基质金属蛋白酶与椎间盘退变研究的新进展 被引量：13

1

作者 綦惠 赵丹慧 田伟 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期69-72,共4页

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases．MMPs）是结构中含有金属离子Zn2＋、Ca2＋的蛋白水解酶，是分解细胞外基质（extracellularrnatrix， ECM）的蛋白酶中最重要的一类．可以降解除多糖外几乎所有ECM成分。

关键词 基质金属蛋白酶 椎间盘退变 蛋白水解酶 细胞外基质 金属离子 CA2+ ECM

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富血小板血浆复合再生支架修复兔骨软骨缺损 被引量：9

2

作者 綦惠 靳少锋 +4 位作者 陈磊 景金珠 王猛 黎广平 孙磊 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期740-745,共6页

[目的]观察富血小板血浆(PRP)复合支架修复新西兰兔膝关节骨软骨缺损的效果。[方法]抽取成年新西兰兔静脉血,两次离心后获取PRP。采用10%Ca Cl2激活其中的血小板,ELISA法检测激活前后TGF-β的浓度。成年新西兰兔在股骨内髁软骨面上制备... [目的]观察富血小板血浆(PRP)复合支架修复新西兰兔膝关节骨软骨缺损的效果。[方法]抽取成年新西兰兔静脉血,两次离心后获取PRP。采用10%Ca Cl2激活其中的血小板,ELISA法检测激活前后TGF-β的浓度。成年新西兰兔在股骨内髁软骨面上制备骨软骨缺损模型。按缺损置入处理,将动物分为三组,分别是空白对照组、单纯支架组和PRP-支架组。术后6、12周取材,进行大体观察和国际软骨修复协会(ICRS)大体形态评分,此外,采用HE染色和番红O-固绿染色进行组织观察评估。[结果]PRP激活后TGF-β的浓度显著高于未激活时(P<0.05)。术后6周,单纯支架组与PRP-支架组的ICRS评分显著高于空白对照组(P<0.05);术后12周,单纯支架组与PRP-支架组的ICRS评分仍显著高于空白对照组(P<0.05),且PRP-支架组的评分显著高于单纯支架组(P<0.05)。HE染色与番红O-固绿染色表明,单纯支架组和PRP-支架组的修复明显优于空白对照组,且PRP-支架组的修复较单纯支架组更优。[结论]单纯支架能够促进兔膝关节骨软骨缺损的修复,但修复效果有限。激活后的PRP能够明显提高支架的作用,PRP-支架是此动物实验中最佳的骨软骨修复方式。 展开更多

关键词 骨软骨缺损 富血小板血浆 支架

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脱细胞真皮基质制备及其生物相容性研究 被引量：9

3

作者 綦惠 杰永生 +3 位作者 陈磊 江建 高新生 孙磊 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期768-772,共5页

目的制备脱细胞真皮基质,检测其细胞及组织相容性,探讨其作为软骨组织工程支架材料的可行性。方法取新生小牛背部真皮组织,以0.5%SDS溶液水平振荡脱细胞,0.5%胰蛋白酶行胶原纤维结构重塑,甲醛浸泡进行交联,0.5%硫酸软骨素溶液中超声振... 目的制备脱细胞真皮基质,检测其细胞及组织相容性,探讨其作为软骨组织工程支架材料的可行性。方法取新生小牛背部真皮组织,以0.5%SDS溶液水平振荡脱细胞,0.5%胰蛋白酶行胶原纤维结构重塑,甲醛浸泡进行交联,0.5%硫酸软骨素溶液中超声振荡进行表面修饰,制备脱细胞真皮基质支架材料。乙醇排除法检测结构重塑前后材料孔隙率变化;MTT法检测材料细胞毒性;将材料植入成年SD大鼠背部皮下,评价组织相容性。采用以3∶7比例共培养的第2代新西兰大白兔软骨细胞与骨髓基质细胞作为种子细胞,种植于脱细胞真皮基质支架材料(实验组),48 h后扫描电镜观察细胞黏附情况;RT-PCR和Western blot检测接种于支架的种子细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达,并与单纯培养的种子细胞(对照组)进行比较。结果经0.5%胰蛋白酶溶液结构重塑后的脱细胞真皮基质支架材料表面光滑、孔隙均匀;孔隙率达85.4%±2.8%,显著高于重塑前的支架(72.8%±5.8%)(t=—4.384,P=0.005);细胞毒性检测为1级,合格;埋植于大鼠背部皮下后,随时间延长,组织炎性细胞数呈减少趋势(P<0.05)。种子细胞接种后,扫描电镜示大量细胞贴附于支架上,细胞形态饱满,可见表面微绒毛和分泌现象。RT-PCR与Western blot检测结果示,实验组和对照组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达量比较,差异均无统计学意义(t=1.265,P=0.235;t=0.935,P=0.372)。结论经脱细胞-结构重塑-交联-表面修饰制备的脱细胞真皮基质结构良好,种子细胞能大量黏附于支架材料上,细胞Ⅱ型胶原表达水平无明显改变,有望作为软骨组织工程支架材料。 展开更多

关键词 软骨组织工程 脱细胞真皮基质 支架材料 Ⅱ型胶原

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联合应用软骨再生支架与突变型HIF-1α修饰BMSCs分泌的外泌体对晚期软骨缺损修复的促进作用 被引量：8

4

作者 田大川 李海乐 +4 位作者 肖大伟 周山健 苏永蔚 刘丹平 綦惠 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期216-222,共7页

