禽致病性大肠杆菌血清型、进化分群及毒力基因的分子流行病学调查 被引量：22

1

作者 王瑶 张耀东 +10 位作者 易正飞 信素华 陶程琳 李妍 李涛 祁晶晶 田明星 丁铲 于圣青 张焕容 王少辉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1159-1166,共8页

为了解禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行特点,从华东等地区分离鉴定210株APEC菌株,然后检测其血清型、系统进化分群及毒力基因,并分析毒力因子与血清型、系统进化分群之间的关联性。血清型检测结果显示,O78、O1、O2为流行血清型。通过... 为了解禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行特点,从华东等地区分离鉴定210株APEC菌株,然后检测其血清型、系统进化分群及毒力基因,并分析毒力因子与血清型、系统进化分群之间的关联性。血清型检测结果显示,O78、O1、O2为流行血清型。通过系统进化分群分析发现A、B1、B2及D群比例分别为21.90%、20.00%、31.90%、21.90%。毒力基因检测结果显示,fimC、mat及ibeB基因检出率为90%以上,papC、neuC、vat、ibeA检出率低于22%,且所有分离株至少含有4个毒力基因。关联分析发现,毒力基因irp2、ibeA、neuC、vat及ETT2在特定血清型中的分布较高,而papC、tsh、irp2、neuC、vat及ibeA在B2进化分群较高。结果表明,华东等地区APEC携带多种毒力基因,毒力基因分布与特定血清型及系统进化分群具有关联性,为了解当地的APEC优势流行菌株及防控提供了参考。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 血清型 系统进化分群 毒力基因

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噬菌体疗法预防细菌性感染的研究进展及发展方向 被引量：18

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作者 陶程琳 王少辉 +12 位作者 张耀东 易正飞 信素华 王瑶 李妍 AFAYIBO Dossêh Jean Apotre 朱红 李涛 祁晶晶 田明星 丁铲 高崧 于圣青 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1167-1175,共9页

由于抗生素的不合理使用,引起了细菌多重耐药性、药物残留、食品安全、环境菌群不平衡等问题,严重威胁人类及动物的健康。因此,寻找新型抗菌药物及治疗方案已成为当前的研究重点。噬菌体是感染细菌、真菌等微生物的病毒,自发现伊始便用... 由于抗生素的不合理使用,引起了细菌多重耐药性、药物残留、食品安全、环境菌群不平衡等问题,严重威胁人类及动物的健康。因此,寻找新型抗菌药物及治疗方案已成为当前的研究重点。噬菌体是感染细菌、真菌等微生物的病毒,自发现伊始便用于治疗细菌感染。与传统抗生素相比,噬菌体具有分布广、易筛选、高度的宿主专一性、增殖能力强、安全性高、研发成本低等优势。随着多重耐药菌的广泛流行,噬菌体治疗细菌感染重新引起了人们的重视。本文简述了噬菌体的生物学特性、噬菌体疗法在预防细菌感染的应用及噬菌体研究发展方向,以期为噬菌体疗法预防细菌性感染提供参考。 展开更多

关键词 噬菌体 细菌性感染 噬菌体疗法 裂解酶

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血清肿瘤标志物联合检测在胆囊癌诊断中的临床意义 被引量：11

3

作者 王强 祁晶晶 胡兰英 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第1期106-107,共2页

目的研究血清糖类抗原CA19-9、癌胚抗原(CEA)在胆囊癌诊断中的价值,以筛选适合的血清肿瘤标志物组合,用于提高胆囊癌诊断的准确率。方法对136例体检健康者、131例胆囊良性疾病患者、100例胆囊癌患者进行CA19-9、CEA检测,分析单个肿瘤标... 目的研究血清糖类抗原CA19-9、癌胚抗原(CEA)在胆囊癌诊断中的价值,以筛选适合的血清肿瘤标志物组合,用于提高胆囊癌诊断的准确率。方法对136例体检健康者、131例胆囊良性疾病患者、100例胆囊癌患者进行CA19-9、CEA检测,分析单个肿瘤标志物和两种肿瘤标志物联合检测的差异。结果健康对照组和胆囊良性疾病组CA19-9、CEA水平均低于胆囊癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。健康对照组和胆囊良性疾病组CA19-9、CEA测定阳性率均低于胆囊癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测阳性率为64.0%,高于任一单项检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CA19-9、CEA在胆囊癌诊断中具有较高的价值,联合检测优于单项检测,对胆囊癌诊断具有重要的临床意义。 展开更多

