趸船岸电系统用抗扭耐磨光电复合充电电缆研制

1

作者 张冬冬 纪坡 《光纤与电缆及其应用技术》 2023年第6期23-25,32,共4页

岸电供电技术可解决靠港船舶靠岸后自身辅机发电带来的环境污染和噪声危害。岸电系统用充电电缆是岸电供电系统的必要组成部分。通过对电缆的各组成部件(光缆单元、动力线芯、地线芯、控制单元、内护套、外护套、抗扭加强层及中心马鞍... 岸电供电技术可解决靠港船舶靠岸后自身辅机发电带来的环境污染和噪声危害。岸电系统用充电电缆是岸电供电系统的必要组成部分。通过对电缆的各组成部件(光缆单元、动力线芯、地线芯、控制单元、内护套、外护套、抗扭加强层及中心马鞍形垫芯)结构设计、材料选择、制造工艺控制、试验项目检测,成功研制了趸船岸电系统用抗扭耐磨光电复合充电电缆。经过性能检测和实际现场应用,该电缆可在频繁移动和反复拔插工况下表现出较佳的抗扭性和耐磨性,相关性能指标完全满足使用要求,其30 a使用寿命处于国内外同类产品领先水平。 展开更多

关键词 光电复合缆 充电电缆 岸电供电系统 抗扭性 耐磨性

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山羊精子结合和内化外源DNA的特征及影响因素 被引量：8

2

作者 叶华虎 刘彦 +5 位作者 刘珠果 宋维平 卢建申 周艳荣 绳纪坡 邓继先 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期659-664,共6页

外源DNA与精子相互作用后的定位及内化率是精子载体法制备转基因动物的关键环节。实验以标记的DNA片段为示踪材料，就精子与外源DNA相互作用的基本特征及影响因素进行了研究。结果表明：山羊精子可自发性结合外源DNA，外源DNA最初结合... 外源DNA与精子相互作用后的定位及内化率是精子载体法制备转基因动物的关键环节。实验以标记的DNA片段为示踪材料，就精子与外源DNA相互作用的基本特征及影响因素进行了研究。结果表明：山羊精子可自发性结合外源DNA，外源DNA最初结合于顶体后区质膜外表面，随后部分内化进入细胞内。精子对外源DNA的结合和内化能力随供体的不同而差异明显，在实验所检查的35只公羊中，结合率（DNaseⅠ消化前）波动于4．6％～62．4％，内化率（DNaseⅠ消化后）波动于2．1％～53．8％，个体间差异显著（P〈0．01）。对于同一供体的精子而言，阻止DNA结合的最主要因素是精浆，与射出的原精液相比，洗涤后精子的结合率和内化率分别提高了3倍和5倍；其次精子获能也将导致结合率和内化率降低（P〈0．01）。死精子不能完成外源DNA的内化过程，但反复冻融导致质膜破裂的死精子具有更高的结合率，而且阳性率与动物个体无关。上述结果提示，筛选合适的精子供体，采用优化的转染处理方法是提高精子载体方法效率的前提和保证。 展开更多

关键词 外源DNA 结合 内化 精子 山羊

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肝癌细胞特异性结合抗体的筛选及序列测定 被引量：5

3

作者 李赏 胡宝成 +1 位作者 绳纪坡 黄培堂 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第B06期20-21,25,共3页

目的　通过噬菌体展示技术筛选与肝癌细胞特异性结合的抗体。方法　用肝癌细胞系SMMC772 1免疫小鼠 ,提取脾细胞总RNA ,构建单链抗体库 ,从中筛选特异性结合的抗体。结果　构建了一个库容量为 2× 10 5的单链抗体库 ,并筛选到 1个... 目的　通过噬菌体展示技术筛选与肝癌细胞特异性结合的抗体。方法　用肝癌细胞系SMMC772 1免疫小鼠 ,提取脾细胞总RNA ,构建单链抗体库 ,从中筛选特异性结合的抗体。结果　构建了一个库容量为 2× 10 5的单链抗体库 ,并筛选到 1个与肝癌细胞系HepG2特异性结合的噬菌体 单链抗体。此单链抗体与HepG2细胞结合滴度比正常肝细胞低 12 5倍以上。结论　本研究成功构建了单链抗体库并筛选到与靶细胞特异性结合的噬菌体 单链抗体。 展开更多