目的:探讨突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的外泌体对软骨细胞的保护作用,阐明其联合软骨再生支架促进晚期软骨缺损修复的可能机制。方法:采用超速离心法从野生型HIF-1α和突变型HIF-1α修饰的BMSCs中... 目的:探讨突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的外泌体对软骨细胞的保护作用,阐明其联合软骨再生支架促进晚期软骨缺损修复的可能机制。方法:采用超速离心法从野生型HIF-1α和突变型HIF-1α修饰的BMSCs中分别提取外泌体(BMSCs-ExoWT与BMSCs-ExoMU),同时对其进行鉴定。在体外,采用白细胞介素1β(IL-1β)诱导软骨细胞发生炎症反应,分别将等量PBS、BMSCs-ExoWT(80mg·L-1)和BMSCs-ExoMU(80mg·L-1)分别与炎症反应下的软骨细胞共培养,实验分为空白组、炎症组、BMSCs-ExoWT组和BMSCs-ExoMU组,利用Hoechst33342染色检测各组软骨细胞凋亡小体数目;应用Western blotting法检测各组软骨细胞中AKT/p-AKT、ERK/p-ERK和p38/p-p38表达水平。12只新西兰兔随机分为4组,建立兔膝关节软骨缺损模型,分别将等量的生理盐水、支架+生理盐水、支架+BMSCs-ExoWT和支架+BMSCs-ExoMU作用于4组兔软骨缺损处。术后6周取材,通过大体观察、苏木素-伊红(HE)染色和蕃红O-固绿染色观察和比较各组软骨缺损的修复效果。结果:成功提取并鉴定BMSCs-ExoWT与BMSCs-ExoMU,电镜观察外泌体形态为近圆形,直径为40~100nm;Western blotting法显示两者分别表达特异性蛋白CD63和CD81。在体外实验中,炎症环境下BMSCs-ExoMU组软骨细胞凋亡小体数目低于炎症组和BMSCs-ExoWT组(P<0.01);Western blotting法,BMSCs-ExoMU组和BMSCs-ExoWT组软骨细胞中p-ERK1和p-ERK2水平低于炎症组(P<0.05),p-AKT和p-p38水平高于炎症组(P<0.05);且BMSCs-ExoMU的作用强于BMSCs-ExoWT(P<0.05)。在兔膝关节晚期软骨缺损模型中,支架+BMSCs-ExoMU组缺损处修复效果优于空白组、支架组和支架+BMSCs-ExoWT组。结论:软骨支架与BMSCs-ExoMU共同作用于软骨缺损处可促进缺损修复。 展开更多

关键词 软骨再生支架 骨髓间充质干细胞 外泌体 软骨缺损 软骨细胞 白细胞介素1Β

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蜂胶对高脂饲料诱导的动脉粥样硬化家兔的干预效应 被引量：4

5

作者 司艳红 商战平 +5 位作者 王家富 江新泉 王新成 綦惠 姚树桐 宋国华 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第35期82-84,共3页

目的：观察蜂胶对高脂诱导的动脉粥样硬化的干预作用。 方法：实验于2003-05／11在泰山医学院动物室、诊断学实验室和形态学实验室完成。选择雄性新西兰家兔24只，随机分为4组，对照组、模型组、蜂胶组及卡托普利组各6只。①对照组：喂... 目的：观察蜂胶对高脂诱导的动脉粥样硬化的干预作用。 方法：实验于2003-05／11在泰山医学院动物室、诊断学实验室和形态学实验室完成。选择雄性新西兰家兔24只，随机分为4组，对照组、模型组、蜂胶组及卡托普利组各6只。①对照组：喂饲基础颗粒饲料。②模型组：喂饲高脂饲料(基础颗粒饲料+100g／L猪油+10g／L胆固醇)。③蜂胶组：在喂饲高脂饲料的基础上，灌胃蜂胶0．35g／d。④卡托普利组：在喂饲高脂饲料的基础上，灌胃给予卡托普利15mg／d。每只家兔约食饲料110～140g／d，12周末处死，取血清及动脉标本待查。①测定血清总胆固醇，三酰甘油，高、低密度脂蛋白胆固醇水平采用酶法。②测定血清超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮水平测分别采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法、硝酸还原酶法。③组织学观察：麻醉处死动物后立即解剖分离主动脉，记录主动脉壁粥样斑块大小。截取主动脉降部切片后光镜下观察主动脉壁及内膜损伤程度。④免疫组化法检测：增殖细胞核抗原染色、原位细胞凋亡染色均使用链酶亲和素-过氧化物酶法。把增殖细胞核抗原切片及原位细胞凋亡切片放在光镜下各取10个视野，计数每个视野斑块中的阳性细胞数均值作为阳性细胞数。把苏木精-伊红切片放在光镜下取与前面切片相同部位的10个视野，计数每个视野斑块中所有细胞数的均值作为细胞总数。增殖指数=增殖细胞核抗原染色阳性细胞数／细胞总数×100％；凋亡指数=原位细胞凋亡染色阳性细胞数／细胞总数×100％。 结果：所有家兔全部进入结果分析，无脱落。①各组家兔动脉粥样硬化的病理改变：模型组出现典型动脉粥样硬化病理变化，全部动脉内皮下层明显增生、增厚，为多量泡沫细胞聚集形成，伴有纤维组织、无定型物质及钙盐沉积� 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 蜂胶 脱噬作用 脂类/血液

