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微波诱变结合化学诱变选育酸性蛋白酶高产菌 被引量:70
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作者 李永泉 贺筱蓉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期181-184,共4页
酸性蛋白酶是酶制剂工业比较重要的酶种,广泛应用于饲料、食品、皮革、医药和酿造工业中[1~4],具有较大的市场潜力。本研究以宇佐美曲霉(Aspergilususami)白色突变株B1为出发菌株,通过微波诱变和亚硝基胍、... 酸性蛋白酶是酶制剂工业比较重要的酶种,广泛应用于饲料、食品、皮革、医药和酿造工业中[1~4],具有较大的市场潜力。本研究以宇佐美曲霉(Aspergilususami)白色突变株B1为出发菌株,通过微波诱变和亚硝基胍、硫酸锂复合诱变剂点试平板法诱变,选... 展开更多
关键词 微波诱变 化学诱变 宇佐美曲霉 酸性蛋白酶
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复合水解酶黑曲霉HD-1固体发酵工艺研究 被引量:12
2
作者 李永泉 赵小立 +2 位作者 贺筱蓉 周红军 《真菌学报》 CSCD 北大核心 1995年第3期226-233,共8页
黑曲霉HD-1是一株分泌高单位酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、糖化酶等多种水解酶的生产菌,本研究采用单因素搜索和正交试验对其固体发酵工艺进行优化,并采用中心组合设计进行扩大生产试验,结果表明酶活可达:酸性蛋白酶1.1万U左右,果胶酶... 黑曲霉HD-1是一株分泌高单位酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、糖化酶等多种水解酶的生产菌,本研究采用单因素搜索和正交试验对其固体发酵工艺进行优化,并采用中心组合设计进行扩大生产试验,结果表明酶活可达:酸性蛋白酶1.1万U左右,果胶酶9千u以上,纤维素C_X酶1.1万U左右,纤维素C_L酶4千U以上,糖化酶7千U左右。同时说明数理统计方法设计实验,工作量小,优化结果准确。 展开更多
关键词 黑曲霉HD-1 复合水解酶 固体发酵 发酵工艺
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高产复合酶菌株HD-1选育的研究 被引量:6
3
作者 赵小立 李永泉 +4 位作者 贺筱蓉 周红军 钱育军 泮伯良 《真菌学报》 CSCD 北大核心 1995年第4期289-295,共7页
从产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)菌中分离出一支产酸性蛋白酶等多种水解酶的菌株No.3号。经铜蒸汽激光诱变,选育出一支高产复合酶的菌株HD-1,该菌在简单的固体发酵培养基上,28℃培养48hr,每克鲜曲的酶活力(U)为:酸性蛋白酶7500U... 从产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)菌中分离出一支产酸性蛋白酶等多种水解酶的菌株No.3号。经铜蒸汽激光诱变,选育出一支高产复合酶的菌株HD-1,该菌在简单的固体发酵培养基上,28℃培养48hr,每克鲜曲的酶活力(U)为:酸性蛋白酶7500U、纤维素C_X酶9061U、纤维素C_L酶3581U、果胶酶5471U、糖化酶5582U。酶活平均提高率为38.86%,最高幅度是78.6%。该菌经多次连续传代和贮存一年后,产酶性状稳定。该菌株是目前国内饲料用酶制剂生产株中,酶系最齐全,产酶水平位于前列的优良菌株。 展开更多
关键词 激光诱变 复合酶 黑曲霉 发酵
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数理统计方法优化单细胞蛋白发酵培养基研究 被引量:6
4
