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人工合成小分子双链RNA通过激活P21蛋白对膀胱癌细胞生长的影响 被引量：7
1
作者 盖强强 汪成合 +3 位作者 陈忠 张庆松 杨为民 叶章群 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期812-816,共5页
目的通过转染人工合成的小分子双链RNA（dsRNA）dsP21-555至膀胱癌细胞系T24和EJ，观察其对膀胱癌细胞生长的作用。方法根据对膀胱癌细胞的不同处理分为3组：阴性对照组[转染随机序列（dsContr01）]，阳性对照组（转染相应的微小RNA即mi... 目的通过转染人工合成的小分子双链RNA（dsRNA）dsP21-555至膀胱癌细胞系T24和EJ，观察其对膀胱癌细胞生长的作用。方法根据对膀胱癌细胞的不同处理分为3组：阴性对照组[转染随机序列（dsContr01）]，阳性对照组（转染相应的微小RNA即miR-370）和实验组（转染dsP21．555）。实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测3组细胞p21mRNA及细胞周期依赖性激酶（CDK）4、CDK-6mRNA的表达；Western印迹法检测P21蛋白和CDK4、CDK6蛋白的表达；流式细胞术测定转染后细胞周期分布；细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力；集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力。结果qPCR结果显示，与转染dsControl相比，转染dsP21—555分别上调T24和EJ细胞中p21mRNA表达至2．46倍（P〈0．01）和2．60倍（P〈0．01）；转染dsP21—555与转染miR-370相比，p21mRNA表达差异无统计学意义（均P〉0．05）。与转染dsControl相比，转染dsP21-555分别使T24和EJ细胞中CDK4mRNA的表达下调43％（P〈0．01）和54％（均P〈0．01），CDK6mRNA的表达下调39％（P〈0．01）和36％（P〈0．01）；转染dsP21—555与转染miR-370相比，CDK4、CDK6mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Western蛋白印迹检测结果验证了组间p21和CDK4、6基因表达的差异。流式细胞术检测显示，与转染＆Control相比，转染miR-370或dsP21—555后，G0／G1期细胞比例明显升高，而S期和G2／M期细胞比例减少，细胞周期被阻滞在G0／G1期。细胞增殖实验结果显示，与转染dsControl相比，转染miR-370或dsP21-555后细胞增殖能力明显下降（均P〈0．05），且转染miR-370与转染dsP21-555间细胞增殖能力差异无统计学意义（P〉0．05）。细胞集落形成实验显示，转染miR-370和dsP21—555形成的集落数量均较转染dsControl少。结论dsP21—555能通过RNA激活作用激活P21蛋白的表达并显著抑制膀胱癌细胞的生长。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 RNA 双链 微RNAS P21 RNA激活
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环状RNA circ-DHRS3在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭能力的影响
2
作者 胡国森 杨凌博 +1 位作者 李小辉 盖强强 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第12期2171-2176,共6页
目的:探讨环状RNA circ-DHRS3在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:应用GEO数据库分析膀胱癌组织中circ-DHRS3的表达水平及其与患者临床分期、生存期的关系。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circ-... 目的:探讨环状RNA circ-DHRS3在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:应用GEO数据库分析膀胱癌组织中circ-DHRS3的表达水平及其与患者临床分期、生存期的关系。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circ-DHRS3在膀胱癌细胞系UMUC3、BIU87、T24、J82中的相对表达量。构建circ-DHRS3过表达的稳转株。克隆形成实验和Transwell实验检测circ-DHRS3对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circ-DHRS3和miR-1275之间的靶向关系。qRT-PCR法检测circ-DHRS3对T24细胞中miR-1275表达的影响。克隆形成实验和Transwell实验检测miR-1275对circ-DHRS3功能的反转作用。Western blot法检测circ-DHRS3对T24细胞中Wnt/β-Catenin分子通路蛋白表达的影响。结果:膀胱癌组织中circ-DHRS3表达降低(P<0.01),并且其表达水平与患者临床分期负相关(P<0.01),circ-DHRS3高表达患者的生存期长于circ-DHRS3低表达患者(P<0.01)。circ-DHRS3在膀胱癌细胞系UMUC3、BIU87、T24、J82中低表达(均P<0.05),circ-DHRS3表达最低的膀胱癌细胞是T24细胞(P<0.01)。与NC组相比,过表达circ-DHRS3后的T24细胞增殖和侵袭能力均降低(均P<0.01)。circ-DHRS3能够靶向结合并抑制miR-1275的表达(P<0.01)。过表达miR-1275可以逆转circ-DHRS3对T24细胞增殖和侵袭的抑制(P<0.01)。与NC组相比,过表达circ-DHRS3后的T24细胞中Wnt/β-Catenin分子通路蛋白Wnt3a、β-catenin、GSK3β、c-myc均表达降低(均P<0.01)。结论:circ-DHRS3通过靶向负调控miR-1275表达,改变Wnt/β-Catenin分子通路活性,抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力。 展开更多
关键词 膀胱癌 circ-DHRS3 miR-1275 细胞增殖 细胞侵袭
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微小RNA-1236和外源性小分子双链RNA激活膀胱癌细胞p21表达作用的比较 被引量：6
3
作者 盖强强 汪成合 +3 位作者 陈忠 张庆松 杨为民 叶章群 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2662-2665,共4页