关键词 肝癌细胞 特异性结合抗体 筛选 序列测定 噬菌体展示 单链抗体

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AA12(LG21)可溶性表达研究及抗体制备 被引量：6

4

作者 刘爽 胡宝成 +1 位作者 绳纪坡 田媛 《生物技术通讯》 CAS 2003年第2期105-108,共4页

用PCR技术从AA12基因上扩增出LG21(100～498bp)片段,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)上;转化大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达研究,使其在大肠杆菌中能够可溶性表达,优化表达条件获得表达量比较高的LG21蛋白;用镍离子螯和柱(Ni-NTA)纯化L... 用PCR技术从AA12基因上扩增出LG21(100～498bp)片段,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)上;转化大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达研究,使其在大肠杆菌中能够可溶性表达,优化表达条件获得表达量比较高的LG21蛋白;用镍离子螯和柱(Ni-NTA)纯化LG21蛋白,获得纯度较高的蛋白。用纯蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,ELISA结果显示效价可达到1∶163840;Western结果表明该抗体可以与LG21蛋白特异结合;为进行免疫共沉淀实验,验证Chk1蛋白与AA12蛋白在体内的相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 AA12蛋白 LG21蛋白 原核表达 多克隆抗体 Chkl蛋白 A1—5细胞 表型 差异表达基因 G2期延迟 抗辐射性 可溶性表达 细胞周期 PCR技术

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脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用的鉴定 被引量：3

5

作者 于芳 绳纪坡 +4 位作者 张勇 张鸿声 高宁 张宏达 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2008年第3期324-327,共4页

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并... 目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并用GST沉降技术研究Fhit与RPA是否在体外存在相互作用;在表达Fhit的人细胞中用免疫共沉淀技术分析Fhit与RPA是否在体内存在相互作用,同时用免疫荧光染色方法研究Fhit与RPA在细胞内是否可以共定位。结果:通过免疫共沉淀、免疫荧光染色及GST沉降技术,确定了Fhit与RPA在体内及体外均可以相互作用。结论:确定了Fhit与RPA之间存在相互作用,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。 展开更多

关键词 脆性组氨酸三联体 复制蛋白A 蛋白质相互作用

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脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用关键氨基酸残基的鉴定 被引量：3

6

作者 张勇 于芳 +4 位作者 张宏达 绳纪坡 高宁 张鸿声 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期799-802,共4页

目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,在确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用的基础上鉴定Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:构建一系列Fhit缺失突变体基因Fhit1～F... 目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,在确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用的基础上鉴定Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:构建一系列Fhit缺失突变体基因Fhit1～Fhit11及6种Fhit点突变体基因,将这些基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达并纯化GST-Fhit1～GST-Fhit11融合蛋白、突变体GST-FhitSIYEEL、GST-FhitIY、GST-FhitEL、GST-FhitF、GST-FhitA,以及GST-FhitD融合蛋白,用GST沉降技术研究Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结果:Fhit蛋白第112～117(SIYEEL)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键区域,而第114(Y)残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结论:确定了Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。 展开更多