作者 李永泉 贺筱蓉 +2 位作者 赵小立 周红军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期263-266,共4页
采用正交试验和中心组合设计相结合的数理统计方法,在2L发酵罐中对紫云英汁液培养单细胞蛋白发酵培养基进行筛选、优化,试验结果表明较优培养基为:初糖2.3%,酵母粉0.16%,KH_2PO_40.2%,MgSO_40.0... 采用正交试验和中心组合设计相结合的数理统计方法,在2L发酵罐中对紫云英汁液培养单细胞蛋白发酵培养基进行筛选、优化,试验结果表明较优培养基为:初糖2.3%,酵母粉0.16%,KH_2PO_40.2%,MgSO_40.05%。酵母浓度最高达10.46g/L,基质生长得率为0.55g菌体/g基质,基质转化率为83%。研究结果同时说明采用数理统计方法设计实验,工作量小,效率高,结果准确。 展开更多
关键词 正交试验 单细胞蛋白 发酵 培养基 数理统计
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水稻叶绿体基因文库的构建和精细限制图谱的制作 被引量:10
5
作者 赵衍 +4 位作者 邹勤 沈桂芳 唐愫 柴建 汪训明 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1991年第2期149-160,共12页
水稻幼叶在加有高浓度抗坏血酸的缓冲液中匀浆,以获得完整的叶绿体,从中分离到ctDNA得率高达100μg/100g叶,纯度足以用于限制性核酸内切酶分析。ctDNA经Mbo I部分酶解得到的片段克隆到载体pcos 2 EMBL的Bam HI位点,重组DNA经体外包装后... 水稻幼叶在加有高浓度抗坏血酸的缓冲液中匀浆,以获得完整的叶绿体,从中分离到ctDNA得率高达100μg/100g叶,纯度足以用于限制性核酸内切酶分析。ctDNA经Mbo I部分酶解得到的片段克隆到载体pcos 2 EMBL的Bam HI位点,重组DNA经体外包装后感染宿主菌,筛选表型Tc^5Km^R的重组子,通过计数克隆有效率达5×10~4重组菌落/1微克插入DNA。用λ-末端酶对重组环状双链DNA在cos位点切成线性分子,产生两个(ON-L及ON-R)可供标记和杂交的末端,线性Cosmid DNA经限制酶部分消化,凝胶电泳分离,干燥凝胶放射自显影,得到了6种限制性核酸内切酶的限制图谱。水稻ctDNA全长为129.5kb,在ctDNA上Pvu Ⅱ、Sal Ⅰ、Pst Ⅰ、Hind Ⅲ、Eco RI及Bam HI的切点分别为11、12、17、37、67和44个,1R A和B为21.7kb,LSC为73.7kb,SSC为12.4kb。 展开更多
关键词 水稻 叶绿体 基因文库 限制图谱
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宇佐美曲霉L336酸性蛋白酶的动力学性质 被引量:6
6
作者 徐晨明 +3 位作者 李永泉 周红军 贺筱蓉 《菌物系统》 CSCD 北大核心 1999年第1期61-66,共6页
L336酸性蛋白酶的分子量为54000,等电点为3.8±0.2。在pH2.5,40℃条件下,酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0.263g/L、0.278g/L和0.415g/L,Vmax分别为2075、1550和2793μgTyr/min、mL,酪蛋白为最适... L336酸性蛋白酶的分子量为54000,等电点为3.8±0.2。在pH2.5,40℃条件下,酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0.263g/L、0.278g/L和0.415g/L,Vmax分别为2075、1550和2793μgTyr/min、mL,酪蛋白为最适底物。在pH2.0~5.0、40℃以下时酶的稳定性最好。此外,还研究了金属离子对酶活性的影响。 展开更多
关键词 霉菌 酸性蛋白酶 动力学性质
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水稻三系及其杂种F_1的叶绿体同工酶研究 被引量:1
7