关键词 胆囊癌 糖类抗原19-9 癌胚抗原 联合检测

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滑液支原体NADH氧化酶的酶学活性及亚细胞定位研究 被引量：10

4

作者 李浩然 祁晶晶 +3 位作者 王宇 尚原冰 王桂军 于圣青 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期801-812,共12页

【背景】许多研究表明,支原体的NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)不仅在胞浆中发挥生物酶学功能,也存在于细胞膜上发挥黏附宿主细胞功能。【目的】对滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的NOX进行酶学活性及亚细胞定位研究,分析其在MS致病... 【背景】许多研究表明,支原体的NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)不仅在胞浆中发挥生物酶学功能,也存在于细胞膜上发挥黏附宿主细胞功能。【目的】对滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的NOX进行酶学活性及亚细胞定位研究,分析其在MS致病过程中的潜在作用。【方法】对MS的NOX蛋白进行原核表达、纯化,然后对重组MSNOX(rMSNOX)的酶学活性及影响酶活的条件进行研究,测定其酶比活力、米氏常数及最大反应速率,接着用MS阳性血清及制备的rMSNOX兔多克隆抗体,分别与rMSNOX蛋白及MS全菌、膜蛋白和胞浆蛋白进行Western blotting反应,鉴定rMSNOX的免疫原性及其在MS中的分布情况。【结果】在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达rMSNOX蛋白,相对分子质量约为53 kD,并获得纯化的rMSNOX蛋白;酶活测定显示rMSNOX蛋白的酶比活力为14.17 IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5,双倒数法求得rMSNOX的最大反应速率Vmax为21.8μmol/(L·min),米氏常数Km(NADH)为244.0μmol/L;rMSNOX蛋白与MS阳性血清特异性结合,证明具有良好的免疫原性;亚细胞定位研究表明NOX蛋白主要存在于MS的胞浆中,细胞膜上有少量的分布。【结论】首次证实MS的NOX不仅具有NADH氧化酶活性,也是MS具有免疫原性的膜蛋白,为进一步探索NOX在MS致病过程中的作用提供了分子基础。 展开更多

关键词 滑液支原体 NADH氧化酶 酶学活性 免疫原性 亚细胞定位

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基于脂蛋白P80的滑液支原体抗体ELISA检测方法的建立及应用 被引量：7

5

作者 王宇 李浩然 +6 位作者 温政 尚原冰 刘婷 丁铲 高崧 祁晶晶 于圣青 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期512-524,共13页

【目的】研究滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS)脂蛋白P80的免疫反应性及其在MS血清抗体ELISA检测中的应用。【方法】对MSP80的氨基酸序列进行生物信息学分析、原核表达和纯化,并用免疫印迹法分析其与6种不同MS分离株阳性血清的免疫... 【目的】研究滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS)脂蛋白P80的免疫反应性及其在MS血清抗体ELISA检测中的应用。【方法】对MSP80的氨基酸序列进行生物信息学分析、原核表达和纯化,并用免疫印迹法分析其与6种不同MS分离株阳性血清的免疫反应性以及与其他禽病原血清的交叉反应性;运用纯化的MS P80表达蛋白作为包被抗原建立了MS血清抗体的间接ELISA检测方法,对其敏感性和重复性进行检测;比较检测了与美国爱德士检测试剂盒对50份临床血清样品的阳性符合率。【结果】生物信息学分析预测MS P80蛋白为脂蛋白且含有信号肽,其在MS种内同源性高达98%-100%,与其他种属P80蛋白同源性在25%-34%之间,成功表达和纯化了MS P80重组蛋白(rMS P80);Western blotting分析表明纯化的rMS P80具有良好的免疫反应性和特异性;运用rMS P80建立的MS血清ELISA抗体检测方法可对不同株MS阳性血清进行抗体效价检测,而对其他禽病原阳性血清均无交叉反应性;该检测方法的批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,重复性良好;与美国IDEXX检测试剂盒比较,本文建立的ELISA抗体检测方法敏感性更高,阳性符合率为75%,阴性符合率为89.47%,总样本符合率为86%。【结论】MS P80具有较好的免疫反应性、种内保守性和种间特异,并且可用作MS抗体检测的靶标抗原。 展开更多

关键词 脂蛋白 滑液支原体 免疫反应性 间接ELISA

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禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoS_AH50的分离鉴定、生物学特性及全基因组分析 被引量：6

