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表达马传染性贫血病毒受体和荧光素酶报告基因的293细胞系的建立 被引量:1
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作者 王登峰 张淑琴 +4 位作者 马学恩 郭巍 全滟平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1070-1075,共6页
为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒(EIAV)的中和抗体和研究不同毒株与受体的亲和性,克隆了马慢病毒受体1(ELR1)cDNA并插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了表达载体pELR1。该载体瞬时转染293细胞后,经Western blot... 为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒(EIAV)的中和抗体和研究不同毒株与受体的亲和性,克隆了马慢病毒受体1(ELR1)cDNA并插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了表达载体pELR1。该载体瞬时转染293细胞后,经Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测,确认了ELR1的表达。在pELR1质粒的基础上,插入EIAV疫苗株前病毒基因组转录调控区LTR以及萤火虫荧光素酶报告基因(Luc)构建了表达载体pELR1-LTR-Luc,并转染293细胞,建立了ELR1-LTR-Luc(293-E)细胞系。该细胞系能稳定表达ELR1基因,并且能在LTR的调控下表达萤火虫荧光素酶基因。用1000TCID50的EIAV驴胎皮肤细胞疫苗株D18V13接种该细胞,24h后检测其荧光素酶活性是未接毒对照的3.15倍。同时用IFA检测证明了病毒在细胞内的增殖。EIAV强毒株L21的接毒试验显示,ELR1.LTR(293-E)细胞的萤火虫荧光素酶活性与该毒株的接毒量在10^-2~10^-7稀释范围内呈正相关。该细胞系传35代后,外源基因的表达特征未发生改变。该细胞系的建立为进一步开展EIAV与细胞受体相互作用以及中和抗体评价等研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 EIAV 受体 LTR 荧光素酶 细胞系
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马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株免疫马后病毒囊膜蛋白特异性抗体参数的测定
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作者 王登峰 项伟 +3 位作者 郭巍 于在江 《新疆农业大学学报》 CAS 2008年第3期16-20,共5页
为研究马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株(FDDV-EIAV)免疫马后体液免疫在免疫保护中的作用,将6匹EIAV阴性马分为2组,第1组(6#,7#,8#,9#),分别接种1 mL 1000TCID50EIAV FDDV11,第2组(4#,5#)接种1 mL驴胎皮肤细胞培养上清作为对照组,定期采集... 为研究马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株(FDDV-EIAV)免疫马后体液免疫在免疫保护中的作用,将6匹EIAV阴性马分为2组,第1组(6#,7#,8#,9#),分别接种1 mL 1000TCID50EIAV FDDV11,第2组(4#,5#)接种1 mL驴胎皮肤细胞培养上清作为对照组,定期采集免疫接种后210 d内的血清,利用ELISA方法测定试验马血清中针对EIAV囊膜蛋白特异抗体参数。通过测定囊膜蛋白特异性抗体滴度、抗体亲和力和抗体构象变化,发现该疫苗免疫马18 d后出现针对囊膜蛋白的特异性抗体,整个监测期内其抗体水平较低;抗体亲和力虽有波动,但亲和力水平较高;抗体构象指数都在2.0附近波动,表示囊膜蛋白特异性抗体主要为构象性抗体。免疫210 d后,所有马均用1 mL 1×10-5血清稀释的EIAV强毒辽宁株(EIAV L21)进行攻击,攻毒后,对照马分别在第10天、第13天出现发热,第16天,第18天死亡,其它所有免疫马未见体温升高和其它临床症状,表明FDDV11能够产生良好的免疫保护作用。抗体参数分析表明FDDV11产生的体液免疫与马传贫致病株感染马后产生体液免疫截然不同,暗示体液免疫在EIAV感染马免疫保护中的可能起着重要作用。 展开更多
关键词 EIAV 体液免疫应答 囊膜蛋白抗体 抗体亲和力 抗体构象
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