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复合胶原海绵材料的体内外止血效果 被引量：7

6

作者 靳少锋 綦惠 +4 位作者 舒雄 杰永生 郑蕊 陈磊 孙磊 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第2期216-221,共6页

背景:胶原材料具有良好的止血效果,但是单一胶原止血材料的吸水能力有限,血液浓缩效果不佳,所以止血效率并不理想。目的:观察复合胶原海绵止血材料的体内外止血效果。方法:以胶原、透明质酸和氯化钙为原料、碳化二酰亚胺为交联剂,制备... 背景:胶原材料具有良好的止血效果,但是单一胶原止血材料的吸水能力有限,血液浓缩效果不佳,所以止血效率并不理想。目的:观察复合胶原海绵止血材料的体内外止血效果。方法:以胶原、透明质酸和氯化钙为原料、碳化二酰亚胺为交联剂,制备复合胶原海绵止血材料。(1)细胞毒性实验:分别以复合胶原海绵止血材料浸提液、苯酚溶液及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞,培养第2,4,7天,MTT法检测细胞增殖,判定材料毒性;(2)材料与全血的关系:将兔抗凝血分别滴于复合胶原海绵止血材料、进口止血材料及国产止血材料表面,扫描电镜观察材料与全血的关系;(3)体外凝血活性:将兔抗凝血分别滴于复合胶原海绵止血材料、进口止血材料及国产止血材料表面,采用凝血指数检测凝血效果;(4)体内止血效果:钻透18只兔肝叶,随机分3组,分别以复合胶原海绵止血材料、进口止血材料及国产止血材料止血,检测出血时间及出血量。结果与结论:(1)复合胶原海绵材料的细胞毒性为1级,合格;(2)与进口和国产止血材料相比较,复合胶原海绵止血材料既有利于血液中水分继续向纵深吸收又能同时网络血红蛋白、血小板等形成凝血块,还可看到孔隙交替向内部延伸,形成交替复杂的海绵状;(3)复合胶原海绵止血材料的凝血指数显著低于进口、国产止血材料(P<0.05);(4)复合胶原海绵止血材料组的出血时间及出血量明显低于进口止血材料组、国产止血材料组(P<0.05);(5)结果表明,复合胶原海绵止血材料具有的良好止血效果及生物相容性。 展开更多

关键词 透明质酸 胶原 止血 组织工程

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脂肪干细胞复合真皮脱细胞基质修复兔关节软骨缺损的实验研究 被引量：7

7

作者 舒雄 郑蕊 +4 位作者 杰永生 陈磊 靳少锋 綦惠 孙磊 《中国医药生物技术》 2017年第2期143-148,共6页

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)复合小牛真皮脱细胞基质(ADM)参与修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法取自体新西兰兔的脂肪组织,采用酶消化分离培养ADSCs并传代,倒置相差显微镜观察细胞形态,FACS检测细胞表面特异性表达以鉴定细胞,... 目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)复合小牛真皮脱细胞基质(ADM)参与修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法取自体新西兰兔的脂肪组织,采用酶消化分离培养ADSCs并传代,倒置相差显微镜观察细胞形态,FACS检测细胞表面特异性表达以鉴定细胞,行成脂和成骨诱导鉴定。小牛真皮通过脱细胞、交联和冻干制备小牛ADM,ADSCs达到一定数量后接种于ADM得到细胞支架复合物。24只新西兰大白兔随机分A、B、C共三组,A组关节软骨缺损处外科缝合细胞支架复合物,B组软骨缺损处外科缝合ADM,C组软骨缺损不做任何处理。分别于术后第12周处死动物,修复处行大体、组织学检测。结果成功分离鉴定新西兰兔的脂肪干细胞。经重塑后真皮脱细胞基质支架材料表面光滑、孔隙均匀。ADSCs与ADM复合后,缺损处类软骨组织填充,修复区表面光滑;Ⅱ型胶原免疫组化显示,复合支架已被吸收,再生的软骨是阳性。结论新型小牛ADM支架材料与ADSCs生物相容性好,ADSCs与ADM复合向软骨诱导后可良好地修复关节软骨缺损,具有替代正常软骨的潜力。 展开更多

