目的:建立佛波酯(PMA)诱导人中性粒细胞NETS形成的方法,并研究NETS的结构组成。方法:提取人中性粒细胞,使用10、30、90 n M的PMA分别刺激细胞2、3、4 h,采用核酸染料sytox green染色后,通过共聚焦显微镜检测和比较各组NETS的形成情况,...目的:建立佛波酯(PMA)诱导人中性粒细胞NETS形成的方法,并研究NETS的结构组成。方法:提取人中性粒细胞,使用10、30、90 n M的PMA分别刺激细胞2、3、4 h,采用核酸染料sytox green染色后,通过共聚焦显微镜检测和比较各组NETS的形成情况,并通过活性氧(ROS)探针对NETS进行荧光染色,对弹性蛋白酶(Elastase)、髓过氧化物酶(MPO)和组蛋白H3(Histone H3)进行免疫荧光染色。结果:PMA低于30 n M刺激细胞4 h都不会产生NETS,90 n M刺激3 h就会形成NETS,使用90 n M刺激中性粒细胞4 h后,其形成的NETS含量最高,显著高于30 n M刺激4 h及90 n M刺激3h(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示NETS结构上含有大量ROS和Elastase,含有少量MPO,几乎不含Histone H3。结论:90 n M PMA刺激中性粒细胞4 h可促进NETS形成,其含有大量ROS和Elastase。展开更多
目的探讨病原相关模式分子（PAMPs）对抗体诱导的关节炎（CAIA）样小鼠模型建立的影响。方法 7~8周龄Balb/c雌鼠,第0天使用抗体混合物诱导,第3天使用LPS（TLR4激动剂）或Cp G ODN 1826（TLR9激动剂）激发,每天定时观察四肢关节发病情况...目的探讨病原相关模式分子（PAMPs）对抗体诱导的关节炎（CAIA）样小鼠模型建立的影响。方法 7~8周龄Balb/c雌鼠,第0天使用抗体混合物诱导,第3天使用LPS（TLR4激动剂）或Cp G ODN 1826（TLR9激动剂）激发,每天定时观察四肢关节发病情况并进行关节评分;小鼠腹腔注射O111：B4和O55：B5,绘制生存曲线进行毒性分析;ELISA检测PAMPs刺激小鼠巨噬细胞后IL-6、TNF-α的分泌水平;鲎实验定量检测相同浓度下O111：B4和O55：B5的有效活性。结果 PAMPs成功激发CAIA模型炎症,其中O55：B5低死亡率、高成模率;O111：B4的毒性强于O55：B5;O55：B5的炎症因子分泌量显著高于O111：B4和Cp G ODN 1826（P〈0.01）;O111：B4的有效活性显著高于O55：B5（P〈0.01）。结论低毒高致炎性的O55：B5激发模型效果最佳,说明PAMPs能够影响建模效果,而低毒高致炎性PAMPs适合该模型的激发。展开更多
文摘目的:建立佛波酯(PMA)诱导人中性粒细胞NETS形成的方法,并研究NETS的结构组成。方法:提取人中性粒细胞,使用10、30、90 n M的PMA分别刺激细胞2、3、4 h,采用核酸染料sytox green染色后,通过共聚焦显微镜检测和比较各组NETS的形成情况,并通过活性氧(ROS)探针对NETS进行荧光染色,对弹性蛋白酶(Elastase)、髓过氧化物酶(MPO)和组蛋白H3(Histone H3)进行免疫荧光染色。结果:PMA低于30 n M刺激细胞4 h都不会产生NETS,90 n M刺激3 h就会形成NETS,使用90 n M刺激中性粒细胞4 h后,其形成的NETS含量最高,显著高于30 n M刺激4 h及90 n M刺激3h(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示NETS结构上含有大量ROS和Elastase,含有少量MPO,几乎不含Histone H3。结论:90 n M PMA刺激中性粒细胞4 h可促进NETS形成,其含有大量ROS和Elastase。
文摘目的探讨病原相关模式分子（PAMPs）对抗体诱导的关节炎（CAIA）样小鼠模型建立的影响。方法 7~8周龄Balb/c雌鼠,第0天使用抗体混合物诱导,第3天使用LPS（TLR4激动剂）或Cp G ODN 1826（TLR9激动剂）激发,每天定时观察四肢关节发病情况并进行关节评分;小鼠腹腔注射O111：B4和O55：B5,绘制生存曲线进行毒性分析;ELISA检测PAMPs刺激小鼠巨噬细胞后IL-6、TNF-α的分泌水平;鲎实验定量检测相同浓度下O111：B4和O55：B5的有效活性。结果 PAMPs成功激发CAIA模型炎症,其中O55：B5低死亡率、高成模率;O111：B4的毒性强于O55：B5;O55：B5的炎症因子分泌量显著高于O111：B4和Cp G ODN 1826（P〈0.01）;O111：B4的有效活性显著高于O55：B5（P〈0.01）。结论低毒高致炎性的O55：B5激发模型效果最佳,说明PAMPs能够影响建模效果,而低毒高致炎性PAMPs适合该模型的激发。
