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RagA转基因果蝇的构建及功能研究 被引量：1
1
作者 孟国强 管建文 +3 位作者 牛春梅 周颖 沈苏林 韦有恒 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期171-180,共10页
Rag GTPase属于Ras家族成员的GTP结合蛋白,定位于溶酶体。果蝇RagA蛋白是哺乳动物RagA/RagB蛋白同源物,在果蝇中RagA与RagC结合,共同调节TORC1活性。本实验室发现敲减RagA使果蝇发育停滞在蛹期。为了探究具体原因,基于密码子的简并性,... Rag GTPase属于Ras家族成员的GTP结合蛋白,定位于溶酶体。果蝇RagA蛋白是哺乳动物RagA/RagB蛋白同源物,在果蝇中RagA与RagC结合,共同调节TORC1活性。本实验室发现敲减RagA使果蝇发育停滞在蛹期。为了探究具体原因,基于密码子的简并性,通过融合PCR、同源重组克隆的方法构建了改变RagA RNA干扰靶标位点的过表达载体pUASp-RagAwt;在此基础上,通过点突变的方式构建了与GTP结合的RagA过表达载体pUASp-RagA-Q61L和与GDP结合的RagA过表达载体pUASp-RagA-T16N。通过显微注射和遗传杂交等方式分别筛选出pUASp-RagA-wt、pUASp-RagA-Q61L、pUASp-RagA-T16N转基因果蝇。通过体细胞克隆的方法检测了不同活性状态的RagA对TORC1活性的影响,RagA调节TORC1活性:与GTP结合处于激活态;与GDP结合处于失活态。为确定GTP/GDP状态下RagA活性对果蝇发育的影响,将UASp转基因系果蝇与Tub-Gal4/TM6果蝇杂交并统计后代羽化率,判断由GTP/GDP状态控制的RagA活性对果蝇生长发育的影响。结果发现,RagA敲减果蝇由于蛹期阶段内出现障碍不能发育为成虫。在RagA敲减的背景下,过表达野生型RagA能够完全挽救RagA敲减所导致的果蝇致死。过表达GTP结合型的RagA-Q61L能够部分挽救RagA敲减的致死效应,过表达GDP结合型的RagA-T16N不能挽救RagA敲减的致死效应。表明RagA在果蝇生长发育过程中起着重要的作用,且RagA与GTP/GDP结合需保持动态平衡。RagA仅与GTP或GDP结合会使TORC1活性处于过高或过低的状态,影响果蝇的生长发育。 展开更多
关键词 RagA 显微注射 果蝇 发育
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RagA和Nprl2在果蝇肠道发育中的调节作用关系 被引量：1
2
作者 牛春梅 管建文 +2 位作者 孟国强 周颖 韦有恒 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1747-1758,共12页
动物胃肠道是食物消化和营养吸收器官,对机体健康至关重要。果蝇与哺乳动物的肠道在细胞组成、遗传调控等方面高度相似,是研究肠道发育的良好模型。体外培养细胞中的研究发现,Nprl2通过作用于Rag GTPase,抑制雷帕霉素靶点复合物1(target... 动物胃肠道是食物消化和营养吸收器官,对机体健康至关重要。果蝇与哺乳动物的肠道在细胞组成、遗传调控等方面高度相似,是研究肠道发育的良好模型。体外培养细胞中的研究发现,Nprl2通过作用于Rag GTPase,抑制雷帕霉素靶点复合物1(target of rapamycin complex 1,TORC1)的活性,参与细胞代谢的调节。前期报道nprl2突变果蝇具有前胃增大、消化能力降低等肠道衰老相关表型。但对于Nprl2是否通过Rag GTPase调控肠道发育等方面尚不清楚。为了探究Rag GTPase在Nprl2调控果蝇肠道发育中的作用,本研究利用遗传杂交结合免疫荧光等方法对RagA敲减和nprl2突变果蝇的肠道形态、肠道细胞组成等方面进行研究。发现单独敲减RagA可以引起肠变粗、前胃增大等表型,敲减RagA能挽救nprl2突变体中肠道变细、分泌型细胞减少的表型,但并不能挽救nprl2突变体中前胃增大的表型。以上结果表明,RagA在肠道发育中发挥重要作用,Nprl2通过作用于Rag GTPase调节肠道细胞分化和肠道形态,但Nprl2对前胃发育和肠道的消化功能的调节可能通过不依赖于Rag GTPase的机制实现。 展开更多
关键词 果蝇 肠道 RagA nprl2突变体 发育
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基层信贷风险成因透析
3
作者 张金龙 王志杰 +1 位作者 管建文 周恒山 《江苏农村金融》 1997年第9期36-37,共2页
基层信贷风险形成原因有来自于宏观方面的影响,但以乡镇企业、个体经营者和农户为主要信贷载体的基层金融机构,形成信贷风险的主要原因还是来自于微观方面,具有基层特点。笔者将其归纳为以下几点:一、决策者缺乏风险意识。防范化解信贷... 基层信贷风险形成原因有来自于宏观方面的影响,但以乡镇企业、个体经营者和农户为主要信贷载体的基层金融机构,形成信贷风险的主要原因还是来自于微观方面,具有基层特点。笔者将其归纳为以下几点:一、决策者缺乏风险意识。防范化解信贷风险,首先要求决策者,即金融机构的信贷管理者,企业的经营管理者和地方党政的决策者都必须具备风险意识。然而,基层上述人员的风险意识却比较缺乏:(1) 展开更多
关键词 信贷风险 基层金融机构 风险意识 风险成因 防范化解 形成原因 决策者 信贷资金 经营管理者 乡镇企业
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十四大以来北京市城市建设成就一览──基础设施建设飞速发展　住宅建设成绩斐然
4
作者 管建文 《北京房地产》 1997年第9期4-5,共2页
十四大以来北京市城市建设成就一览──基础设施建设飞速发展　住宅建设成绩斐然管建文“十四大”以来，城市基础设施发展步伐之快，超过历史上任何一个时期。──公用设施供应能力明显提高。完成了以第九水厂二期工程、北京焦化厂增气... 十四大以来北京市城市建设成就一览──基础设施建设飞速发展　住宅建设成绩斐然管建文“十四大”以来，城市基础设施发展步伐之快，超过历史上任何一个时期。──公用设施供应能力明显提高。完成了以第九水厂二期工程、北京焦化厂增气工程、石景山热电厂、华北油田至北京... 展开更多
关键词 基础设施建设 住宅建设 城市建设 十四大 危旧房改造 安居工程 北京市 污水处理厂 建设成就 安居住宅
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新媒体需要新“把关人”
5
作者 管建文 《当代传播》 北大核心 2007年第2期111-111,共1页
新媒体需要高素质的“新记者”和“新编辑”，而“什么样的媒体人才是我们所需要的‘把关人’以及怎样才能更好地培养新媒体人”的问题值得关注和探讨。
关键词 “把关人” 新媒体 编辑 记者
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