梁洪 《药物生物技术》 CAS 2023年第1期25-31,共7页

优化国产长效重组人凝血因子Ⅷ的细胞培养条件,为后续研究提供实验依据。采用分批补料培养方式,将长效重组人凝血因子Ⅷ细胞接种至1 L发酵罐中进行培养,分析在不同补料培养基浓度(2%Cell Boost 2,3%Cell Boost 2,5%Cell Boost 2,补料培... 优化国产长效重组人凝血因子Ⅷ的细胞培养条件,为后续研究提供实验依据。采用分批补料培养方式,将长效重组人凝血因子Ⅷ细胞接种至1 L发酵罐中进行培养,分析在不同补料培养基浓度(2%Cell Boost 2,3%Cell Boost 2,5%Cell Boost 2,补料培养基为Cell Boost 2和细胞培养基按照W/V比配制的培养基)、不同细胞培养pH(pH=6.9、pH=7.0、pH=7.1)、不同培养基(CDM4 PERMAb、CD11V、Veros),培养基补加Cu^(2+)的情况下,细胞密度、细胞活率、细胞代谢以及发酵液中蛋白活性的变化,从而确定最优培养条件。最佳培养条件:补料浓度2%Cell Boost 2,细胞培养pH 7.0,培养基为添加40μmol/L Cu^(2+)的CD11V,整个细胞培养周期17 d,细胞培养液收获体积是初始培养体积的2.6倍;细胞密度峰值达2375×10^(4)cells/mL,在收获时活率高于90%;在蛋白表达最高时,乳酸仅为0.3 mmol/L,蛋白活性高达2443.94 IU/mL,是同等条件下CDM4 PERMAb培养基(1182.17 IU/mL)的2.1倍。该研究优化了国产长效重组人凝血因子Ⅷ的细胞培养条件,提高了目的蛋白的活性,延长了整个培养周期,提升了目的蛋白的产量,对国产长效重组人凝血因子Ⅷ的产业化具有促进意义。 展开更多

关键词 血友病A 长效重组人凝血因子Ⅷ 中国仓鼠卵巢细胞 分批补料培养 接种培养 细胞培养 蛋白活性

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重组人促卵泡激素在CHO细胞中的表达 被引量：3

5

作者 何太平 唐菁燕 +5 位作者 徐珑 宋春雷 谭晓晶 聂艳桃 杨波 雷韬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1409-1412,共4页

目的在CHO细胞中表达重组人促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)。方法用内部核糖体进入位点序列(IRES)将FSHα和β亚基在基因水平上进行拼接,并在同一启动子的控制下构建重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH,转染CHO细胞,筛选... 目的在CHO细胞中表达重组人促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)。方法用内部核糖体进入位点序列(IRES)将FSHα和β亚基在基因水平上进行拼接,并在同一启动子的控制下构建重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH,转染CHO细胞,筛选并建立稳定表达工程细胞株,并对工程细胞的生长和表达进行分析。结果重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH经双酶切和测序证明构建正确;转染CHO细胞获得高的阳性克隆率(80.65%),经MTX加压和克隆筛选获得稳定表达工程细胞株D5;D5细胞株在无血清摇瓶批次培养中FSH的表达量为2.5 IU/ml,在培养参数可控的生物反应器中FSH的表达量为摇瓶中的2倍多,达6 IU/ml。结论建立了一种在CHO细胞中表达异二聚体糖蛋白的方法,获得的工程细胞适应无血清培养且易于扩大培养,在生物反应器中可获得高的表达量,且具有进一步优化提高表达量的潜力。 展开更多

关键词 促卵泡激素 异二聚体糖蛋白 CHO细胞 培养基 无血清

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抗调亡基因bcl-xl过表达提高工程细胞IVCC及目的蛋白表达的研究 被引量：3

6

作者 何太平 唐菁燕 +3 位作者 宋春雷 聂艳桃 雷韬 杨波 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期674-679,共6页