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作者 姚澜 张贝贝 +8 位作者 王芷洋 郭伟奇 王帝 王欣宇 胡剑刚 祁晶晶 田明星 李海花 王少辉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1568-1577,共10页

为给噬菌体防控禽大肠杆菌病提供参考和依据,以禽致病性大肠杆菌为宿主菌,利用双层琼脂平板法从鸡场粪便样品中分离纯化禽致病性大肠杆菌噬菌体,对其形态、裂解谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、p H和温度稳定性、体外抑菌能力及... 为给噬菌体防控禽大肠杆菌病提供参考和依据,以禽致病性大肠杆菌为宿主菌,利用双层琼脂平板法从鸡场粪便样品中分离纯化禽致病性大肠杆菌噬菌体,对其形态、裂解谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、p H和温度稳定性、体外抑菌能力及抑制生物被膜形成能力进行测定,并通过全基因组测序分析其基因组特征。结果显示,分离到1株裂解性禽致病性大肠杆菌噬菌体v B_EcoS_AH50,透射电镜观察显示其属于有尾噬菌体目长尾噬菌体科。v B_EcoS_AH50可特异性裂解O1和O2血清型大肠杆菌;MOI为1;潜伏期和爆发期均为20 min,爆发量约为76 PFU/cell;在4~50℃和pH值在3~11的范围内可保持较强的裂解能力,且在室温下能稳定存活4周。在MOI分别为0.01、0.1和1的条件下,该噬菌体能够有效抑制大肠杆菌生长及形成生物被膜。全基因组测序发现,v B_EcoS_AH50基因组全长为37 268 bp,不含有与毒力因子、毒素、耐药和溶源性相关基因。BLASTn比对显示,该噬菌体全基因组序列与噬菌体PC2最为相近,具有94.56%的一致性和94%的覆盖率。基于噬菌体末端酶大亚基构建的系统发育树显示,v B_EcoS_AH50与噬菌体v B_EcoS_011D5的亲缘关系最近。结果表明,噬菌体v B_EcoS_AH50可特异性裂解大肠杆菌,裂解能力强、耐受性高、安全性好,提示其在防治禽大肠杆菌病方面均有潜在应用价值。 展开更多

关键词 禽致病性大肠杆菌 噬菌体 生物学特性 全基因组分析

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鸭疫里默氏杆菌耐药机制研究进展 被引量：5

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作者 刘玲俐 赵亚楠 +5 位作者 靳亚洁 祁晶晶 田明星 王少辉 李涛 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第4期206-210,共5页

鸭疫里默氏杆菌作为影响我国乃至世界家鸭养殖业的重要细菌性病原体之一,因抗生素长期使用等多个因素使耐药菌株的检出率逐年上升。其耐药机制主要包括外排泵的外排,细胞膜通透性的改变,基因突变、灭活酶或钝化酶的产生、修饰酶的产生... 鸭疫里默氏杆菌作为影响我国乃至世界家鸭养殖业的重要细菌性病原体之一,因抗生素长期使用等多个因素使耐药菌株的检出率逐年上升。其耐药机制主要包括外排泵的外排,细胞膜通透性的改变,基因突变、灭活酶或钝化酶的产生、修饰酶的产生等。本文依据近年来国内外学者研究报道,就鸭疫里默氏杆菌如何对抗菌药物产生耐药性进行总结论述。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 耐药机制 抗菌药物

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广东规模化鸡场死鸡胚中鸡毒支原体的分离鉴定、致病性及药物敏感性

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作者 陈玥彤 刘晓涵 +9 位作者 王芷洋 赵宇馨 周铁忠 胡增金 朱悦 王少辉 田明星 丁思羽 祁晶晶 于圣青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期290-299,共10页

