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从动物毛中提取DNA研究初探 被引量：7
1
作者 郑冬 孔瑾 石绍业 《野生动物》 1996年第2期24-26,共3页
利用蛋白酶Ｋ分解毛发蛋白，并使用酚和氧仿除去蛋白质杂质方法提取毛中ＤＮＡ。结果测量获得的数据和曲线表明：动物脱落毛发以及从保存多年标本获得的毛发均可用来提取到具有一定纯度和数量的ＤＮＡ，完全可以满足聚合酶链式反应（Ｐ... 利用蛋白酶Ｋ分解毛发蛋白，并使用酚和氧仿除去蛋白质杂质方法提取毛中ＤＮＡ。结果测量获得的数据和曲线表明：动物脱落毛发以及从保存多年标本获得的毛发均可用来提取到具有一定纯度和数量的ＤＮＡ，完全可以满足聚合酶链式反应（ＰＣＲ）所需。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 动物 毛发 DNA 提取
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应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌 被引量：7
2
作者 李景鹏 李成梅 +3 位作者 丁乃峥 吴丹 周静 石绍业 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 1997年第1期79-83,共5页
利用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｃｎ，ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌。根据沙门氏菌鞭毛素Ｉ相抗原基因，设计了一对各长２０个碱基的引物，扩增２６９ｂｐ的片段。并用８个标准标沙门氏菌株和３个阴性菌株... 利用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｃｎ，ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌。根据沙门氏菌鞭毛素Ｉ相抗原基因，设计了一对各长２０个碱基的引物，扩增２６９ｂｐ的片段。并用８个标准标沙门氏菌株和３个阴性菌株检查引物特异性，结果完全相符。采用５０μＬ体积，ＮＴＰｓ２００μｍｏｌ，引物各１μｍｏｌ，ｍｇ＋＋３ｍｍｏｌ，Ｔａｑ酶２Ｕ。循环温度为９７℃７ｍｉｎ予变性后；９４℃１ｍｉｎ，６０℃１ｍｉｎ，３５个循环后再延伸７２℃７ｍｉｎ。经电泳分析，灵敏度可达每毫升检出１０４个细胞，经二次扩增后，灵敏度还可提高。实验共检查了３０个可疑样品，检出率明显高于生化检查和免疫学方法检查。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 沙门氏菌 检测
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防御素基因的化学合成及克隆 被引量：2
3
作者 李景鹏 李成梅 +4 位作者 何洪彬 崔仁海 郭荣昌 石绍业 周静 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 1995年第4期383-387,共5页
将防御素基因分成４个寡聚核苷酸片段，采用固相亚磷酰胺法在ＤＮＡ合成仪上化学合成。片段２和４分别用Ｔ＿４多聚核苷酸激酶将５′端磷酸化，４个片段等量混合，用Ｔ＿４ＤＮＡ连接酶连成一个１０９ｂｐ的双股ＤＮＡ片段，其两侧为Ｂ... 将防御素基因分成４个寡聚核苷酸片段，采用固相亚磷酰胺法在ＤＮＡ合成仪上化学合成。片段２和４分别用Ｔ＿４多聚核苷酸激酶将５′端磷酸化，４个片段等量混合，用Ｔ＿４ＤＮＡ连接酶连成一个１０９ｂｐ的双股ＤＮＡ片段，其两侧为ＢａｍＨＩ和ＳａｌⅠ粘性末端。把它与经上述双酶切的质粒ｐＵＣ１９连接，转化大肠杆菌ＤＨＳα。转化株经含Ｘｇａｌ青霉素平板初筛，质粒酶切分析以及ＰＣＲ专一性扩增，证实已获得完整的防御素基因克隆。为进一步表达防御素提供了材料． 展开更多
关键词 防御素基因 化学合成 克隆
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制备高纯度、高产率总RNA的简易方法 被引量：2
4
作者 方晴 刘娣 石绍业 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期35-36,共2页
异硫氰酸胍和氯化物为最有效的蛋白质变性剂。Cox首先用胍盐氯化物提取RNA。chirgwin用强变性剂和异硫氰酸胍从富含RN-ase的组织细胞中提取完整RNA。Han等人证明异硫氰酸胍在低温下提取RNA是有效的,并省去了超速离心忉。Feramisco提出... 异硫氰酸胍和氯化物为最有效的蛋白质变性剂。Cox首先用胍盐氯化物提取RNA。chirgwin用强变性剂和异硫氰酸胍从富含RN-ase的组织细胞中提取完整RNA。Han等人证明异硫氰酸胍在低温下提取RNA是有效的,并省去了超速离心忉。Feramisco提出了结合胍盐与热酚来分离RNA的方法。 展开更多
关键词 核糖核酸 制备
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人类3个多肽基因的人工合成和对人工基因合成意义的探讨
5
作者 石绍业 潘时 +2 位作者 刘虹 范慧奇 周静 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期55-60,共6页
本文报道了胰岛素A,B链基因,人表皮生长因子基因和人α心钠素基因的人工合成。人工合成是在DNA合成仪上完成的,先合成上述基因的平均为60个核苷酸的各寡核苷酸片段,经过对各片段的纯化、磷酸化和连接,得到上述多肽基因。并进行了电泳检... 本文报道了胰岛素A,B链基因,人表皮生长因子基因和人α心钠素基因的人工合成。人工合成是在DNA合成仪上完成的,先合成上述基因的平均为60个核苷酸的各寡核苷酸片段,经过对各片段的纯化、磷酸化和连接,得到上述多肽基因。并进行了电泳检测。人工基因合成的重要意义在于可以正确地、高效地合成基因工程所需的基因,是获得在原核生物中表达的多肽基因的主要途径,并可将重组DNA和表达所需的碱基顺序同时组合在合成的基因中。人工基因合成有广泛的应用前途和价值。 展开更多
关键词 人工基因 合成 人类 多肽基因
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生物素标记犬瘟热病毒DNA探针的制备与纯化
6
作者 林逢生 王永林 +3 位作者 李暐 华育平 周静 石绍业 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第5期101-106,共6页
用以选择犬瘟热病毒RNA的有关碱基顺序,设计DNA探针,并在5′末端偶联一个氨基连接分子(Aminolinkl):5′×AGGGCTCA-GGTAGTCCAGCAATG3′,共23个碱基和一个氨基连接分子。NH_2-DNA探针在DNA合成仪上合成。合成产物同生物素酰氨基已酸... 用以选择犬瘟热病毒RNA的有关碱基顺序,设计DNA探针,并在5′末端偶联一个氨基连接分子(Aminolinkl):5′×AGGGCTCA-GGTAGTCCAGCAATG3′,共23个碱基和一个氨基连接分子。NH_2-DNA探针在DNA合成仪上合成。合成产物同生物素酰氨基已酸盐N—羟琥珀酰亚胺酯(Biotinamidocaproate N-hydroxysuccinimide ester)反应,反应物经高效硅胶薄层板纯化,得到生物素标记犬瘟热病毒DNA探针。 展开更多
关键词 生物素 犬瘟病毒 探针 DNA探针
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