关键词 脆性组氨酸三联体 复制蛋白A 蛋白相互作用

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安全的无线传感器网络密钥预分配方案 被引量：4

7

作者 张记 杜小妮 +1 位作者 李旭 林纪坡 《计算机应用》 CSCD 北大核心 2013年第7期1851-1853,1874,共4页

密钥管理是无线传感器网络(WSN)安全的核心问题。基于二元对称多项式的随机密钥预分配方案为节点的通信提供了一种安全机制,但这些方案都存在"t-security"问题,很难抵制节点的捕获攻击。为了更好地解决该问题,提高网络的安全... 密钥管理是无线传感器网络(WSN)安全的核心问题。基于二元对称多项式的随机密钥预分配方案为节点的通信提供了一种安全机制,但这些方案都存在"t-security"问题,很难抵制节点的捕获攻击。为了更好地解决该问题,提高网络的安全阈值及节点的抗捕获能力,采用可转化三元多项式代替二元对称多项式来建立节点间通信,并引入密钥分发节点进行分簇网络密钥分发。同时,由于对节点密钥采用单向Hash函数进行处理,提高了密钥破解难度。分析结果表明,该方案提高了网络的安全性及节点的抗毁性与可扩展性,降低了传感器普通节点的存储与计算开销。 展开更多

关键词 无线传感器网络 可转化三元多项式 HASH函数 分簇 密钥预分配

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特异性肝癌细胞结合单链抗体的筛选及克隆表达 被引量：2

8

作者 李赏 胡宝成 +1 位作者 绳纪坡 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2002年第2期144-147,共4页

用人肝癌细胞系SMMC7721免疫小鼠,提取脾细胞总RNA,构建单链抗体库,从中筛选到1个与人肝癌细胞系HepG2特异性结合的噬菌体-单链抗体。此单链抗体与HepG2细胞结合滴度比正常肝细胞低100倍以上。构建表达质粒pTrx-scFv5-56,单链抗体scFv5... 用人肝癌细胞系SMMC7721免疫小鼠,提取脾细胞总RNA,构建单链抗体库,从中筛选到1个与人肝癌细胞系HepG2特异性结合的噬菌体-单链抗体。此单链抗体与HepG2细胞结合滴度比正常肝细胞低100倍以上。构建表达质粒pTrx-scFv5-56,单链抗体scFv5-56在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地进行了可溶性表达。 展开更多

关键词 噬菌体展示 单链抗体 筛选 表达 人肝癌细胞系

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利用转基因动物模型研究胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在中枢神经系统中的生物学作用 被引量：2

9

作者 绳纪坡 邓继先 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第4期12-16,共5页

胰岛素样生长因子 I(IGF I)是一种多功能性的细胞营养因子 ,在中枢神经系统的发育过程中发挥着重要的作用。近年来 ,针对IGF I在中枢神经系统 (CNS)中的生物学作用开展了大量的研究。综述了利用IGF I及其所属蛋白家族部分成员的转基因... 胰岛素样生长因子 I(IGF I)是一种多功能性的细胞营养因子 ,在中枢神经系统的发育过程中发挥着重要的作用。近年来 ,针对IGF I在中枢神经系统 (CNS)中的生物学作用开展了大量的研究。综述了利用IGF I及其所属蛋白家族部分成员的转基因动物模型研究它们在中枢神经系统中的分布和对中枢神经系统各组成部分生长发育的影响及其临床学上的应用。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子-I IGF-Ⅰ 细胞营养因子 中枢神经系统 转基因动物模型 生物学作用

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新鲜冰冻血浆与红细胞悬液等比例输注对严重创伤出血患者疾病转归的影响 被引量：4