旨在从广东某规模化鸡场死鸡胚进行鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的分离,并进行遗传进化分析、致病性及药物敏感性研究。本研究从广东某规模化鸡场的带菌死胚卵黄组织中分离禽支原体,通过菌落观察、血清学试验、16S rRNA支... 旨在从广东某规模化鸡场死鸡胚进行鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的分离,并进行遗传进化分析、致病性及药物敏感性研究。本研究从广东某规模化鸡场的带菌死胚卵黄组织中分离禽支原体,通过菌落观察、血清学试验、16S rRNA支原体通用引物序列鉴定等方法,对分离的菌株进行种属鉴定,同时将分离的毒株对鸡胚和SPF鸡进行攻毒试验及抗菌药物敏感性试验。结果显示:显微镜下菌落呈典型的“荷包蛋”状。平板凝集试验显示其与MG阳性血清有凝集反应,与MS阳性血清不反应;16S rRNA序列测序发现各分离株与MG相似性达99.9%,因此确定分离株为MG。将各分离株感染7日龄SPF鸡胚,结果显示感染鸡胚大多于临近出壳时死亡;感染3周龄的SPF鸡,3周后解剖发现鸡气囊发生显著病理变化,说明其具有较强致病力;药物敏感性试验结果显示,5株分离株对盐酸沃尼妙林、多西环素、泰万菌素及泰妙菌素有较高敏感性,对替米考星、泰乐菌素、恩诺沙星、红霉素、吉他霉素、林可霉素呈现出不同程度耐药性。综上,从广东某规模化鸡场死鸡胚中成功分离到5株MG分离株,各分离株均可引起红细胞凝集,导致鸡胚死亡,对SPF鸡可引起典型的气囊炎症状,且对多种药物存在不同程度耐药性。本研究为临床MG的分离鉴定及用药选择提供了可参考的技术方法及指导,为MG攻毒模型建立提供了研究基础。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 死鸡胚 分离鉴定 致病性 药物敏感性

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海罗净现场发生次溴酸对家禽常见致病菌杀灭效果分析

9

作者 张贝贝 张耀东 +10 位作者 朱红 姚澜 王瑶 易正飞 祁晶晶 田明星 李海花 张春锦 陈世建 于圣青 王少辉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期42-49,共8页

海罗净溴树脂是一种新型杀菌滤材,由惰性多孔高分子与氧化性溴结合而成,当水流过时,可形成具有杀菌能力的次溴酸溶液。本研究旨在评估海罗净现场发生次溴酸对禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌等家禽常见致病菌的杀灭效... 海罗净溴树脂是一种新型杀菌滤材,由惰性多孔高分子与氧化性溴结合而成,当水流过时,可形成具有杀菌能力的次溴酸溶液。本研究旨在评估海罗净现场发生次溴酸对禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌等家禽常见致病菌的杀灭效果。通过多种组合建立次溴酸杀灭家禽典型致病菌的评价技术,分别以致病菌与次溴酸(根据试验等比例调整)混匀,然后评价不同浓度、不同作用时间、不同pH值次溴酸对不同致病菌的杀灭效果。结果显示:2 mg/L(均以Br_(2)计)海罗净现场发生次溴酸的杀菌效果非常好,与10^(4)~10^(7)CFU/mL的禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌作用1 min即可将其全部杀灭,杀菌率为100%。0.5~1.5 mg/L海罗净现场发生次溴酸作用1 min也可全部杀灭10^(4)~10^(7)CFU/mL的禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌。然而,0.2 mg/L次溴酸对不同致病菌的杀菌效果有所不同,完全杀灭10^(7)CFU/mL禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌的时间分别为1 min、10 min和5 min。将水pH值调整为8.5(pH8.5原水),基本不影响海罗净现场发生次溴酸的杀菌效果。本研究通过评价次溴酸对家禽常见致病菌的杀灭效果,为海罗净现场发生次溴酸净水消毒方法的临床应用提供参考依据。 展开更多

关键词 次溴酸 致病菌 杀菌 评价

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一种诱导表达绿色荧光蛋白穿梭质粒的构建及其在荧光示踪中的应用

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作者 左东 李子晨 +5 位作者 尹伊 胡海 王少辉 祁晶晶 田明星 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期25-31,共7页

细菌的荧光标记是一种重要的常用实验标记技术,用于研究细菌生理生化特性、感染宿主体内示踪、感染细胞示踪等研究。细菌的荧光标记通常通过质粒表达荧光蛋白来实现,而不同类型的细菌,由于菌种特性不同,构建的质粒往往不能通用。本研究... 细菌的荧光标记是一种重要的常用实验标记技术,用于研究细菌生理生化特性、感染宿主体内示踪、感染细胞示踪等研究。细菌的荧光标记通常通过质粒表达荧光蛋白来实现,而不同类型的细菌,由于菌种特性不同,构建的质粒往往不能通用。本研究构建了一种可诱导表达增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒pBT-iEGFP,该质粒可通过添加无水四环素诱导表达绿色荧光蛋白。诱导表达和传代稳定性试验表明,pBT-iEGFP质粒可在禽致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和马耳他布鲁菌中成功诱导表达绿色荧光蛋白,在五代盲传中该质粒能在细菌中稳定遗传。胞内布鲁菌诱导表达试验证实,pBT-iEGFP质粒可成功示踪细胞感染过程中活的布鲁菌。总之,本研究构建的pBT-iEGFP质粒可作为细菌的荧光示踪研究工具,应用于多种实验研究。 展开更多