关键词 脂肪干细胞 真皮脱细胞基质 支架 关节软骨 组织工程

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放散式体外冲击波对软骨细胞生物学行为的影响 被引量：6

8

作者 綦惠 杰永生 +4 位作者 郑蕊 舒雄 郭安忆 王山 刘亚军 《北京生物医学工程》 2020年第3期278-284,共7页

目的放散式体外冲击波(radial extracorporeal shock wave,rESW)能够促进软骨缺损和骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤的修复,但具体机制仍需进一步探讨。本研究以软骨细胞为研究对象,分析rESW对软骨细胞生物学行为的影响及相关机制,... 目的放散式体外冲击波(radial extracorporeal shock wave,rESW)能够促进软骨缺损和骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤的修复,但具体机制仍需进一步探讨。本研究以软骨细胞为研究对象,分析rESW对软骨细胞生物学行为的影响及相关机制,为rESW的临床应用奠定研究基础。方法采用胶原酶联合胰蛋白酶消化的方法获取大鼠软骨细胞,通过甲苯胺蓝染色对软骨细胞进行鉴定。分别在正常培养条件以及IL-1β介导的炎性条件下,给予不同能量的rESW刺激,采用CCK8法和划痕法分别检测软骨细胞的增殖和迁移。通过对软骨细胞培养上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)的Griess法测定,检测rESW对软骨细胞NO分泌的影响。Western blot分析软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的蛋白表达。结果正常环境下,rESW对软骨细胞的增殖、迁移和NO分泌均未有显著影响。IL-1β存在的炎性环境下,软骨细胞增殖和迁移受到显著抑制,rESW应用后,软骨细胞增殖能力有明显恢复,但迁移未受影响。炎性环境下,软骨细胞NO生成显著升高,且iNOS蛋白表达上调,rESW抑制NO的分泌和iNOS蛋白的表达。结论炎性环境下,rESW能够保护软骨细胞的增殖功能,且抑制软骨细胞分泌前炎症因子NO,改善关节腔微环境,因此rESW能够作为一种辅助手段应用于关节软骨损伤的治疗。 展开更多

关键词 放散式体外冲击波 骨关节炎 软骨细胞 一氧化氮 生物学行为

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骨髓间充质干细胞源性外泌体对体外培养的软骨细胞增殖和迁移的调节作用 被引量：6

9

作者 綦惠 刘丹平 +4 位作者 田大川 肖大伟 苏永蔚 李海乐 舒雄 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期40-45,共6页

目的:探讨骨髓间充质干细胞源性外泌体对体外培养的软骨细胞增殖和迁移的调节作用。方法:体外分别培养新西兰兔的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和软骨细胞;超高速离心法收集BMSCs源性外泌体(BMSC-Exos);透射电镜观察BMSC-Exos的形状和大小;We... 目的:探讨骨髓间充质干细胞源性外泌体对体外培养的软骨细胞增殖和迁移的调节作用。方法:体外分别培养新西兰兔的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和软骨细胞;超高速离心法收集BMSCs源性外泌体(BMSC-Exos);透射电镜观察BMSC-Exos的形状和大小;Western blot鉴定BMSC-Exos表面标记;MTT法检测不同剂量的BMSC-Exos对软骨细胞增殖的调节作用,以及给予IL-1β刺激后软骨细胞增殖的变化;荧光显微镜下观察软骨细胞对BMSC-Exos的摄取;划痕试验分析BMSC-Exos对软骨细胞迁移的调节作用。结果:获取的BMSC-Exos呈近似球形,直径40～100 nm,表面表达CD63和CD81。40μg/mL、80μg/mL和120μg/mL含量的外泌体均可显著促进软骨细胞增殖(P<0.05),80μg/mL与120μg/mL含量外泌体的作用没有显著差异。BMSC-Exos能够被软骨细胞摄取。BMSC-Exos与软骨细胞共培养,划痕愈合率由44%上升至63%(P<0.05)。结论:BMSC-Exos能够促进体外培养的软骨细胞增殖和迁移,具有作为一种新型非细胞治疗方法替代MSCs细胞治疗方法的可能。 展开更多

关键词 外泌体 间充质干细胞 软骨细胞

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褪黑素预处理的骨髓间充质干细胞外泌体促进骨髓间充质干细胞成骨 被引量：5

10

作者 申恩谱 黄霸 +3 位作者 刘丹平 綦惠 吴志文 李贝贝 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第30期4800-4805,共6页

背景:骨质疏松是一种以骨量减少、骨微结构改变为主要特征的全身性代谢疾病,现有的药物治疗效果有限且不良反应明显,而骨髓间充质干细胞来源外泌体因其非免疫原性等优势,有望成为治疗骨质疏松的新方法。目的:探讨褪黑素预处理骨髓间充... 背景:骨质疏松是一种以骨量减少、骨微结构改变为主要特征的全身性代谢疾病,现有的药物治疗效果有限且不良反应明显,而骨髓间充质干细胞来源外泌体因其非免疫原性等优势,有望成为治疗骨质疏松的新方法。目的:探讨褪黑素预处理骨髓间充质干细胞后提取的外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及作用机制,分析其作为无细胞方式促进成骨治疗骨质疏松的可行性。方法:采用全骨髓贴壁法分离大鼠原代骨髓间充质干细胞并鉴定;超高速离心法提取骨髓间充质干细胞中的外泌体(NC-Exos)和褪黑素预处理骨髓间充质干细胞中的外泌体(MT-Exos)并鉴定;共聚焦显微镜下观察骨髓间充质干细胞对外泌体的摄取情况。骨髓间充质干细胞在成骨诱导培养基中培养,分别以MT-Exos和NC-Exos处理骨髓间充质干细胞,以PBS处理骨髓间充质干细胞为空白对照组。采用碱性磷酸酶活性、茜素红染色评估各组骨髓间充质干细胞成骨分化效果,Western blot和RT-qPCR分别检测各组骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2的蛋白和mRNA表达;Western blot检测骨髓间充质干细胞中Wnt1和β-catenin的蛋白表达。结果与结论:①骨髓间充质干细胞呈典型纺锤样形态且具备三系分化能力;外泌体的直径大多数小于150 nm,且均表达外泌体特异性标记蛋白CD9、CD63和CD81,能够被骨髓间充质干细胞摄取;②成骨诱导7 d后,相较于NC-Exos处理组,MT-Exos处理组显示出更高的碱性磷酸酶活性(P<0.01),碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2的蛋白和mRNA表达(P<0.05),Wnt1、β-catenin蛋白表达(P<0.001);③成骨诱导14 d后,相较于NC-Exos处理组,MT-Exos处理组显示出更多的红色钙结节;④上述实验结果表明,MT-Exos通过激活Wnt1/β-catenin信号通路显著促进骨髓间充质干细胞成骨分化。 展开更多

