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题名大肠癌相关基因ST13的原核表达及鉴定
被引量：3
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作者
邵吉民
郑树
耿礼仪
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机构
浙江大学医学院基础医学系
浙江大学肿瘤研究所
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出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2001年第6期252-255,共4页
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基金
国家"九五"攻关 (96 90 912 1)等基金资助项目
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文摘
目的 :原核表达大肠癌相关基因 ST1 3 ,并予以鉴定。方法 :将 ST1 3 c DNA经 PCR扩增和亚克隆 ,与 GST原核表达载体 p GEX-4T-2重组 ,转化 E.coli INVαF′菌表达 ,经 GlutathioneSepharose 4B亲和层析 GST-ST1 3融合蛋白 ,再以凝血酶切得到 ST1 3蛋白。结果 :限制性酶切和DNA测序表明 ,ST1 3 c DNA ORF正确克隆于 p GEX-4T-2多克隆位点。经 IPTG诱导表达的GST-ST1 3融合蛋白主要存在于可溶性上清 ,表达量占大肠杆菌总蛋白 2 0 %。经亲和层析 ,每升诱导菌回收融合蛋白 2 .5mg,纯度为 91 .3 %。 Western-blot证实 ,原核表达的 ST1 3蛋白、细胞中天然 ST1 3蛋白的 1 0 % SDS-PAGE表观分子量 ,约 50 k D。结论 :成功构建了 ST1 3基因原核表达质粒 ,并大量表达和纯化了 ST1 3蛋白。
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关键词
大肠肿瘤
遗传学
基因表达
序列分析
DNA
ST13基因
原核表达
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Keywords
Intestinal neoplasms/genet
Gene expression
Sequence analysis,DNA
Recombination,genetic
Colorectal cancer
ST13 gene
Prokaryotic expression
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分类号
R735.34
[医药卫生—肿瘤]
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