目的对正常早孕妇女血清中早孕因子(EPF)的分离纯化过程进行优化,以提高EPF的回收率。方法依次采用DEAEFast Flow离子交换色谱和Heparin Fast Flow亲和色谱,从妊娠12周内的正常早孕妇女混合血清中提纯EPF,采用活性玫瑰花结抑制试验(Ea-R...目的对正常早孕妇女血清中早孕因子(EPF)的分离纯化过程进行优化,以提高EPF的回收率。方法依次采用DEAEFast Flow离子交换色谱和Heparin Fast Flow亲和色谱,从妊娠12周内的正常早孕妇女混合血清中提纯EPF,采用活性玫瑰花结抑制试验(Ea-RIT)检测各阶段产物的EPF活性,SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳鉴定纯化物并测定其相对分子质量,用Western blot鉴定其特异性。结果经Ea-RIT检测后,DEAE Fast Flow离子交换色谱所现2峰中DE-Ⅰ峰为EPF活性峰,HeparinFast Flow亲和色谱所现2峰中H-Ⅱ峰为EPF活性峰。H-Ⅱ峰收集液经SDS-PAGE电泳,结果显示为1条相对分子质量为38 100的蛋白带,Western blot分析表明抗体与抗原匹配性良好。经检测其蛋白含量为0.615 mg,回收率为0.034%,与传统分离纯化四步法的回收率相比明显提高。结论本优化方法对于提纯孕血清中的EPF是可行的,大大提高了纯化效率。展开更多
尘螨是最常见、最主要的过敏性疾病变应原。螨体中最主要的致敏成分是1组和2组变应原(Der1、Der2)。酶联免疫吸附测定(ELISA)是检测尘螨变应原含量应用最广泛的方法.但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道。本研究用重组...尘螨是最常见、最主要的过敏性疾病变应原。螨体中最主要的致敏成分是1组和2组变应原(Der1、Der2)。酶联免疫吸附测定(ELISA)是检测尘螨变应原含量应用最广泛的方法.但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道。本研究用重组粉尘螨2组Der f 2(rDer f 2).制备免疫血清,建立一种以辣根过氧化物酶系统为基础的双抗体夹心ELISA,以快速检测Der f2.现报告如下。展开更多
文摘尘螨是最常见、最主要的过敏性疾病变应原。螨体中最主要的致敏成分是1组和2组变应原(Der1、Der2)。酶联免疫吸附测定(ELISA)是检测尘螨变应原含量应用最广泛的方法.但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道。本研究用重组粉尘螨2组Der f 2(rDer f 2).制备免疫血清,建立一种以辣根过氧化物酶系统为基础的双抗体夹心ELISA,以快速检测Der f2.现报告如下。