作者 周姚宇 唐愫 《科技通报》 1995年第2期102-106,共5页
以二叶期水稻的两个不育系和相应保持系以及由三个恢复系产生的6个组合的杂种F_1代共13个品种的叶绿体为材料,采用聚丙烯酰胺薄层等电聚焦电泳法,分析了酯酶(Est)、过氧化物酶POD、细胞色素氧化酶Cyt的同工酶谱。结... 以二叶期水稻的两个不育系和相应保持系以及由三个恢复系产生的6个组合的杂种F_1代共13个品种的叶绿体为材料,采用聚丙烯酰胺薄层等电聚焦电泳法,分析了酯酶(Est)、过氧化物酶POD、细胞色素氧化酶Cyt的同工酶谱。结果如下:(1)酯酶同工酶出现19条酶带,基本酶带6条,F_1中出现了偏父本杂交型、完全互补型、父本显性型和父本部分显性型四种类型酶谱。(2)过氧化物酶同工酶显示30余条酶带。A区有5条酶带仅见于少数品种;B区有基本酶带6条;C区酶带变化较大。在F_1中出现父本显性型、偏父本杂交型和偏父本部分酶带消失型,(3)细胞色素氧化酶同工酶共显示20余条.A区5条见于少数品种,B区为基本酶带区,C区酶带多变,F_1中出现父本显性型、偏父本互补型和偏母本互补型三种类型酶谱。 展开更多
关键词 水稻 叶绿体 同工酶 杂交水稻 雄性不育
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紫云英叶蛋白提取工艺研究 被引量:4
8
作者 贺筱蓉 李永泉 +2 位作者 赵小立 周红军 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 1994年第4期98-102,共5页
本文采用正交试验对紫云英叶蛋白提取工艺进行了研究,结果表明:蛋白质萃取工艺较优条件为:萃取剂与紫云英鲜叶料液比为5:1,萃取温度为20℃,萃取pH值7.0,萃取剂中盐浓度为0.5%;绿色蛋白质在50℃时沉淀,白色蛋白质在pH=5.0时沉淀。采用... 本文采用正交试验对紫云英叶蛋白提取工艺进行了研究,结果表明:蛋白质萃取工艺较优条件为:萃取剂与紫云英鲜叶料液比为5:1,萃取温度为20℃,萃取pH值7.0,萃取剂中盐浓度为0.5%;绿色蛋白质在50℃时沉淀,白色蛋白质在pH=5.0时沉淀。采用此工艺提取得率为25.4%,每吨紫云英鲜叶可得粗蛋白0.04吨,所得粗蛋白含真蛋白50%左右。 展开更多
关键词 紫云英 叶蛋白 提取工艺
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大麦黄花叶病毒(BaYMV)的提纯和生化性质的研究 被引量:3
9
作者 赵小立 吴建 +2 位作者 黄纯农 龚祖埙 《中国病毒学》 CSCD 1993年第3期296-300,共5页
大麦黄花叶病是由禾谷多粘菌(polymyxa graminis)传布的一类麦类病毒病。是上海市效区及长江中下游及沿海大麦产区的重要病害。大麦黄花叶病毒(BaYMV)在国内外虽已有不少研究,但对国内分离株的生化性质尚未有详细报道。本文报道以上海... 大麦黄花叶病是由禾谷多粘菌(polymyxa graminis)传布的一类麦类病毒病。是上海市效区及长江中下游及沿海大麦产区的重要病害。大麦黄花叶病毒(BaYMV)在国内外虽已有不少研究,但对国内分离株的生化性质尚未有详细报道。本文报道以上海郊区的BaYMV为研究材料,成功地建立了一套分离提纯的方法,并在此基础上,研究了该病毒的结构蛋白和核酸性质,并和国外的一些研究结果进行了比较,从而为今后应用生物技术防治大麦黄花叶病毒打下了基础。 展开更多
关键词 大麦 黄花叶病毒 外壳蛋白 提纯
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宇佐美曲霉L-336酸性蛋白酶2m^3罐中试发酵研究报告 被引量:1
10
作者 李永泉 +2 位作者 贺筱蓉 庄晓峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期5-8,共4页