关键词 诱导表达质粒 绿色荧光蛋白 大肠杆菌 沙门菌 布鲁菌

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稀土纳米材料与植物相互作用研究进展 被引量：7

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作者 崔静 祁晶晶 +2 位作者 贺凤至 张宇 魏正贵 《中国稀土学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期141-153,I0001,共14页

稀土纳米材料被广泛使用,目前已大量进入环境,并可能对环境产生负面影响。植物是生态系统的基本组成部分,它与稀土纳米材料的相互作用应受到更为广泛的关注。稀土纳米材料被认为可进入植物体内,但途径尚存在争议;这类材料被认为具有植... 稀土纳米材料被广泛使用,目前已大量进入环境,并可能对环境产生负面影响。植物是生态系统的基本组成部分,它与稀土纳米材料的相互作用应受到更为广泛的关注。稀土纳米材料被认为可进入植物体内,但途径尚存在争议;这类材料被认为具有植物毒性,但致毒机制尚不明确。稀土纳米材料还能产生代际效应、食物链传递过程等,关系着食品安全。就近年来植物吸收、迁移、转化稀土纳米材料进行了综述,同时评述了稀土纳米材料的植物毒性效应、代际效应及食物链传递机制。 展开更多

关键词 稀土纳米材料 植物 吸收 迁移 毒性效应

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滑液支原体醛缩酶的亚细胞定位及免疫原性 被引量：5

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作者 王宇 祁晶晶 +4 位作者 刘婷 温政 闫遵祥 高崧 于圣青 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期780-789,共10页

【背景】滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染能够引起鸡和火鸡的气囊炎、关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘滑膜炎等。有研究表明,许多支原体中与代谢相关的酶类不仅分布在细胞质,也分布于细胞膜表面,通过结合宿主细胞的胞外基质蛋白,协... 【背景】滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染能够引起鸡和火鸡的气囊炎、关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘滑膜炎等。有研究表明,许多支原体中与代谢相关的酶类不仅分布在细胞质,也分布于细胞膜表面,通过结合宿主细胞的胞外基质蛋白,协助病原菌黏附入侵宿主细胞。已有报道牛支原体(Mycoplasma bovis)和鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)的醛缩酶(Fructose-bisphosphate aldolase,FBA)分布在膜蛋白和胞浆蛋白中,而MS的FBA蛋白还未见相关研究。【目的】对MSFBA蛋白进行生物信息学分析、原核表达、免疫原性分析及亚细胞定位检测,为进一步探索MS代谢相关酶类的生物学功能奠定基础。【方法】通过分析软件PSORTb、SignalP 4.1 Server和TMHMM Server在线预测MSFBA的亚细胞定位、信号肽及跨膜区,并用BLASTn和MEGA 5.0进行同源比对及进化树分析;通过Overlap PCR点突变扩增MS的fba全基因序列,连接表达载体pET-28a(+)并进行原核表达及纯化,获得纯化后的重组MSFBA(rMSFBA)蛋白;用MS阳性血清进行Westernblot鉴定rMSFBA的免疫原性;用纯化的rMSFBA蛋白制备兔多克隆抗体,与MS全菌蛋白、膜蛋白及胞浆蛋白进行Western blot分析,同时对MS全菌进行悬浮免疫荧光分析,检测MSFBA的膜定位情况。【结果】生物信息分析预测MSFBA分布在细胞质中,无信号肽,无跨膜区,在MS种内相似性高达99%,与其他种属FBA相似性在61%-78%之间,进化树显示其与牛鼻支原体(Mycoplasma bovirhinis)、仓鼠支原体(Mycoplasm acricetuli)等的FBA蛋白进化关系较近,与精氨酸支原体(Mycoplasma arginini)、人型支原体(Mycoplasma hominis)等的FBA蛋白进化关系较远;表达rMSFBA蛋白并纯化,经测定其相对分子质量大小约为33kD;rMSFBA能与MS阳性鸡血清特异性结合,证实其具有较好的免疫原性;Western blot显示抗rMSFBA的兔血清能与MS全菌蛋白和胞浆蛋白反应,而与膜蛋白不反应,说明MSFBA蛋白� 展开更多

关键词 滑液支原体 醛缩酶 原核表达 亚细胞定位 免疫原性

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鸡滑液支原体磷酸甘油酸激酶的克隆表达及酶学活性测定 被引量：5