关键词 外泌体 褪黑素 骨髓间充质干细胞 成骨分化 信号通路

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兔软骨细胞与骨髓基质细胞的平面共培养：两者培养比例筛选 被引量：4

11

作者 孙磊 綦惠 +6 位作者 陈磊 陈海燕 江健 陶剑锋 杰永生 高新生 Peter I.Lelkes 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第27期4955-4959,共5页

背景：骨髓基质细胞一定条件下可以分化为软骨细胞,但目前还缺少将软骨与骨髓基质细胞平面共培养的深入探讨。目的：拟明确骨髓基质细胞与软骨细胞共培养时比例的选择、细胞增殖活性、软骨特异性蛋白表达的规律,用于细胞移植的最佳时间... 背景：骨髓基质细胞一定条件下可以分化为软骨细胞,但目前还缺少将软骨与骨髓基质细胞平面共培养的深入探讨。目的：拟明确骨髓基质细胞与软骨细胞共培养时比例的选择、细胞增殖活性、软骨特异性蛋白表达的规律,用于细胞移植的最佳时间和传代次数。方法：软骨细胞与骨髓基质细胞的分离培养,传代后分为5组：单纯软骨细胞组;共培养组,软骨细胞与骨髓基质细胞7：3,5：5,3：7组;以及单纯骨髓基质细胞组。传代至第4代（G4）,倒置相差显微镜观察各组细胞在不同传代时期的细胞形态,MTT实验检测细胞增殖活性,甲苯胺蓝与阿利新蓝染色,细胞免疫化学法检测Ⅱ型胶原的表达。结果与结论：共培养各组在各个时期细胞表型正常。G1-G3代细胞增殖活跃,G4代细胞增殖能力下降。共培养各组甲苯胺蓝与阿利新蓝染色以及Ⅱ型胶原表达在G2和G3代均较高。综合各指标认为,以软骨细胞与骨髓基质细胞的比例为5：5,3：7组为最佳。软骨细胞与骨髓基质细胞平面共培养,保持了软骨细胞的形态和蛋白表达特性,如进行细胞移植,选取软骨细胞与骨髓基质细胞5：5或3：7的比例为最佳。 展开更多

关键词 软骨细胞 骨髓基质细胞 共培养 蛋白聚糖 Ⅱ型胶原

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无细胞支架修复家兔关节软骨缺损的实验研究 被引量：5

12

作者 綦惠 杰永生 +3 位作者 陈磊 李清海 高新生 孙磊 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期1303-1309,共7页

[目的]探讨无细胞的软骨修复支架对动物模型关节软骨损伤的修复效果,及其临床应用的可能性和优势。[方法]成年新西兰大白兔构建软骨缺损动物模型。A组为空白对照组,仅做缺损手术;B组为无细胞支架组,植入不含细胞的支架;C组为负载细胞的... [目的]探讨无细胞的软骨修复支架对动物模型关节软骨损伤的修复效果,及其临床应用的可能性和优势。[方法]成年新西兰大白兔构建软骨缺损动物模型。A组为空白对照组,仅做缺损手术;B组为无细胞支架组,植入不含细胞的支架;C组为负载细胞的支架组,植入负载种子细胞的支架。术后6、12周取材,体视显微镜观察、HE染色和甲苯胺蓝染色观察。术后12周的标本参考国际软骨修复协会组织学评分(International Cartilage Repair Society Histological Scoring,ICRS)标准评分,并对修复后新生组织力学性能进行检测。[结果]体视显微镜观察显示:A组,缺损周边仅有少量修复。B、C组,修复平面略低于周边正常组织,关节面较光滑,修复组织与周围软骨整合较好。HE染色与甲苯胺蓝染色显示:A组,缺损区域主要为纤维组织。B、C组,缺损区域中有大量软骨样组织生成。B、C两组评分的差别无统计学意义(P>0.05),但两组的评分均显著高于A组(P<0.05)。生物力学检测结果显示,正常软骨组织压缩模量为(0.61±0.06)MPa,A、B、C三组压缩模量分别为(0.08±0.05)MPa、(0.16±0.06)MPa、(0.22±0.06)MPa。与A组相比,B组与C组的压缩模量均有显著改善,但与正常软骨组织相比仍有明显降低(P<0.05)。[结论]单纯支架植入与支架负载细胞共同植入,对关节软骨的修复效果无显著性差异,提示负载细胞并未对软骨修复效果有明显的改善。因此,本研究基于无需细胞种植的软骨再生技术理念,使用无细胞支架修复关节软骨损伤/缺损,有可能作为一种更为简便的再生医学方法在软骨损伤、缺损的治疗中发挥重要作用。 展开更多

关键词 软骨损伤、缺损 支架 再生医学

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干细胞外泌体对骨质疏松大鼠骨生成的影响 被引量：4

13

作者 綦惠 黄霸 +4 位作者 杰永生 郑蕊 舒雄 陈磊 刘丹平 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期726-730,共5页