用无血清培养基或化学成分明确的培养基生产治疗用重组蛋白已成为趋势。然而,在此条件下凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白的表达十分困难,其主要原因之一是在细胞培养过程中工程细胞大量凋亡造成的细胞密度低和生存期短。通过将早期抗... 用无血清培养基或化学成分明确的培养基生产治疗用重组蛋白已成为趋势。然而,在此条件下凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白的表达十分困难,其主要原因之一是在细胞培养过程中工程细胞大量凋亡造成的细胞密度低和生存期短。通过将早期抗凋亡基因导入工程细胞并进行过表达可改善工程细胞的活细胞密度积分(integral viable cell concentration,IVCC),提高表达量。该研究将bcl-xl基因导入工程细胞,筛选其高表达细胞株,并验证工程细胞的抗凋亡能力,获得了稳定表达抗凋亡蛋白和目的蛋白的工程细胞株。与母细胞相比,稳定表达Bcl-xL的工程细胞的IVCC提高了50%,最终目的蛋白表达增加超过200%,显示抗凋亡基因bcl-xl的过表达可改善工程细胞在无血清悬浮培养过程中的细胞凋亡,提高表达量,为表达人凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 细胞凋亡 BCL-XL CHO细胞 无血清培养基 糖蛋白 表达

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高表达抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体细胞株的建立及其表达产物的分析 被引量：2

7

作者 聂艳桃 何太平 +7 位作者 谢荣麟 葛永红 容新宗 陶昆蓉 刘宇虹 王琰 Sendi Montanie Vladka Curin-Serbec 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期553-556,共4页

目的建立高表达抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体的工程细胞株。方法将构建的抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因真核表达载体转染CHO细胞,并采用DHFR/MTX基因扩增策略,经反复加压和克隆筛选,提高抗体的表达量。用ELISA、Westernblot和体外中和试验分... 目的建立高表达抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体的工程细胞株。方法将构建的抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因真核表达载体转染CHO细胞,并采用DHFR/MTX基因扩增策略,经反复加压和克隆筛选,提高抗体的表达量。用ELISA、Westernblot和体外中和试验分析比较抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体与鼠亲本单抗的特性。结果获得的表达抗人TNF-α嵌合抗体的转染细胞系2F5,在静止培养4d后工程抗体的表达量约80mg/L。所表达的工程抗体优于鼠亲本单抗F7/2,并具有良好的特异性和中和活性,其相对亲和力约为2.1×10-10mol/L。结论已成功建立了高表达的嵌合抗体工程细胞株,其抗体具有潜在的临床应用前景。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 嵌合抗体 CHO细胞

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抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因在CHO细胞中的表达 被引量：2

8

作者 何太平 聂艳桃 +5 位作者 葛永红 谢荣麟 袁涛 王琰 Vesna Galvani Vladka Curin Serbec 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期368-370,374,共4页

目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达。方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量。结果构建的嵌合抗体基因... 目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达。方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量。结果构建的嵌合抗体基因在CHO细胞中的初始表达量为0.71μg/ml,亚克隆后表达量达0.95μg/ml。结论已成功构建抗人TNF-α嵌合抗体基因,并在CHO细胞中得到了高效表达。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 嵌合抗体 CHO细胞 表达 抗体基因 TNF-α 嵌合 人免疫球蛋白 鼠 RACE技术

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重组复杂蛋白快速表达体系的建立 被引量：2

9

作者 何太平 杨波 +5 位作者 谭晓晶 唐菁燕 雷韬 宋春雷 聂艳桃 徐珑 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第11期1259-1263,共5页

目的建立重组复杂蛋白快速表达体系。方法利用定点整合技术建立定点整合宿主细胞库,分别以X-Fc融合蛋白和人凝血因子Ⅷ(FⅧ)为研究对象进行定点整合转染和表达分析。结果通过定点整合转染建立了高表达的宿主细胞库;X-Fc融合蛋白和人FⅧ... 目的建立重组复杂蛋白快速表达体系。方法利用定点整合技术建立定点整合宿主细胞库,分别以X-Fc融合蛋白和人凝血因子Ⅷ(FⅧ)为研究对象进行定点整合转染和表达分析。结果通过定点整合转染建立了高表达的宿主细胞库;X-Fc融合蛋白和人FⅧ均在宿主细胞中获得了高表达,X-Fc融合蛋白的表达量为220 mg/L,人FⅧ在有血清培养条件下的酶活性为2 IU/ml,且细胞株表达稳定,易于扩大培养。结论已成功建立了基于CHO细胞定点整合的重组复杂蛋白快速表达体系,该体系在克隆效率和时间上具有很大优势,可实现蛋白的有效快速表达。 展开更多

