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人SCF基因5′旁侧-1190～- 853 AT富集区功能研究 被引量：4
1
作者 聂怡玲 谭文斌 +5 位作者 朱敏 罗赛群 郭小珊 成光杰 胡维新 彭兴华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期315-318,共4页
已有的报告基因和EMSA实验研究表明 ,人干细胞生长因子 (SCF)基因 5′旁侧AT富集区- 1 1 90～ - 853在HeLa和MCF 7细胞中均能增强下游基因转录 ,可能为一个核基质结合区(MAR) ,对人SCF基因的转录发挥调控作用 .为进一步研究该AT富集区... 已有的报告基因和EMSA实验研究表明 ,人干细胞生长因子 (SCF)基因 5′旁侧AT富集区- 1 1 90～ - 853在HeLa和MCF 7细胞中均能增强下游基因转录 ,可能为一个核基质结合区(MAR) ,对人SCF基因的转录发挥调控作用 .为进一步研究该AT富集区的功能 ,将人SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853AT富集区分别克隆入SV40或CMV启动子前后紧接着CAT报告基因 ,瞬时转染Jurkat,HepG2和 3T3细胞 ,检测CAT报告基因的瞬时表达活性 .结果表明 :人SCF基因 5′旁侧- 1 1 90～ - 853AT富集区在Jurkat和HepG2细胞中 ,对分别由SV40和CMV启动子引导的CAT基因表达均有抑制作用 ;但在 3T3细胞中对SV40启动子的转录活性表现出增强作用 ,对CMV启动子的转录活性无明显影响 .这些结果提示 ,人SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853AT富集区转录调控具有组织细胞特异性 。 展开更多
关键词 人干细胞因子基因 调控元件 启动子 报告基因检测 SCF
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人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究 被引量：4
2
作者 谭文斌 聂怡玲 +4 位作者 郭小珊 谭运年 成光杰 陈汉春 朱定尔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期425-429,共5页
人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ... 人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339～ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339～ - 2 73区域为一新的沉默子 。 展开更多
关键词 人干细胞因子基因 序列分析 基因表达 转录调控
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定量RTPCR中人干细胞因子的RNACRS的构建 被引量：2
3
作者 谭文斌 聂怡玲 +5 位作者 罗赛群 郭小珊 成光杰 陈汉春 朱定尔 public.cs.hn.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期315-318,共4页
一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经Exonuc... 一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理 ,以导致hSCFcDNA中一小片段缺失 ,由此获得重组 pGEMSCF模拟体 (mimic) ,经体外转录得到hSCFRNA CRS .测序表明 :该RNA CRS与hSCFmRNA比较 ,缺失了从第 4 99位至 60 8位共 110个核苷酸 ,但二者RT PCR反应可用同一对扩增引物 ,反应动力学极为相似 .这种hSCFRNA CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准 ,适用于定量RT PCR中 ,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析 .此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及 展开更多
关键词 基因表达 定量RT-PCR RNA-CRS hSCF 构建
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DNA足纹步移作图法
4
作者 谭文斌 朱敏 +4 位作者 聂怡玲 罗赛群 成光杰 胡维新 彭兴华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期551-555,共5页
一种以PCR介导的、可对任意长度靶DNA片段上的核蛋白结合位点进行DNA足纹作图分析的新方法 .原理是 :采用被随机降解靶DNA分子作为模板 ,用标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物进行单链扩增 .首先 ,利用某种化学试剂或酶如DNaseⅠ... 一种以PCR介导的、可对任意长度靶DNA片段上的核蛋白结合位点进行DNA足纹作图分析的新方法 .原理是 :采用被随机降解靶DNA分子作为模板 ,用标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物进行单链扩增 .首先 ,利用某种化学试剂或酶如DNaseⅠ对已与蛋白质结合或未结合的双链靶DNA进行随机降解 ,在一定条件下使每一个DNA分子恰好只有一个位点被切割 .然后 ,这些被随机降解DNA分子即可作为模板 ,用同位素标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物 (正向或反向 )进行单链扩增 .最后 ,扩增的单链产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影形成DNA片段梯队 ,而被蛋白质保护的位点则在DNA片段梯队中形成位置缺口 ,从而确定DNA与蛋白质相结合的精确位点 .该方法被应用对人干细胞因子基因 5′旁侧 - 1190～ - 2 展开更多
关键词 DNA足纹作图分析 聚合酶链式反应 人干细胞因子基因
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