[目的]探讨间充质干细胞源性外泌体对骨质疏松大鼠骨生成的调节作用。[方法]体外获取和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)以及BMSCs源性外泌体(exosomes derived from BMSCs,BMSC-Exos)。采用CCK8法... [目的]探讨间充质干细胞源性外泌体对骨质疏松大鼠骨生成的调节作用。[方法]体外获取和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)以及BMSCs源性外泌体(exosomes derived from BMSCs,BMSC-Exos)。采用CCK8法检测BMSC-Exos对BMSCs增殖的影响,碱性磷酸酶活性分析BMSC-Exos对BMSCs成骨转化的作用。成年雌性SD大鼠随机分成三组,OVX组与OVX+Exos组行双侧卵巢切除术,前者尾静脉注射PBS,后者尾静脉注射BMSC-Exos;而Control组为假手术组,仅切开背部皮肤后缝合,术后不给予任何药物。术后取股骨进行HE染色和Micro-CT观察。[结果]BMSCs具有成骨、成脂和成软骨分化能力。BMSC-Exos呈近似圆形,表达CD63、CD81和CD9。体外实验部分,BMSC-Exos与BMSCs共培养24 h和48 h,BMSCs增殖显著增强(P<0.05)。成骨诱导7 d后,BMSC-Exos组碱性磷酸酶活性明显上调。体内实验部分,OVX组骨密度(bone mineral density,BMD)下降(P<0.05),骨小梁稀疏,变细,间隙增大,注射BMSC-Exos后,BMD显著升高(P<0.05),骨小梁增粗,数量增多。[结论]BMSC-Exos能够促进骨生成,对骨质疏松具有一定程度的治疗作用。 展开更多

关键词 间充质干细胞 外泌体 骨质疏松

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两种交联剂制备软骨细胞移植支架的比较 被引量：4

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作者 綦惠 杰永生 +3 位作者 陈磊 陶建峰 江建 孙磊 《中国医药生物技术》 2013年第6期408-413,共6页

目的试用两种交联剂对小牛真皮基质来源的支架材料进行交联,比较支架的细胞毒性、结构、生物相容性和细胞贴附的差异,为在体动物试验提供实验依据。方法将脱细胞真皮基质分为两组,分别浸入0.05%戊二醛溶液和0.2%水溶性交联剂进行交联,MT... 目的试用两种交联剂对小牛真皮基质来源的支架材料进行交联,比较支架的细胞毒性、结构、生物相容性和细胞贴附的差异,为在体动物试验提供实验依据。方法将脱细胞真皮基质分为两组,分别浸入0.05%戊二醛溶液和0.2%水溶性交联剂进行交联,MTT法检测细胞毒性和溶血率。将交联后的支架分别植入大鼠皮下,评价生物相容性。以排液法粗测孔隙率,并在电镜下观察支架的结构和孔隙大小。培养间充质干细胞并贴附于两种方法处理的材料表面,电镜下观察贴附情况。结果以戊二醛溶液和水溶性交联剂两种方法处理的支架细胞毒性检测均合格,溶血率分别为4.61%与2.97%,均符合国家标准。经戊二醛交联的支架生物相容性差,炎症反应始终存在,水溶性交联剂处理的真皮基质组织相容性较好,仅有轻微的炎症反应。水溶性交联剂制备的支架材料孔隙率为84.3%±5.0%,戊二醛制备的支架材料孔隙率为79.7%±10.8%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。戊二醛交联的支架细胞贴附差,而水溶性交联剂制备的支架细胞贴附良好。结论应用水溶性交联剂处理的支架细胞毒性和溶血率检测均合格,具有良好的生物相容性、孔隙率和细胞贴附性,该法可以作为后期制备软骨细胞移植支架的交联方法。 展开更多

关键词 交联试剂 支架 材料实验 细胞毒性

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在内皮素-1诱导增殖的血管平滑肌细胞中骨桥蛋白的表达 被引量：2

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作者 綦惠 商战平 王家富 《中西医结合心脑血管病杂志》 2005年第10期871-874,共4页

目的观察在内皮素-1(ET-1)诱导增殖的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)中骨桥蛋白(OPN)表达的变化。方法组织贴块法培养HUASMC后;随机分成5组,组1、组2、组3分别给予ET-1100nmol/L、10nmol/L、1nmol/L刺激48h,组4为不加ET-1的对照组,组5给予1... 目的观察在内皮素-1(ET-1)诱导增殖的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)中骨桥蛋白(OPN)表达的变化。方法组织贴块法培养HUASMC后;随机分成5组,组1、组2、组3分别给予ET-1100nmol/L、10nmol/L、1nmol/L刺激48h,组4为不加ET-1的对照组,组5给予10μmol/LBQ123(ET-1A型受体的特异性拮抗剂)预处理后,再用10nmol/LET-1刺激48h,MTT比色法检测细胞在490nm的吸光度值(OD490),组间进行比较;免疫细胞化学方法检测OPN在不同组之间的表达,计算并比较表达的阳性率;分析OPN表达与HUASMC增殖的相关关系。结果ET-1剂量依赖性刺激HUASMC增殖,组间OD490比较有统计学意义(P<0.01),BQ123可以抑制ET-1的作用;随ET-1浓度的升高,OPN表达阳性率升高(P<0.01),给予BQ123预处理后,OPN表达的阳性率亦显著低于单独ET-1刺激组(P<0.01)和对照组(P<0.05);OPN表达阳性率与OD490值之间存在直线正相关(r=0.962,P<0.01)。结论ET-1剂量依赖性刺激血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,在ET-1诱导增殖的VSMC中OPN表达增加,OPN表达和HUASMC增殖之间存在直线正相关关系,检测VSMC中OPN的表达,对于VSMC增殖情况有一定预测价值。 展开更多