关键词 重组蛋白 CHO细胞 定点整合 快速表达

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沙门氏菌属新诊断血清的研制

10

作者 张燕 李成志 +4 位作者 聂艳桃 易红彬 张立平 安媛 魏园园 《预防医学情报杂志》 CAS 1999年第4期194-196,共3页

报道了研制的近１０余年来国际上新发现的沙门氏菌属８种抗原的抗血清及其２种多价血清，属国内首次制备；还用单相菌替代原有双相菌免疫制备了４种因子血清，不仅简化了生产，还提高了质量；上述１４种诊断血清均达到《中国生物制品规... 报道了研制的近１０余年来国际上新发现的沙门氏菌属８种抗原的抗血清及其２种多价血清，属国内首次制备；还用单相菌替代原有双相菌免疫制备了４种因子血清，不仅简化了生产，还提高了质量；上述１４种诊断血清均达到《中国生物制品规程》要求。这些血清的制成，使我国沙门氏菌的血清学诊断上了一个台阶，扩大了检测范围，减少漏检、误判。此外，还对沙门氏菌属的最新分类命名作简介。 展开更多

关键词 沙门氏菌 诊断血清 研制 抗血清

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重组人凝血因子Ⅸ在CHO细胞中的表达和纯化 被引量：1

11

作者 李德款 张航 +4 位作者 聂艳桃 李成 梁洪 寇鹏 费保进 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第11期1243-1246,共4页

目的在CHO细胞中表达并纯化人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)。方法将高表达hFⅨ的CHO细胞株在摇瓶中用无血清培养基进行批次培养和补料批次培养,收获补料批次培养上清,通过阴离子交换层析进行纯化,测定纯化产物的蛋白浓... 目的在CHO细胞中表达并纯化人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)。方法将高表达hFⅨ的CHO细胞株在摇瓶中用无血清培养基进行批次培养和补料批次培养,收获补料批次培养上清,通过阴离子交换层析进行纯化,测定纯化产物的蛋白浓度及hFⅨ活性,并进行SDS-PAGE分析。结果批次和补料批次培养表达的hFⅨ活性分别高达0.62和14.45 IU/mL。纯化后的hFⅨ比活性高达157.19 IU/mg。SDS-PAGE分析表明重组CHO工程细胞株能正确表达hFⅨ。结论成功在CHO细胞中表达并纯化了高比活性的重组hFⅨ蛋白,为进一步研制重组FⅨ药物奠定了基础。 展开更多

关键词 人凝血因子Ⅸ 中国仓鼠卵巢细胞 阴离子交换层析

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Bcl-xL和BDDFⅧ在CHO-DG44细胞中共表达及抗凋亡能力分析 被引量：1

12

作者 王继超 聂艳桃 +3 位作者 何太平 费保进 林宏辉 雷韬 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1411-1416,共6页

在CMV启动子控制下构建含有B区缺失型FⅧ基因(BDDFⅧ)和Bcl-xL基因编码序列的真核表达载体pF8B和只含B区缺失的FⅧ基因(BDDFⅧ)的真核表达载体pF8,通过双酶切和测序验证重组真核表达载体构建的正确性;经过MTX压力筛选得到稳定表达BDDF... 在CMV启动子控制下构建含有B区缺失型FⅧ基因(BDDFⅧ)和Bcl-xL基因编码序列的真核表达载体pF8B和只含B区缺失的FⅧ基因(BDDFⅧ)的真核表达载体pF8,通过双酶切和测序验证重组真核表达载体构建的正确性;经过MTX压力筛选得到稳定表达BDDFⅧ活性的CHO-F8B和CHO-F8细胞株.在相同可控培养参数下进行发酵培养,Bcl-xL基因过表达赋予CHO-F8B细胞较强的抗调亡能力和更高的BDDFⅧ表达活性,BDDFⅧ的表达活性后者是前者的5倍多. 展开更多