10

作者 蔡纪坡 《医学理论与实践》 2021年第20期3551-3553,共3页

目的:探究新鲜冰冻血浆(FFP)与红细胞悬液(PRBC)等比例输注对严重创伤出血患者疾病转归的影响。方法:选取我院2018年5月—2020年5月严重创伤出血患者93例,均需大量输血,根据FFP与PRBC比例不同分为3组,各31例。观察组采用FFP∶PRBC=1∶1... 目的:探究新鲜冰冻血浆(FFP)与红细胞悬液(PRBC)等比例输注对严重创伤出血患者疾病转归的影响。方法:选取我院2018年5月—2020年5月严重创伤出血患者93例,均需大量输血,根据FFP与PRBC比例不同分为3组,各31例。观察组采用FFP∶PRBC=1∶1,对照A组采用FFP∶PRBC=1∶2,对照B组采用FFP∶PRBC=1∶3。对比3组疾病转归情况、液制品使用情况及输注前、输注后6h凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)]、血清液化糖链抗原-6(KL-6)水平。结果:观察组入住ICU时间、住院时间短于对照A组、对照B组(P<0.05);3组病死率无显著差异(P>0.05);观察组FFP高于对照A组、对照B组,对照A组FFP高于对照B组(P<0.05);3组PRBC、血小板无显著差异(P>0.05);输注后6h观察组PT、TT、APTT短于对照A组、对照B组,FIB高于对照A组、对照B组(P<0.05),且对照A组PT、TT、APTT短于对照B组,FIB高于对照B组(P<0.05);输注后6h观察组血清KL-6水平高于对照A组、对照B组,对照A组血清KL-6水平高于对照B组(P<0.05)。结论:FFP与PRBC等比例输注应用于严重创伤出血患者,可改善凝血功能,促进病情转归,临床可通过监测血清KL-6动态变化指导血液成分的合理选择,以预防输血相关性急性肺损伤。 展开更多

关键词 新鲜冰冻血浆 红细胞悬液 严重创伤出血 疾病转归

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肿瘤-睾丸抗原CT45-5的表达纯化及多克隆抗体的制备 被引量：2

11

作者 张勇 张鸿声 +3 位作者 于芳 绳纪坡 高宁 胡宝成 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2009年第4期333-336,共4页

目的:原核表达、纯化肿瘤-睾丸抗原CT45-5基因,并制备多克隆抗体,以研究其在Fhit特异的信号通路中的作用。方法:设计出特异针对CT45-5的引物,通过RT-PCR扩增出CT45-5的编码基因,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPT... 目的:原核表达、纯化肿瘤-睾丸抗原CT45-5基因,并制备多克隆抗体,以研究其在Fhit特异的信号通路中的作用。方法:设计出特异针对CT45-5的引物,通过RT-PCR扩增出CT45-5的编码基因,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达和纯化了CT45-5,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的CT45-5蛋白。结论:肿瘤-睾丸抗原CT45-5能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究CT45-5的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 肿瘤-睾丸抗原CT45-5 表达纯化 多克隆抗体

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作为肾素-血管紧张素系统调节器和SARS病毒受体的人血管紧张素转换酶2 被引量：1

12

作者 林福玉 绳纪坡 邓继先 《生物技术通讯》 CAS 2005年第2期176-179,共4页

人血管紧张素转换酶2(ACE2)是目前已知的惟一的人血管紧张素转换酶(ACE)的同源物,是一种新型的金属羧肽酶,很多特性与ACE截然不同。ACE2在肾素-血管紧张素系统(RAS)中具有独特的作用,调节心脏功能和机体血压。最近ACE2被鉴定为SARS病毒... 人血管紧张素转换酶2(ACE2)是目前已知的惟一的人血管紧张素转换酶(ACE)的同源物,是一种新型的金属羧肽酶,很多特性与ACE截然不同。ACE2在肾素-血管紧张素系统(RAS)中具有独特的作用,调节心脏功能和机体血压。最近ACE2被鉴定为SARS病毒的功能受体。ACE2已经成为目前药物研发的新靶点。对ACE2的认识才刚刚开始,有待进一步深入研究。 展开更多

关键词 人血管紧张素转换酶2 肾素-血管紧张素系统 SARS病毒 功能性受体 结构 调节功能 药物靶标

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中枢神经系统特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠 被引量：2

13

作者 绳纪坡 侯宁 +2 位作者 程萱 杨晓 邓继先 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1337-1343,共7页