关键词 内皮素-1 血管平滑肌细胞 骨桥蛋白

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一氧化氮在软骨病变中的作用 被引量：4

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作者 綦惠 孙磊 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期1969-1971,共3页

一氧化氮（nitricoxide，NO）是一种脂溶性小分子，参与炎症反应、免疫调节及血管舒张等多种生理病理过程。自1991年Stadler[1]首先报道兔关节软骨细胞在IL一1和脂多糖作用下能产生一氧化氮以来，研究者和临床医生开始关注NO与关节软骨... 一氧化氮（nitricoxide，NO）是一种脂溶性小分子，参与炎症反应、免疫调节及血管舒张等多种生理病理过程。自1991年Stadler[1]首先报道兔关节软骨细胞在IL一1和脂多糖作用下能产生一氧化氮以来，研究者和临床医生开始关注NO与关节软骨之间的关系。NO参与关节软骨生理和病理过程的各个环节的调节。本文将对NO在软骨病变中的作用做一综述。 展开更多

关键词 一氧化氮 一氧化氮合酶 软骨

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脱细胞真皮基质/生物矿化胶原一体化骨软骨支架的制备及其生物相容性的研究 被引量：4

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作者 郑蕊 杰永生 +4 位作者 陈磊 靳少锋 綦惠 孙磊 舒雄 《中国医药生物技术》 2019年第2期121-126,共6页

目的成功制备脱细胞真皮基质/生物矿化胶原一体化骨软骨支架,并进行理化性质、生物力学与生物相容性评估,为骨软骨缺损修复提供理论依据。方法以物理和化学方法制备牛源脱细胞真皮基质,利用磷酸三钙和胶原,按照不同比例混合,利用自组装... 目的成功制备脱细胞真皮基质/生物矿化胶原一体化骨软骨支架,并进行理化性质、生物力学与生物相容性评估,为骨软骨缺损修复提供理论依据。方法以物理和化学方法制备牛源脱细胞真皮基质,利用磷酸三钙和胶原,按照不同比例混合,利用自组装和冻干技术,制备以脱细胞真皮基质支架为软骨层,生物矿化胶原为骨层的骨软骨一体化双相支架。通过大体观察、扫描电镜观察、生物力学等检测,对骨软骨一体化支架进行理化性质和力学性能评价。原代培养小鼠软骨细胞和成骨细胞,并分别种植在脱细胞真皮基质和生物矿化胶原双相支架上,利用细胞毒、死/活细胞染色和增殖实验等观察细胞生长情况,测定骨软骨一体化支架的生物相容性。结果大体观察表明支架各层间结合紧密,未出现明显不连续和相互分离。扫描电镜各层内的孔隙结构相互连通且均具有立体多维性,其中脱细胞真皮基质、生物矿化胶原和双相支架的孔径分别为(121.6±8.65)、(98.40±5.56)和(103.2±3.94)μm。同时三组支架的压缩模量分别为(41.05±11.69)、(108.0±12.71)和(84.98±8.51)k Pa,弹性模量分别为(17.24±3.93)、(28.98±3.31)和(21.74±2.92)k Pa。MTT法表明骨软骨一体化支架无细胞毒性。荧光显微镜观察显示,纵切的支架薄片上细胞生长分布均匀,表明支架生物相容性较好,CCK8实验表明支架可以维持良好的细胞活性。结论脱细胞真皮基质/生物矿化胶原骨双相支架中上下层间的理化性能展示了骨软骨组织结构和力学方面的双重仿生,为动物体内实验奠定了基础,有望成为治疗骨软骨缺损修复的一种新手段。 展开更多

关键词 脱细胞真皮基质 生物矿化胶原 双相支架 骨软骨

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高表达软骨调素1骨髓间充质干细胞来源外泌体促进骨关节炎软骨细胞的增殖

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作者 吴志文 申恩谱 +2 位作者 李贝贝 刘丹平 綦惠 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第33期5277-5282,共6页

背景:软骨调素1(chondromodulin-1,Chm-1)在正常软骨中大量表达,具有抑制血管生成、阻止软骨细胞肥大、缓解骨关节炎发展的功能,在骨关节炎发生和发展中发挥着重要作用。目的:探讨高表达Chm-1骨髓间充质干细胞来源外泌体对骨关节炎环境... 背景:软骨调素1(chondromodulin-1,Chm-1)在正常软骨中大量表达,具有抑制血管生成、阻止软骨细胞肥大、缓解骨关节炎发展的功能,在骨关节炎发生和发展中发挥着重要作用。目的:探讨高表达Chm-1骨髓间充质干细胞来源外泌体对骨关节炎环境中软骨细胞增殖的影响。方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞并进行培养及鉴定;Chm-1慢病毒和空载慢病毒转染骨髓间充质干细胞,超高速离心法提取细胞培养上清液中外泌体(Chm-1-Exos和NC-Exos)。白细胞介素1β作用软骨细胞24 h构建体外骨关节炎模型,随后分别用2种外泌体处理7 d,将PBS处理的骨关节炎软骨细胞作为对照组。共聚焦显微镜观察骨关节炎软骨细胞对外泌体的摄取情况;CCK-8评估各组骨关节炎软骨细胞增殖能力;Western blot检测2种外泌体中Chm-1的表达;Western blot和RT-qPCR方法分别检测各组骨关节炎软骨细胞中Ⅱ型胶原、SOX9、AGG蛋白和mRNA的表达。结果与结论:(1)骨髓间充质干细胞呈典型纺锤状形态且具备三系分化能力;(2)带有绿色荧光的慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞;(3)外泌体直径在40-150 nm之间,且均表达其特异性标志蛋白CD63、CD81、TSG101,能够被骨关节炎软骨细胞摄取;(4)相比于NC-Exos,Chm-1-Exos中Chm-1的表达更高(P<0.05);(5)NC-Exos和Chm-1-Exos分别作用骨关节炎软骨细胞24 h后,Chm-1-Exos组骨关节炎软骨细胞活性更强;(6)NC-Exos和Chm-1-Exos分别作用骨关节炎软骨细胞7 d后,Chm-1-Exos组的Ⅱ型胶原、SOX9、AGG蛋白和mRNA表达更高(P<0.05);(7)上述实验结果表明,Chm-1-Exos能够显著促进骨关节炎软骨细胞的增殖。 展开更多