宇佐美曲霉栗色变种L-336是分泌高单位酸性蛋白酶的生产菌,在摇瓶小试工艺基础上进行2m3罐发酵中试,结果表明:较优发酵培养基(%)为黄豆粉4.3,玉米粉1.0,鱼粉0.7,蚕蛹水解液10,Na2HPO40.2,Ca... 宇佐美曲霉栗色变种L-336是分泌高单位酸性蛋白酶的生产菌,在摇瓶小试工艺基础上进行2m3罐发酵中试,结果表明:较优发酵培养基(%)为黄豆粉4.3,玉米粉1.0,鱼粉0.7,蚕蛹水解液10,Na2HPO40.2,CaCl20.5,NH4Cl1.0,豆油1.6;风量为0~25h时1∶0.4v/v/m,25~50h时1∶1.0v/v/m,50h后1∶1.3v/v/m;接种量10%,温度31℃,搅拌转速200r/min,发酵周期75h。在上述条件下,发酵酶活力稳定在5500u/ml左右。 展开更多
关键词 宇佐美曲霉 酸性蛋白酶 发酵 酶制剂
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宇佐美曲霉酸性蛋白酶发酵工艺研究 被引量:2
11
作者 李永泉 贺筱蓉 +3 位作者 林满喜 潘波 《化学反应工程与工艺》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第4期382-387,共6页
宇佐美曲霉L335是一株分泌高单位酸性蛋白酶的生产菌,本研究采用单因素搜索和正交试验,通过摇瓶发酵和2L搅拌罐发酵,对其发酵工艺进行优化。结果表明,较适宜的发酵培养基(g/100mL)为黄豆粉5.0、玉米粉1.2、鱼... 宇佐美曲霉L335是一株分泌高单位酸性蛋白酶的生产菌,本研究采用单因素搜索和正交试验,通过摇瓶发酵和2L搅拌罐发酵,对其发酵工艺进行优化。结果表明,较适宜的发酵培养基(g/100mL)为黄豆粉5.0、玉米粉1.2、鱼粉0.8、CaCl20.5、Na2HPO40.2、NH4Cl1.0、蚕蛹水解液10.0;通气量控制25h前为1∶0.4v/v/m、25-50h1∶1.0v/v/m、50h后1∶1.3v/v/m;孢子接种,31±1℃培养88h。在上述较优发酵条件下,酸性蛋白酶活力在6100u/mL以上,发酵单位居国内领先地位。 展开更多
关键词 宇佐美曲酶L336 发酵工艺 优化 酸性蛋白酶
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GUS基因在大麦叶肉原生质体中瞬间表达的研究 被引量:1
12
作者 明镇寰 +2 位作者 胡蓉 孙卫宁 金理明 《杭州大学学报(自然科学版)》 CSCD 1993年第3期344-349,共6页
本研究以GUS(9-葡糖苷酸酶)基因为报道基因,采用PEG转化法,对大麦(Hordeum vulgare)叶肉原生质体进行直接转化.转化处理后的原生质体在MSPI 12M培养基中培养1—7天后,用底物x-Gluc的组织化学定位法和底物MUG的荧光分析法分别检测到GUS... 本研究以GUS(9-葡糖苷酸酶)基因为报道基因,采用PEG转化法,对大麦(Hordeum vulgare)叶肉原生质体进行直接转化.转化处理后的原生质体在MSPI 12M培养基中培养1—7天后,用底物x-Gluc的组织化学定位法和底物MUG的荧光分析法分别检测到GUS基因在大麦叶肉原生质体中的瞬间表达.兰细胞计数的统计结果表明,在转化处理后42—72小时转化细胞中GUS酶活力最高,最高转化率达5.4%.实验结果还表明,不同的PEG浓度影响转化效率,7.5%PEG(终浓度)处理转化效果最佳. 展开更多
关键词 大麦 原生质体 葡糖苷酸酶 转化
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紫云英汁液单细胞蛋白发酵工艺研究 被引量:2
13
作者 李永泉 贺筱蓉 +2 位作者 赵小立 周红军 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 1995年第1期90-94,共5页