利用从 12 9sv小鼠基因组文库克隆得到的 1.8kb的胶质细胞原纤维酸性蛋白 (GFAP)基因的 5′端调控序列 ,构建了含有 2个 β 珠蛋白绝缘子、GFAP 5′端调控区、Cre基因和人生长激素基因 (hGH)polyA的转基因载体pGFAP Cre hGH。以显微注... 利用从 12 9sv小鼠基因组文库克隆得到的 1.8kb的胶质细胞原纤维酸性蛋白 (GFAP)基因的 5′端调控序列 ,构建了含有 2个 β 珠蛋白绝缘子、GFAP 5′端调控区、Cre基因和人生长激素基因 (hGH)polyA的转基因载体pGFAP Cre hGH。以显微注射的方法将 7 6kb的转基因片段 pGFAP Cre hGH引入 191枚小鼠基因组受精卵 ,其中 176枚分别移植至 8只假孕母鼠的输卵管中使其发育 ,共获得子代小鼠 2 5只。经PCR和Southern杂交鉴定其中 7只小鼠基因组上整合有Cre基因 ,整合率为 2 8%。用整合有Cre基因的转基因小鼠与基因组上整合有LoxP位点和LacZ表达框的ROSA2 6鼠杂交 ,以检测Cre酶的活性、组织特异性及其介导的两个LoxP位点间的重组。LacZ染色结果表明 ,GFAP Cre转基因小鼠只在中枢神经系统中表达Cre重组酶并能在体内成功介导LoxP位点间的重组。 展开更多

关键词 CRE 转基因小鼠 中枢神经系统 组织特异性表达 LacZ染色

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肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定 被引量：1

14

作者 柯波 林宇翔 +4 位作者 绳纪坡 于芳 罗维 马祖兴 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2012年第2期180-182,共3页

目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果。方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5... 目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果。方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果。结果:构建了2个CT45-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制。结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45-5功能相关的基因研究奠定了基础。 展开更多

关键词 肿瘤睾丸抗原CT45家族5号成员基因 小干扰RNA 脆性组氨酸三联体 表达载体

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利用体内噬菌体展示技术进行人源肿瘤细胞特异性结合肽的筛选 被引量：1

15

作者 绳纪坡 李赏 胡宝成 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第2期96-98,102,共4页

目的 :寻找肿瘤细胞特异性结合肽 ,为肿瘤诊断试剂及肿瘤药物的研制奠定基础。方法 :用培养的人源肿瘤细胞使裸鼠致瘤 ,将随机肽库从裸鼠的尾静脉注射到裸鼠体内 ,循环数分钟后取肿瘤组织及正常对照组织进行噬菌体筛选 ;经过 2～ 3轮体... 目的 :寻找肿瘤细胞特异性结合肽 ,为肿瘤诊断试剂及肿瘤药物的研制奠定基础。方法 :用培养的人源肿瘤细胞使裸鼠致瘤 ,将随机肽库从裸鼠的尾静脉注射到裸鼠体内 ,循环数分钟后取肿瘤组织及正常对照组织进行噬菌体筛选 ;经过 2～ 3轮体内筛选 ,获得在肿瘤组织中富集的肽段。结果与结论 :利用体内噬菌体展示技术 ,结合人源肿瘤细胞 (SMMC_772 1和PLA_80 1D)裸鼠致瘤模型 ,从随机十二肽库中成功地筛选到可以较高特异性地结合SMMC_772 1肿瘤细胞或肿瘤血管的噬菌体多肽 ,通过对噬菌体单克隆进行测序 ,初步确定了几种可能的多肽基序(motif)。 展开更多

关键词 肿瘤细胞 结合肽 体内噬菌体展示技术 肽库 多肽基序

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穿膜肽-LacI HPM载体的构建及其DNA结合活性测定 被引量：1

16

作者 绳纪坡 张宏达 +2 位作者 于芳 黄君健 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2013年第6期778-781,共4页

