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URA3基因影响青蒿酸酿酒酵母工程菌中试发酵产量
被引量：
2
1
作者
郭未蔚
艾丽梅
+4 位作者
胡栋
陈亚军
耿
梦
馨
郑玲辉
白利平
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期737-748,共12页
CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除,通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1211半乳糖...
CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除,通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1211半乳糖代谢负调控基因GAL80,获得菌株S.cerevisiae 1211-2,在不添加半乳糖诱导的情况下,青蒿酸摇瓶发酵产量达到了740 mg/L。但在50 L中试发酵实验中,S.cerevisiae 1211-2很难利用对青蒿酸积累起到决定性作用的碳源-乙醇,青蒿酸的产量仅为亲本菌株S.cerevisiae 1211的20%–25%。我们推测因遗传操作所需的筛选标记URA3突变,影响了其生长及青蒿酸产量。随后我们使用重组质粒pML104-KanMx4-u连同90 bp供体DNA成功恢复了URA3基因,获得了工程菌株S.cerevisiae 1211-3。S.cerevisiae 1211-3能够在葡萄糖和乙醇分批补料的发酵罐中正常生长,其青蒿酸产量超过20 g/L,与亲本菌株产量相当。研究不但获得了不加半乳糖诱导的青蒿酸生产菌株,同时首次发现了营养缺陷型标记URA3基因显著影响乙醇补料的中试发酵中青蒿酸的产生,也为酵母作为底盘来进行其他天然产物的生产提供了借鉴。
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关键词
工程酿酒酵母
青蒿酸
CRISPR/Cas9
URA3
原文传递
链霉菌的全局调控蛋白DasR
被引量：
1
2
作者
黄星宇
郭未蔚
+2 位作者
耿
梦
馨
庄琢琛
白利平
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期1260-1269,共10页
链霉菌能够产生多种次级代谢产物,在临床、农牧业、生物技术等领域具有重要应用价值;对链霉菌的调控网络进行深入研究有助于提高次级代谢产物产量并发现新的次级代谢产物。链霉菌中次级代谢产物生物合成按调控通路分为全局调控与途径特...
链霉菌能够产生多种次级代谢产物,在临床、农牧业、生物技术等领域具有重要应用价值;对链霉菌的调控网络进行深入研究有助于提高次级代谢产物产量并发现新的次级代谢产物。链霉菌中次级代谢产物生物合成按调控通路分为全局调控与途径特异性调控,其中全局调控蛋白可靶向多种通路特异调控基因和生物合成基因,在链霉菌的生命活动中发挥着更为普遍、复杂的调控作用,因此研究全局调控对于进一步认识链霉菌复杂调控网络具有重要的意义。DasR作为一个全局调控蛋白,在链霉菌的营养感应、形态分化和次级代谢中发挥重要作用,本文从DasR的结构、序列和作用特点出发,联系链霉菌生长发育和次级代谢、营养感应和初级代谢等讨论DasR的研究进展。
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关键词
DasR蛋白
链霉菌
全局调控
次级代谢
营养感应
原文传递
题名
URA3基因影响青蒿酸酿酒酵母工程菌中试发酵产量
被引量：
2
1
作者
郭未蔚
艾丽梅
胡栋
陈亚军
耿
梦
馨
郑玲辉
白利平
机构
中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室/中国医学科学院药物合成生物学重点实验室
浙江海正药业股份有限公司浙江抗菌药物重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期737-748,共12页
基金
国家科技重大专项(2017ZX09101002-003-003)
国家自然科学基金(31870059)。
文摘
CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除,通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1211半乳糖代谢负调控基因GAL80,获得菌株S.cerevisiae 1211-2,在不添加半乳糖诱导的情况下,青蒿酸摇瓶发酵产量达到了740 mg/L。但在50 L中试发酵实验中,S.cerevisiae 1211-2很难利用对青蒿酸积累起到决定性作用的碳源-乙醇,青蒿酸的产量仅为亲本菌株S.cerevisiae 1211的20%–25%。我们推测因遗传操作所需的筛选标记URA3突变,影响了其生长及青蒿酸产量。随后我们使用重组质粒pML104-KanMx4-u连同90 bp供体DNA成功恢复了URA3基因,获得了工程菌株S.cerevisiae 1211-3。S.cerevisiae 1211-3能够在葡萄糖和乙醇分批补料的发酵罐中正常生长,其青蒿酸产量超过20 g/L,与亲本菌株产量相当。研究不但获得了不加半乳糖诱导的青蒿酸生产菌株,同时首次发现了营养缺陷型标记URA3基因显著影响乙醇补料的中试发酵中青蒿酸的产生,也为酵母作为底盘来进行其他天然产物的生产提供了借鉴。
关键词
工程酿酒酵母
青蒿酸
CRISPR/Cas9
URA3
Keywords
engineered Saccharomyces cerevisiae
artemisinic acid
CRISPR/Cas9
URA3
分类号
TQ920.1 [轻工技术与工程—发酵工程]
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
链霉菌的全局调控蛋白DasR
被引量：
1
2
作者
黄星宇
郭未蔚
耿
梦
馨
庄琢琛
白利平
机构
中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期1260-1269,共10页
基金
国家自然科学基金(31870059)
国家重点研发计划(2018YFA0902000)。
文摘
链霉菌能够产生多种次级代谢产物,在临床、农牧业、生物技术等领域具有重要应用价值;对链霉菌的调控网络进行深入研究有助于提高次级代谢产物产量并发现新的次级代谢产物。链霉菌中次级代谢产物生物合成按调控通路分为全局调控与途径特异性调控,其中全局调控蛋白可靶向多种通路特异调控基因和生物合成基因,在链霉菌的生命活动中发挥着更为普遍、复杂的调控作用,因此研究全局调控对于进一步认识链霉菌复杂调控网络具有重要的意义。DasR作为一个全局调控蛋白,在链霉菌的营养感应、形态分化和次级代谢中发挥重要作用,本文从DasR的结构、序列和作用特点出发,联系链霉菌生长发育和次级代谢、营养感应和初级代谢等讨论DasR的研究进展。
关键词
DasR蛋白
链霉菌
全局调控
次级代谢
营养感应
Keywords
DasR
Streptomyces
global regulation
secondary metabolism
nutrient sensing
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
URA3基因影响青蒿酸酿酒酵母工程菌中试发酵产量
郭未蔚
艾丽梅
胡栋
陈亚军
耿
梦
馨
郑玲辉
白利平
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
原文传递
2
链霉菌的全局调控蛋白DasR
黄星宇
郭未蔚
耿
梦
馨
庄琢琛
白利平
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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