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作者 尚原冰 祁晶晶 +7 位作者 王宇 李浩然 刘晓涵 王少辉 李涛 田明星 于圣青 周铁忠 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第3期71-79,共9页

磷酸甘油酸激酶(PGK)是生物进行糖酵解的关键酶,目前未见关于鸡滑液支原体(MS)PGK的相关研究报道。本实验采用Overlap PCR方法对MS的pgk基因进行点突变扩增,然后连接至pET-28a(+)表达载体并在大肠杆菌BL21中表达,纯化获得重组MSPGK(rMSP... 磷酸甘油酸激酶(PGK)是生物进行糖酵解的关键酶,目前未见关于鸡滑液支原体(MS)PGK的相关研究报道。本实验采用Overlap PCR方法对MS的pgk基因进行点突变扩增,然后连接至pET-28a(+)表达载体并在大肠杆菌BL21中表达,纯化获得重组MSPGK(rMSPGK)蛋白,然后对纯化后的rMSPGK蛋白的酶学活性进行测定,包括温度、pH及不同底物对酶活的影响,并计算其酶比活力、米氏常数及最大反应速率。结果显示:最终获得了纯化的rMSPGK蛋白,其相对分子质量约为45 kDa;酶学活性测定显示,rMSPGK蛋白的酶比活力为100.70 IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5;双倒数法求得rMSPGK蛋白相对于3-PGA的最大反应速率Vmax为370.37μmol/(L?min),米氏常数Km值为3.88 mmol/L;相对于ATP的最大反应速率Vmax为357.14μmol/(L?min),Km值为0.25 mmol/L。综上,本实验成功地表达了MS的PGK蛋白,并获得了酶活力较高的rMSPGK蛋白,为进一步研究鸡滑液支原体代谢和致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡滑液支原体 磷酸甘油酸激酶 原核表达 酶学活性

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心理护理在胎膜早破产妇中的应用效果观察

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作者 祁晶晶 《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》 2024年第8期0188-0191,共4页

讨论心理护理在胎膜早破产妇中的应用效果。方法 选择100例胎膜早破产妇,分为两组,分别使用常规护理,心理护理。结果 与对照组相比,实验组的焦虑评分较低(22.31±1.57<43.59±1.72)(P<0.05),抑郁评分较低(25.36±1.31... 讨论心理护理在胎膜早破产妇中的应用效果。方法 选择100例胎膜早破产妇,分为两组,分别使用常规护理,心理护理。结果 与对照组相比,实验组的焦虑评分较低(22.31±1.57<43.59±1.72)(P<0.05),抑郁评分较低(25.36±1.31<45.22±1.37)(P<0.05),剖宫产率较低(10.00%<38.00%)(P<0.05)以及自然分娩率较高(90.00%>62.00%)(P<0.05),并发症发生率较低(10.00%<26.00%)(P<0.05),心理疏导(9.59±0.52>8.51±0.37)、治疗性护理(9.78±0.31>8.13±0.33)、健康教育(9.77±0.19>7.89±0.33)、治疗环境(9.87±0.11>8.57±0.19)以及礼仪服务(9.68±0.51>8.06±0.53)等护理满意度较高(P<0.05),生活质量评分较高(96.33±1.21>80.22±1.55)(P<0.05)。结论 将心理护理应用在胎膜早破产妇中应用,可缓解负面情绪,提高自然分娩率,具有重要的临床价值。 展开更多

关键词 心理护理 胎膜早破产妇 应用效果

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产后康复仪联合袋鼠式护理模式对剖宫产初产妇的临床应用效果

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作者 祁晶晶 《中国科技期刊数据库 医药》 2024年第10期0156-0159,共4页

分析产后康复仪联合袋鼠式护理模式对剖宫产初产妇不良情绪、产后疼痛及产后恢复的临床干预价值。方法 挑选我院于2022年2月到2023年2月接受的剖宫产初产妇80位作为实验对象,利用双盲法进行均分。参照组施以常规护理干预,实验组予以袋... 分析产后康复仪联合袋鼠式护理模式对剖宫产初产妇不良情绪、产后疼痛及产后恢复的临床干预价值。方法 挑选我院于2022年2月到2023年2月接受的剖宫产初产妇80位作为实验对象,利用双盲法进行均分。参照组施以常规护理干预,实验组予以袋鼠式护理及产后康复仪。观察两组患者产后泌乳及母乳喂养状况、干预前后的母乳喂养效能、子宫复旧状况以及自护技能评分实行比对。结果 实验组患者产后泌乳及母乳喂养状况优异于参照组,数据差异较大(P<0.05);与实验组相比,参照组患者干预后的母乳喂养效能、子宫复旧状况较差,统计学软件分析后有意义(P<0.05);参照组患者干预后自护技能评分远低于实验组(P<0.05)。结论 针对选择剖宫产的初产妇实施产后康复仪联合袋鼠式护理模式的临床价值理想,能够有效改善患者的产后泌乳及母乳喂养状况,显著提升母乳喂养效能及子宫复旧状况,充分增强其自护技能评分,临床上可以借鉴广泛推荐使用。 展开更多