目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,构建新型基因转导载体。方法:PCR扩增LacI、LacI基因前头肽序列、前头肽序列突变体、TAT序列的编码基因,构建前头肽序列突变体和TAT的原核表达载体... 目的:借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体(LacI HPM)高亲和力结合DNA的特性,构建新型基因转导载体。方法:PCR扩增LacI、LacI基因前头肽序列、前头肽序列突变体、TAT序列的编码基因,构建前头肽序列突变体和TAT的原核表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,在缓冲液中氧化获得TATLacI HPM二聚体并浓缩,PCR检测二聚体融合蛋白与质粒的体外结合能力。结果:获得了pET-28a(+)-LacI HPM及pET-28a(+)-TAT-LacI HPM表达质粒,表达纯化并获得二聚化融合蛋白,体外结合实验确定TAT-LacI HPM二聚体融合蛋白与检测质粒DNA具有特异的高亲和力结合活性。结论:构建了穿膜肽TAT-LacI HPM,为进一步研究其作为新型DNA转运载体的可行性奠定了基础。 展开更多

关键词 穿膜肽 LACI LacI前头肽突变体 DNA结合活性

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大鼠丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制剂B2的表达、纯化及抗体制备 被引量：1

17

作者 马祖兴 高宁 +3 位作者 于芳 林宇翔 绳纪坡 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2011年第1期1-5,共5页

目的:原核表达、纯化大鼠丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制剂B2(SERPINB2),并制备其多克隆抗体。方法:设计扩增大鼠Serpinb2全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并... 目的:原核表达、纯化大鼠丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制剂B2(SERPINB2),并制备其多克隆抗体。方法:设计扩增大鼠Serpinb2全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达了大鼠Serpinb2全长基因,纯化了SERPINB2蛋白,并获得了抗SERPINB2的多克隆抗体,抗体效价达到1:25600,Western印迹结果显示该抗体能特异识别原核及真核细胞表达的SERPINB2。结论:SERPINB2能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究SERPINB2的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制剂B2 表达 纯化 多克隆抗体

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人细胞外基质磷酸糖蛋白MEPE的表达纯化及抗体制备 被引量：1

18

作者 马祖兴 高宁 +5 位作者 绳纪坡 于芳 林宇翔 罗维 柯波 胡宝成 《军事医学》 CAS 2011年第1期39-43,共5页

目的原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体。方法设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠... 目的原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体。方法设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果原核表达了人Mepe全长基因,纯化了MEPE蛋白,并获得了抗MEPE的多克隆抗体,抗体效价达到1∶25 600,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的MEPE蛋白。结论 MEPE蛋白能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 细胞外基质磷酸糖蛋白 表达纯化 多克隆抗体

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人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析 被引量：1

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作者 张鸿声 高宁 +4 位作者 绳纪坡 于芳 张宏达 张勇 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期787-790,共4页

目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂... 目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果:在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论:获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。 展开更多

关键词 MEPE/OF45基因 克隆 序列分析 亚胺环己酮 HELA细胞

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稳定表达人Fhit突变体细胞系的建立 被引量：1

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作者 于芳 绳纪坡 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2012年第2期183-185,共3页

目的:构建人脆性组氨酸三联体(Fhit)突变体真核表达载体并建立稳定表达人Fhit突变体的细胞株,以便进一步研究Fhit与复制蛋白A(RPA)在体内的相互作用。方法:将3种人Fhit突变体cDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建人Fhit突... 目的:构建人脆性组氨酸三联体(Fhit)突变体真核表达载体并建立稳定表达人Fhit突变体的细胞株,以便进一步研究Fhit与复制蛋白A(RPA)在体内的相互作用。方法:将3种人Fhit突变体cDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建人Fhit突变体真核表达载体,转染HeLa细胞,经潮霉素B加压筛选阳性克隆,用Western印迹鉴定稳定表达Fhit突变体蛋白FhitA、FhitD和FhitF的阳性细胞株。结果:经PCR鉴定及序列分析,Fhit突变体基因真核表达载体pREP10/FhitA/D/F-HA构建正确,转染人HeLa细胞,筛选出Fhit突变体表达较高的细胞株。结论:建立了3株稳定表达Fhit突变体的细胞株HeLa-FhitA/D/F,为研究Fhit与RPA的相互作用在DNA损伤应答中发挥的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 脆性组氨酸三联体 突变体 稳定表达细胞系

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