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pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒的构建与鉴定
1
作者 卢晓晴 李蕊 +3 位作者 陈浩明 黎锡贤 王艺 石现丽 《广东医科大学学报》 2024年第2期152-156,共5页
目的构建pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒靶向敲低ZNF703。方法根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区在RNA干扰平台上(broadinstitute.org)设计shRNA的靶向序列,并根据pLKO.1中Age I和EcoR I酶切位点序列设计并合成ZNF703 shRNA的引物;对引物... 目的构建pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒靶向敲低ZNF703。方法根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区在RNA干扰平台上(broadinstitute.org)设计shRNA的靶向序列,并根据pLKO.1中Age I和EcoR I酶切位点序列设计并合成ZNF703 shRNA的引物;对引物进行退火;将pLKO.1质粒进行酶切、胶回收;用T4酶进行连接、转化、涂板,对阳性克隆菌落PCR鉴定和测序鉴定;将构建好的质粒利用慢病毒包装并转染HCT-116细胞系,Q-PCR检测ZNF703的敲低效率。结果成功构建pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒,并且利用病毒包装体系构建ZNF703 shRNAHCT-116细胞系,RT-PCR结果显示设计并构建的pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒可用于有效敲低ZNF703。结论成功构建可用于有效敲低人或鼠源细胞系中ZNF703的pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒。 展开更多
关键词 ZNF703 pLKO.1质粒 SHRNA HCT-116细胞
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plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA质粒的构建与鉴定 被引量：1
2
作者 方梓鹏 卢晓晴 +2 位作者 李志豪 罗伟浩 石现丽 《广东药科大学学报》 CAS 2023年第1期115-121,共7页
目的 构建plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA质粒。方法 根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区设计sgRNA的靶向序列,并在靶序列的两端加上plenti-Crispr V2质粒构建所要求的黏性末端,得到并合成ZNF703sgRNA的引物;对合成的引物进行退火得... 目的 构建plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA质粒。方法 根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区设计sgRNA的靶向序列,并在靶序列的两端加上plenti-Crispr V2质粒构建所要求的黏性末端,得到并合成ZNF703sgRNA的引物;对合成的引物进行退火得到ZNF703 sgRNA双链寡核苷酸片段;将plenti-V2质粒进行BsmB I酶切、胶回收;将ZNF703 sgRNA双链寡核苷酸片段和酶切后胶回收的plenti-Crispr V2骨架片段(12 988 bp)进行连接、转化感受态细胞、挑取阳性克隆、菌落PCR鉴定和酶切鉴定,并进行测序验证。结果 成功构建plenti-Crispr V2ZNF703 sgRNA质粒,并利用plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA成功构建了ZNF703敲除的结肠癌细胞系HCT-116。结论 构建了plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA质粒,并在HCT-116细胞系中验证其敲除效果,为在人源肿瘤细胞中、鼠源细胞系中敲除ZNF703,以及为深入研究ZNF703的生物功能打下基础。 展开更多
关键词 ZNF703 plenti-Crispr V2质粒 肿瘤
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