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成都永丰乡南郊村蔬菜地Cu,Pb污染调查与评价 被引量：1
1
作者 杨定清 纪晓奇 《四川环境》 北大核心 1993年第4期59-60,共2页
本文讨论了工业排放含Cu,Pb废水对永车乡南郊村蔬菜地的影响。结果表明:调查地土壤已遭较严重的Cu,Pb合污染。土地壤Cu含量为77.56～1682mg/kg,为对照点的1.6～34倍,所采16个土样中有15个点的土壤Cu含量超过国家标准(150mg/kg)。土壤中P... 本文讨论了工业排放含Cu,Pb废水对永车乡南郊村蔬菜地的影响。结果表明:调查地土壤已遭较严重的Cu,Pb合污染。土地壤Cu含量为77.56～1682mg/kg,为对照点的1.6～34倍,所采16个土样中有15个点的土壤Cu含量超过国家标准(150mg/kg)。土壤中Pb含量为40.5～416mg/kg,为对照点的1.1～11倍。生长于其上的蔬菜已不同程度的受到Cu,Pb的污染。 展开更多
关键词 永丰乡 蔬菜 土壤 铜 铅 污染 调查 评价
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融合表达氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE合成L-别异亮氨酸
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作者 纪晓奇 李青连 鞠建华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期2006-2013,共8页
【背景】L-异亮氨酸(L-isoleucine,L-Ile)和L-别异亮氨酸(L-allo-isoleucine,L-allo-Ile)是自然界中广泛存在的一对同分异构体。抗感染抗生素Desotamides结构中含L-别异亮氨酸结构单元,其生物合成途径中的氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE可... 【背景】L-异亮氨酸(L-isoleucine,L-Ile)和L-别异亮氨酸(L-allo-isoleucine,L-allo-Ile)是自然界中广泛存在的一对同分异构体。抗感染抗生素Desotamides结构中含L-别异亮氨酸结构单元,其生物合成途径中的氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE可以协作催化L-异亮氨酸和L-别异亮氨酸相互转化。【目的】通过理性设计,使氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE融合表达,研究融合蛋白DsaDE催化异亮氨酸和别异亮氨酸相互转化的功能。【方法】利用PCR分别扩增dsaE基因编码区DNA片段、以及含dsaD基因编码区和114个碱基接头序列的DNA片段dsaD-linker,利用酶切位点KpnI将dsaE和dsaD-linker相连,形成das DE重组序列,并克隆至pET28a(+)中,将重组质粒pET28a-dsaDE转化至Escherichia coli BL21(DE3)中进行融合表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白DsaDE;分别以L-异亮氨酸和L-别异亮氨酸为底物进行融合蛋白的体外酶活性检测,利用高效液相色谱对酶反应产物进行分析。【结果】PCR验证、酶切验证以及测序结果证明pET28a-dsaDE重组载体具有正确序列;N-末端和C-末端融合6个组氨酸标签的融合蛋白DsaDE在E. coli BL21(DE3)中获得可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析法一步纯化获得纯度约95%的融合蛋白,纯化的融合蛋白DsaDE具有较好的活性,能够催化L-isoleucine和L-allo-isoleucine间的相互转化。【结论】氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE成功融合表达,经一步Ni-NTA亲和层析法纯化即可获得纯度较高的融合蛋白,融合蛋白同时具有氨基转移酶和异构酶的活性,为进一步研究L-别异亮氨酸的工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 氨基转移酶 异构酶 融合蛋白 异亮氨酸
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