关键词 袋鼠式护理 剖宫产初产妇 产后康复仪 干预价值

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Vlog短视频对文化审美的影响力——以自我呈现与他者认同为例

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作者 祁晶晶 《东方娱乐周刊》 2024年第4期172-174,共3页

在当下互联网传播格局中,短视频急速发展,受众规模极大。其中,Vlog 短视频占据相当重要的位置,不断引发人们对于其文化审美的关注与思考。为了探究 Vlog 短视频对文化审美的影响力,文章以创作者的自我呈现和他者的认同为例,着重探讨了 V... 在当下互联网传播格局中,短视频急速发展,受众规模极大。其中,Vlog 短视频占据相当重要的位置,不断引发人们对于其文化审美的关注与思考。为了探究 Vlog 短视频对文化审美的影响力,文章以创作者的自我呈现和他者的认同为例,着重探讨了 Vlog 短视频对文化审美的影响机制。研究结果表明,Vlog 短视频对文化审美的影响力主要通过对创作者对形式真的追求、对意象善的创造、对造型美的呈现来完成文化审美的建构,同时通过视觉、听觉和情感体验塑造他者的审美认知,对他者的文化传承与审美有着思想启发与教化作用,这不仅扩大了文化审美的受众群体,也促进了文化审美观点的交流与碰撞。 展开更多

关键词 视频博客 文化审美 自我呈现 他者认同

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检测大肠杆菌内c-di-GMP水平的双荧光素报告质粒的构建及应用

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作者 张贝贝 胡剑刚 +8 位作者 王欣宇 郭伟奇 姚澜 王芷洋 王帝 祁晶晶 田明星 鲍衍清 王少辉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4814-4822,共9页

细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调... 细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调控方式、荧光报告基因等设计引物,通过重叠聚合酶链反应(overlap polymerase chain reaction,overlap PCR)和同源重组酶构成基于核糖开关的双荧光素报告质粒pAmCherry-Vc2EGFP(pACVcE),然后构建c-di-GMP代谢基因过表达菌株和缺失菌株,利用pACVcE检测大肠杆菌内c-di-GMP水平。【结果】Overlap PCR扩增产物与目的靶序列一致,测序结果证明pACVcE序列正确。表达c-di-GMP合成酶DgcZ的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著升高,而表达c-di-GMP降解酶PdeK的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著降低。禽致病性大肠杆菌的胞内c-di-GMP水平检测发现c-di-GMP降解酶基因pdeK缺失后胞内的c-di-GMP水平显著升高。【结论】本研究构建了基于核糖开关的双荧光素报告质粒,可方便、快速检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平。 展开更多

关键词 环二鸟苷酸 核糖开关 双荧光素报告质粒 检测

原文传递

产NDM-1型碳青霉烯酶奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析

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作者 王芷洋 彭浩恒 +9 位作者 郭伟奇 王帝 张贝贝 王欣宇 胡剑刚 祁晶晶 田明星 鲍衍清 李海花 王少辉 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2023年第12期1554-1562,共9页

