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新兴猪γ-干扰素基因克隆及其真核表达质粒的构建 被引量：4
1
作者 温纳相 陈瑞爱 +4 位作者 裴仉福 唐满华 朱文冠 程含波 李琳 《动物医学进展》 CSCD 2005年第9期74-77,共4页
为研发猪γ-干扰素(interferon-gam-ma,IFN-γ)制剂,根据已发表的猪IFN-γ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR技术从3周龄新兴猪脾细胞中扩增出约500 bp的基因片段;将其片段连接到pMD18-T载体,经PCR、酶切及序列测定表明,该基因片段由501... 为研发猪γ-干扰素(interferon-gam-ma,IFN-γ)制剂,根据已发表的猪IFN-γ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR技术从3周龄新兴猪脾细胞中扩增出约500 bp的基因片段;将其片段连接到pMD18-T载体,经PCR、酶切及序列测定表明,该基因片段由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸,与NCBI GenBank上登载的猪IFN-γ基因序列完全一致。新兴猪IFN-γ基因的成功克隆及真核表达质粒的构建,将为进一步研发猪干扰素制剂奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 Γ干扰素 克隆 真核表达质粒
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猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化 被引量：3
2
作者 裴仉福 陈瑞爱 +5 位作者 唐秀英 朱文冠 唐满华 李琳 程含波 温纳相 《中国兽药杂志》 2007年第2期5-9,共5页
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,... 以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。 展开更多
关键词 猪白细胞介素-18 基因表达 蛋白纯化
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猪IL-18基因原核表达载体的构建及表达 被引量：2
3
作者 裴仉福 陈瑞爱 +5 位作者 温纳相 唐满华 朱文冠 李琳 程含波 唐秀英 《动物医学进展》 CSCD 2006年第10期73-77,共5页
以含新兴猪IL-18基因的真核质粒pcDNA3.1-pIL18为模板,扩增出新兴猪IL-18基因,将其定向克隆至原核表达载体pET32c和pET41c的SacⅠ和KpnⅠ位点,构建了原核表达载体pET32c-pIL18和pET41c-pIL18。经酶切和PCR鉴定,表明所构建的重组质粒为... 以含新兴猪IL-18基因的真核质粒pcDNA3.1-pIL18为模板,扩增出新兴猪IL-18基因,将其定向克隆至原核表达载体pET32c和pET41c的SacⅠ和KpnⅠ位点,构建了原核表达载体pET32c-pIL18和pET41c-pIL18。经酶切和PCR鉴定,表明所构建的重组质粒为特异性新兴猪IL-18基因原核表达质粒。将该重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)细胞,筛选的阳性菌落经SDS-PAGE分析及Western-blotting分析,表明成功构建了表达重组猪IL-18的大肠埃希菌基因工程菌株。蛋白的可溶性分析表明,重组蛋白呈不可溶表达,在菌体内以不溶性的包涵体形式存在。 展开更多
关键词 白细胞介素18 基因克隆 原核表达 猪
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猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化 被引量：1
4
作者 裴仉福 陈瑞爱 +5 位作者 温纳相 唐秀英 唐满华 朱文冠 李琳 程含波 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期842-846,共5页
以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过KpnⅠ+SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c-pIL-18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接... 以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过KpnⅠ+SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c-pIL-18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接正确。之后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS-PAGE分析,在分子质量约为33 ku处出现了预期的目的蛋白。用8 mol/L脲对表达产物变性,经Ni2+-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。Western-blot分析证实,纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪白细胞介素-18基因 原核表达 蛋白纯化
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几种鸡新城疫-减蛋综合征二联灭活苗免疫效果比较试验
5
作者 裴仉福 陈瑞爱 +3 位作者 唐秀英 朱文冠 李琳 程含波 《动物医学进展》 CSCD 2006年第11期87-89,共3页
用自制的鸡新城疫-减蛋综合征二联油乳剂灭活苗接种140日龄的商品蛋鸡,并以其他公司及进口的同种二联油苗、自制的ND单苗和EDS76单苗作对照,抽测不同免疫时期鸡血清,测定各种疫苗接种后ND和EDS76HI抗体消长规律。结果表明,自制二联灭活... 用自制的鸡新城疫-减蛋综合征二联油乳剂灭活苗接种140日龄的商品蛋鸡,并以其他公司及进口的同种二联油苗、自制的ND单苗和EDS76单苗作对照,抽测不同免疫时期鸡血清,测定各种疫苗接种后ND和EDS76HI抗体消长规律。结果表明,自制二联灭活苗与国外某公司生产的ND-EDS76二联灭活疫苗相当,EDS76抗体和ND抗体的增长曲线无明显差异。 展开更多
关键词 新城疫 减蛋综合征 二联油乳剂灭活疫苗 免疫效果
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