关键词 骨关节炎 骨髓间充质干细胞 外泌体 软骨细胞 Chm-1

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应用小牛皮制备软骨修复载体的脱毛-脱细胞-结构改建工艺探讨 被引量：3

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作者 綦惠 孙磊 +3 位作者 陈磊 江建 杰永生 高新生 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期151-157,共7页

[目的]软骨修复载体的制备是软骨组织工程的重要课题。本实验以小牛皮为原料,通过脱毛-脱细胞-结构改建的早期工艺探讨,掌握最佳制备流程,为后续工艺做准备。[方法]将小牛皮分别浸入0.5%dispase溶液和0.25%胰蛋白酶溶液,4℃脱毛72 h,比... [目的]软骨修复载体的制备是软骨组织工程的重要课题。本实验以小牛皮为原料,通过脱毛-脱细胞-结构改建的早期工艺探讨,掌握最佳制备流程,为后续工艺做准备。[方法]将小牛皮分别浸入0.5%dispase溶液和0.25%胰蛋白酶溶液,4℃脱毛72 h,比较脱毛效果。乙酸溶胀,刮除/切除表皮和皮下组织,获得真皮组织。真皮组织分别浸入0.5%SDS、1%SDS与0.5%TritonX-100进行脱细胞,充分冲洗之后冻干,HE染色比较脱细胞效果,MTT法进行细胞毒性检测。应用0.25%胰蛋白酶浸泡、0.25%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声振荡、0.5%胰蛋白酶浸泡、0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声振荡四种方法进行结构改建,扫描电镜观察、MASSON染色、孔隙率检测比较结构改建效果。[结果]0.5%dispase溶液和0.25%胰蛋白酶溶液均能够良好的去除小牛皮的毛发。0.5%SDS、1%SDS脱细胞效果基本一致,TritonX-100似有将胶原纤维破坏的征兆,由于低浓度SDS更易于冲洗,后续实验采用0.5%SDS脱细胞。细胞毒性检测为0级。0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声是最佳的结构改建方法,改建后的载体胶原纤维光滑、立体感明显增强,孔隙率显著高于未改建的载体(P<0.05)。[结论]0.25%胰蛋白酶溶液脱毛-0.5%SDS脱细胞-0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声进行结构改建,是应用小牛皮制备软骨修复载体的最佳工艺。 展开更多

关键词 脱毛 脱细胞 结构改建 孔隙率

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脱钙骨基质与生物蛋白胶复合载体修复兔关节软骨缺损 被引量：3

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作者 綦惠 孙磊 +2 位作者 陈磊 陶剑锋 江健 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第25期4589-4593,共5页

背景:应用组织工程学方法修复软骨组织缺损,需要有合适的载体,在发挥承载作用的同时对软骨细胞起到良好的固定作用。目的:观察利用脱钙骨基质与生物蛋白胶的复合载体修复实验性兔关节软骨缺损的可行性及有效性。方法:制备脱钙骨基质与... 背景:应用组织工程学方法修复软骨组织缺损,需要有合适的载体,在发挥承载作用的同时对软骨细胞起到良好的固定作用。目的:观察利用脱钙骨基质与生物蛋白胶的复合载体修复实验性兔关节软骨缺损的可行性及有效性。方法:制备脱钙骨基质与生物蛋白胶的复合载体。建立兔关节软骨缺损模型,编号后,将42只新西兰大白兔随机分为3组:载体复合细胞组(n=15):兔膝关节软骨缺损区植入含有软骨细胞的脱钙骨基质与生物蛋白胶的复合载体;单纯载体组(n=15):植入不含细胞的复合载体;空白对照组(n=12):不进行任何植入处理。依照分组,分别于术后4,8,12周取材,进行大体、组织学、甲苯胺蓝染色观察,并做Wakitani评分,观察各组动物关节缺损修复效果。结果与结论:载体复合细胞组12周时可以修复膝关节软骨的缺损,并且以透明软骨组织为主,修复效果明显强于单纯载体组与空白对照组;Wakitani评分在各个时间均优于其他两组(P<0.05)。提示脱钙骨基质与生物蛋白胶的复合载体负载软骨细胞可以作为软骨组织工程支架材料,能够用于再生修复软骨的缺损。 展开更多

关键词 脱钙骨基质 生物蛋白胶 组织工程 软骨细胞 Wakitani评分

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