关键词 B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDDFⅧ) 抗凋亡 CHO细胞 BCL-XL 表达

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免疫抗体文库的构建及亚nM高亲和力人源抗体的筛选 被引量：1

13

作者 聂艳桃 何太平 +7 位作者 雷韬 葛永红 柏玉碧 张聪明 宋春雷 谭晓晶 唐菁燕 杨波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第12期1286-1290,共5页

目的构建免疫抗体文库,并筛选亚nM高亲和力人源抗体。方法采用破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)免疫的高效价人B淋巴细胞,经PCR扩增可变区基因,构建免疫抗体文库,并筛选高亲和力人源抗体。将获得的抗体基因片段转换成全分子,进行真核表... 目的构建免疫抗体文库,并筛选亚nM高亲和力人源抗体。方法采用破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)免疫的高效价人B淋巴细胞,经PCR扩增可变区基因,构建免疫抗体文库,并筛选高亲和力人源抗体。将获得的抗体基因片段转换成全分子,进行真核表达和纯化,并与人抗TT多克隆抗体进行比较分析。结果构建的人破伤风免疫噬菌体抗体库库容为4.5×106,多样性符合引物设计要求,经筛选获得相对亲和力为10-10M的高亲和力人源抗体,其体内中和活性高于人多克隆抗体。结论根据抗体基因使用频率设计引物构建小容量免疫抗体文库,可获得亚nM的高亲和力人源抗体,该策略可用于抗感染性疾病人源抗体的开发。 展开更多

关键词 噬菌体文库 人源抗体 抗体亲和力 中和活性 破伤风毒素

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巴塞罗纳病毒疫苗会议

14

作者 聂艳桃 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2005年第2期81-84,共4页

20 0 3年10月2 5～2 8日在西班牙巴塞罗纳召开了国际病毒疫苗会议。来自世界各国的一流专家学者,就最重要的人类和动物病毒疫苗的开发和应用进行了广泛的交流和讨论,内容包括基础病毒学、流行病学。

关键词 人用病毒疫苗 兽用病毒疫苗 载体 佐剂

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抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体CHO工程细胞株的构建、筛选及表达

15

作者 费保进 雷韬 +3 位作者 姜晓 李小娇 沈虎 聂艳桃 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第10期1056-1059,共4页

目的构建抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体CHO工程细胞株,并进行筛选及表达。方法将抗HER2抗体重链基因Fd及轻链基因VL分别克隆至同一质粒p RH上,将构建正确的重组表达质粒命名为... 目的构建抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体CHO工程细胞株,并进行筛选及表达。方法将抗HER2抗体重链基因Fd及轻链基因VL分别克隆至同一质粒p RH上,将构建正确的重组表达质粒命名为p HER2。通过脂质体法将p HER2转染至二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型CHO细胞(CHO-DG44)中,筛选稳定表达的工程细胞株,进行ELISA及SDS-PAGE检测。同时对抗HER2抗体高表达细胞株进行batch模拟试验。结果从近10 000株克隆中筛选获得3株备选细胞株,命名为H6、H7和H9。细胞株培养上清表达的抗体仅能与重组HER2发生特异性结合;SDS-PAGE检测结果表明,于相对分子质量50 000和25 000处可见重链和轻链的目的蛋白条带。H6、H7和H9细胞株在简单的batch悬浮培养条件下周期约为1周,抗体水平随培养时间的延长而逐渐升高,H9细胞株表达水平最高,为0.52 mg/ml。结论本研究筛选获得的工程细胞株H9具有较高的抗HER2单克隆抗体水平,为靶向治疗HER2过表达的乳腺癌和胃癌等恶性肿瘤奠定了基础。 展开更多

关键词 人表皮生长因子受体2 单克隆抗体 中国仓鼠卵巢细胞

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