紫云英汁液含有10%的糖和2.66%的有机氮化物,稀释成5倍后,以假丝酵母Candida arboro As2.566为生产菌进行单细胞蛋白发酵,通过单因素搜索和正交试验对发酵工艺进行了优化,结果表明:较优培养基为初糖2.5%、酵母粉0.15%、(KH)_2PO_40.... 紫云英汁液含有10%的糖和2.66%的有机氮化物,稀释成5倍后,以假丝酵母Candida arboro As2.566为生产菌进行单细胞蛋白发酵,通过单因素搜索和正交试验对发酵工艺进行了优化,结果表明:较优培养基为初糖2.5%、酵母粉0.15%、(KH)_2PO_40.2%、MgSO_4 0.05%,初始pH值=5,发酵温度30℃,接种量5%。在2L发酵罐中验证,酵母浓度最高达10.53g干重/L,基质生长得率为0.522g菌体/g基质,基质转化率为81%。本研究对于高糖植物的生物量利用具有较重要的意义。 展开更多
关键词 紫云英汁液 单细胞蛋白 发酵 阿保利假丝酵母
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应用单克隆抗体检测大麦黄花叶病毒
14
作者 马红 赵小立 +3 位作者 陈丹 徐阿炳 黄纯农 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期309-312,共4页
作者应用已建立的大麦黄花叶病毒(BaYMV)的4F_(10)单克隆抗体杂交瘤细胞株,经小白鼠腹水生产单克隆抗体,用过碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶标记的酶标单克隆抗体。并由此建立了检测大麦黄花叶病毒的标准的双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-... 作者应用已建立的大麦黄花叶病毒(BaYMV)的4F_(10)单克隆抗体杂交瘤细胞株,经小白鼠腹水生产单克隆抗体,用过碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶标记的酶标单克隆抗体。并由此建立了检测大麦黄花叶病毒的标准的双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)。其检测提纯病毒的灵敏度为3.0μg/ml左右,感病大麦叶片汁液的最大稀释度为1:2560,病茎稀释度为1:160。对采自我国7个主要BaYMV发病区感病的样品进行了检测,绝大多数均显示强阳性,只有宝山样品例外。本项试验为BaYMV诊断的标准试剂盒的建立进行了有益的尝试。 展开更多
关键词 大麦 黄花叶病毒 单克隆抗体 酶联免疫吸附法
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大麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备
15
作者 赵小立 马红 +2 位作者 徐阿炳 黄纯农 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期401-404,共4页
大麦黄花叶病毒(Barley yellow mosaic virus,BaYMV)广泛分布于西欧、日本和我国长江中下游和东部沿海地区,严重危害了大麦生产,并呈现出不断蔓延扩大的趋势。该病毒经土壤禾谷多粘菌介体感染大麦后,病毒繁殖发病的状况,易受到大麦品种... 大麦黄花叶病毒(Barley yellow mosaic virus,BaYMV)广泛分布于西欧、日本和我国长江中下游和东部沿海地区,严重危害了大麦生产,并呈现出不断蔓延扩大的趋势。该病毒经土壤禾谷多粘菌介体感染大麦后,病毒繁殖发病的状况,易受到大麦品种不同、环境温湿度等因素的影响,发病程度的差异很大,而且还发现带毒隐症的大麦品种,使大麦抗源筛选和大麦抗性品种的选育工作受到严重干扰,因此迫切需要建立一种快速、灵敏和准确的检测方法。目前,比较理想的方法是ELISA等免疫学技术。 展开更多
关键词 大麦 黄花叶病毒 单克隆抗体 制备
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磷酸纤维素法分离纯化人绒毛膜促性腺激素
16
作者 贺筱蓉 +2 位作者 刘惠宾 明镇寰 武蓉珍 《杭州大学学报(自然科学版)》 CSCD 1994年第1期87-91,共5页
