[目的]寻求操作简单、高效的苜蓿二胺氧化酶(DAO)纯化方法。[方法]苜蓿种子黑暗培养3 d,幼苗依次经硫酸铵沉淀,葡聚糖凝胶G-100(sephadex G-100),DEAE-纤维素以及羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)层析分离纯化,最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳...[目的]寻求操作简单、高效的苜蓿二胺氧化酶(DAO)纯化方法。[方法]苜蓿种子黑暗培养3 d,幼苗依次经硫酸铵沉淀,葡聚糖凝胶G-100(sephadex G-100),DEAE-纤维素以及羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)层析分离纯化,最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]最佳分段盐析的硫酸铵饱和度为20%~50%。经一系列层析分离后酶液比活力达84.67 U/mg,回收率为26%。经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现1个蛋白质条带,相对分子质量约为110 k Da。而在变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现2个蛋白质条带,相对分子质量约为55和40 k Da。[结论]苜蓿DAO是由2个大小不同的亚基组成的异源二聚体。展开更多
文摘[目的]寻求操作简单、高效的苜蓿二胺氧化酶(DAO)纯化方法。[方法]苜蓿种子黑暗培养3 d,幼苗依次经硫酸铵沉淀,葡聚糖凝胶G-100(sephadex G-100),DEAE-纤维素以及羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)层析分离纯化,最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]最佳分段盐析的硫酸铵饱和度为20%~50%。经一系列层析分离后酶液比活力达84.67 U/mg,回收率为26%。经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现1个蛋白质条带,相对分子质量约为110 k Da。而在变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现2个蛋白质条带,相对分子质量约为55和40 k Da。[结论]苜蓿DAO是由2个大小不同的亚基组成的异源二聚体。