由金属β-内酰胺酶介导的耐碳青霉烯类抗生素的细菌在全球范围内蔓延,blaNDM-1是其中典型且关键的一种。奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)广泛分布于自然环境以及哺乳动物肠道内,可携带多种耐药基因,有潜在的人畜共患风险。为了调查奇... 由金属β-内酰胺酶介导的耐碳青霉烯类抗生素的细菌在全球范围内蔓延,blaNDM-1是其中典型且关键的一种。奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)广泛分布于自然环境以及哺乳动物肠道内,可携带多种耐药基因,有潜在的人畜共患风险。为了调查奇异变形杆菌在养禽场内的耐药情况,本研究从浙江、江苏等地采集病料,通过选择性培养基分离、生化实验、PCR方法鉴定奇异变形杆菌,分析分离株的耐药性,根据耐药性结果检测产碳青霉烯酶耐药基因的携带情况,最后对产NDM-1型碳青霉烯酶分离株进行全基因组测序分析。经过选择性培养基分离、生化实验及PCR检测共鉴定到10株奇异变形杆菌,药物敏感性结果显示,分离株PM01对氟苯尼考、复方新诺明、硝基呋喃、头孢菌素类抗生素耐药,且对碳青霉烯类抗生素耐药;PCR检测显示,PM01株携带blaNDM-1耐药基因。全基因组测序发现blaNDM-1基因位于染色体中,通过线性比对分析显示其与人源大肠杆菌以及肺炎克雷伯菌共享相似的遗传背景。研究结果表明,携带blaNDM-1的奇异变形杆菌可能会导致肠杆菌科细菌间碳青霉烯类耐药性的传播,具有潜在的公共卫生学意义。 展开更多

关键词 奇异变形杆菌 碳青霉烯酶 耐药性 全基因组测序

原文传递

流产布鲁菌LysR家族转录调控子LTTR8缺失株的构建及其生物学特性分析

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作者 李子晨 尹伊 +9 位作者 成志敏 左东 胡海 Hosny Ahmed Abdelgawad 管祥 王少辉 李涛 祁晶晶 田明星 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期7-13,共7页

布鲁菌是一种重要的人畜共患病病原,兼性胞内寄生,无典型毒力因子,毒力相关基因的研究对阐明布鲁菌持续感染的机制具有重要意义。本研究以流产布鲁菌S2308为亲本株,通过同源重组的方法,构建流产布鲁菌LysR家族转录调控子基因bab_RS2467... 布鲁菌是一种重要的人畜共患病病原,兼性胞内寄生,无典型毒力因子,毒力相关基因的研究对阐明布鲁菌持续感染的机制具有重要意义。本研究以流产布鲁菌S2308为亲本株,通过同源重组的方法,构建流产布鲁菌LysR家族转录调控子基因bab_RS24670缺失株ΔlttR8,基于广宿主质粒pBBR1MCS构建成互补株ΔlttR8-Com。免疫印迹试验表明:ΔlttR8为光滑型菌株;体外培养分析发现lttR8缺失不影响布鲁菌的生长;细胞感染试验发现lttR8缺失不影响布鲁菌黏附、入侵细胞和胞内存活的能力。耐受性试验分析发现:lttR8缺失不影响布鲁菌对过氧化氢(H2O2)和多粘菌素B(polymyxin B)的敏感性。小鼠感染试验分析发现lttR8缺失显著减弱流产布鲁菌的毒力。综上所述,本研究发现一个新的与流产布鲁菌致病性相关的转录调控子,为布鲁菌致病机制研究提供参考。 展开更多

关键词 流产布鲁菌 LysR家族转录调控子 lttR8 毒力

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广西地区鸡胚中沙门菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量：3

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作者 信素华 陶程琳 +10 位作者 张耀东 王瑶 李妍 易正飞 田明星 李涛 祁晶晶 丁铲 高崧 王少辉 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期64-70,共7页

为了解广西地区鸡胚中沙门菌的流行情况及耐药现状,本研究对广西某些鸡场送检的病死鸡胚进行沙门菌的分离鉴定。然后利用PCR方法鉴定沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并检测其耐药性。结果显示,经选择性培养基和PCR鉴定分离到18株... 为了解广西地区鸡胚中沙门菌的流行情况及耐药现状,本研究对广西某些鸡场送检的病死鸡胚进行沙门菌的分离鉴定。然后利用PCR方法鉴定沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并检测其耐药性。结果显示,经选择性培养基和PCR鉴定分离到18株沙门菌,分离率为13.95%(18/129)。血清型鉴定显示:分离株均为鸡白痢沙门菌。毒力基因检测发现shdA基因的分布率只有22.22%,其余15个毒力基因的分布率均为100%。药敏试验结果显示,沙门菌分离株对卡那霉素、庆大霉素、氯霉素、美罗培南、亚胺培南均敏感;但对林可霉素、克林霉素、罗红霉素、红霉素、利福平的耐药率达100%,表明鸡白痢沙门菌的多重耐药现象严重。本研究提示鸡白痢可能是导致鸡胚死亡及孵化率低的原因,因此应严格进行鸡白痢的防控净化工作。 展开更多

关键词 鸡胚 鸡白痢沙门菌 毒力基因 耐药性

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