高纯度人绒毛膜促佐腺激素(HCG)的制备方法已有许多报道,通常都采用DEAE-纤维素离子交换层析法和磊胶过滤法反复槽制,价格昂贵.我们采用价格低廉的磷酸纤维赐作为寓子交换剂,宋代沓DEAE-纤维素,对具有历-20iu/mp生物效价的HC... 高纯度人绒毛膜促佐腺激素(HCG)的制备方法已有许多报道,通常都采用DEAE-纤维素离子交换层析法和磊胶过滤法反复槽制,价格昂贵.我们采用价格低廉的磷酸纤维赐作为寓子交换剂,宋代沓DEAE-纤维素,对具有历-20iu/mp生物效价的HCG粗品进行纯化,纯化后的HCG溶液,其紫外扫描图谱(220—300urn)与典型的蛋白质扫措图谱一致J经聚丙烯醉胺凝胶电泳分析,可得一条清楚的蛋白质条带;SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳分析,可见两条清晰的蛋白质色带. 展开更多
关键词 促性腺激素 磷酸纤维素 分离 HCG
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含蚕豆核酮糖1,5-二磷酸羧酶化/加氧酶大亚基基因的重组质粒物理图谱的构建 被引量:1
17
作者 李加 陈擎苍 +3 位作者 张笑敏 费承伟 唐愫 《杭州大学学报(自然科学版)》 CSCD 1990年第3期333-337,共5页
pVFB33为含蚕豆叶绿体核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因的克隆.本实验采用碱变性法,提取、分离和纯化了pVFB33质粒DNA,并利用几种限制性内切酶酶解,构建了pVFB33质粒DNA的物理图谱,同时,对实验结果进行了分析讨论.
关键词 PVFB33 重组DNA 物理图谱
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大麦感染黄花叶病毒后过氧化物酶、酯酶同工酶的变化
18
作者 张秋波 钟英 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期294-294,312,共2页
大麦黄花叶病毒(BYMV)是一种多粘菌介体传播的土传病毒,筛选抗病品种及建立简便有效的检测方法是选育工作中急需解决的问题。利用等电聚焦凝胶电泳技术分析同工酶的变化,可为育种学家提供生化分析参考。
关键词 大麦 黄花叶病毒 酯酶 同功酶
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复合酶制剂饲养罗曼种鸡试验 被引量:1
19
作者 李永泉 赵小立 +4 位作者 贺筱蓉 吴宗球 林正乾 林夏方 《饲料研究》 CAS 北大核心 1993年第11期10-11,共2页
台酶01复合酶制剂是由杭州大学生物研究所研制,浙江省温岭泽国生化制品厂生产的一种含高单位酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、糖化酶的新型饲料添加剂,具有提高饲料转化率,抑制畜禽肠道病原菌繁殖、促进生长的作用。为了验证其效能,我们... 台酶01复合酶制剂是由杭州大学生物研究所研制,浙江省温岭泽国生化制品厂生产的一种含高单位酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、糖化酶的新型饲料添加剂,具有提高饲料转化率,抑制畜禽肠道病原菌繁殖、促进生长的作用。为了验证其效能,我们于1992年10月至11月在浙江省温岭城北综合养殖场进行了为期36天的饲养罗曼鸡试验。 展开更多
关键词 种鸡 饲料添加剂 复合酶制剂
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含水稻rbcL重组质粒限制图谱的构建
20
作者 朱俊 《杭州大学学报(自然科学版)》 CSCD 1995年第4期409-413,共5页
从水稻叶绿体基因文库中挑选合rbcL基因的3号克隆,采用大量煮沸法,分离纯化了质粒DNA,利用限制性核酸内切酶BamH I、 Sma I、Xhol和Cta I进行单酶或双酶切,在BamH I限制图谱的基础上构建了几种限制酶的限制图谱.
关键词 水稻 RBCL 限制图谱 DNA 限制酶
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