目的人工合成与微小RNA（miRNA，TniR）-1236所作用的p21基因启动子靶序列完全互补配对的4对小分子双链RNA（dsRNA）：dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244和dsP21-245（dsP21-243序列配对程度最高），分别观察其与miR-1236在激活人膀胱癌... 目的人工合成与微小RNA（miRNA，TniR）-1236所作用的p21基因启动子靶序列完全互补配对的4对小分子双链RNA（dsRNA）：dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244和dsP21-245（dsP21-243序列配对程度最高），分别观察其与miR-1236在激活人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中抑癌基因p21表达能力的差异。方法参照小激活RNA（saRNA）的设计原则设计合成4对dsRNA。分别转染阴性对照组（dsContr01）、阳性对照组（miR-1236）和实验组（dsRNA）至T24和EJ细胞，通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot分别检测p21mRNA和蛋白表达的水平。结果FQ-PCR检测结果显示实验组中仅dsP21-245能明显促进两种细胞中p21mRNA水平的升高；且与阴性对照组比较，dsP21-245分别上调T24和EJ细胞中p21mRNA的表达至2．32倍（P〈0.01）和2．84倍（P〈0．01）；与阳性对照组比较，两种细胞株中p21mRNA的表达差异均没有统计学意义（P〉0．05）。RT-PCR检测结果证实了p21mRNA表达变化的趋势。Westernblot结果显示在两种细胞株中p21蛋白表达水平的升高与p21mRNA水平的上调一致。其余3对dsRNA均未能显著上调两种细胞株中p21基因的表达（P〉0．05）。结论人工合成的dsP21-245能显著促进膀胱癌细胞中p21的高表达，且与miR-1236激活p21表达的能力差异无统计学意义。 展开更多
关键词 微小RNA 双链RNA RNA激活 P21 膀胱癌
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circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制 被引量：1
4
作者 胡志 付桥 +3 位作者 徐律 张炜 盖强强 孙伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第11期1878-1884,共7页
目的分析circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达与临床意义,探究circ-RACGAP1对膀胱癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法通过TCGA数据库探究circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达,分析circ-RACGAP1表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系... 目的分析circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达与临床意义,探究circ-RACGAP1对膀胱癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法通过TCGA数据库探究circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达,分析circ-RACGAP1表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法分析细胞系5637、T24、J82、RT-4、UM-UC-3中circ-RACGAP1表达。通过脂质体转染技术将circ-RACGAP1敲降质粒转染T24细胞。克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别分析敲降circ-RACGAP1对T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用deepBase、Circbank、CircInteractome、circRNABase数据库和荧光报告系统验证circ-RACGAP1和miR-4324之间的靶向结合。qPCR检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中miR-4324表达的影响。采用Western blot法检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中Rac-GTP酶激活蛋白1(RACGAP1)蛋白和磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路蛋白表达的影响。结果膀胱癌组织中circ-RACGAP1呈高表达(P<0.01),其表达随着患者临床分期恶性程度增高而升高(P<0.01)。膀胱癌细胞系中circ-RACGAP1表达明显高于人正常膀胱上皮细胞(均P<0.01)。与对照组比较,sh-sh-circ-RACGAP1组T24细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P<0.01)。circ-RACGAP1可靶向抑制miR-4324的表达(P<0.01)。与对照组比较,sh-circ-RACGAP1组T24细胞中RACGAP1蛋白表达水平降低(P<0.01),PI3K/AKT信号通路蛋白磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子κB(NF-κB)表达水平均降低(均P<0.01)。结论膀胱癌组织和细胞系中circ-RACGAP1呈高表达,敲降circ-RACGAP1能够抑制T24细胞的恶性生物学行为,circ-RACGAP1是通过抑制miR-4324表达激活PI3K/AKT信号通路来发挥作用。 展开更多
关键词 膀胱癌 环状RNA circ-RACGAP1 miR-4324
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AP000892.6通过靶向miR-616-5p影响膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化的分子机制
5
作者 杨金辉 孙建涛 +2 位作者 李小辉 盖强强 郝彤彤 《医学研究杂志》 2023年第12期26-31,共6页
目的探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)AP000892.6对膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化进程的影响及相关分子机制。方法应用GEPIA数据集分析AP000892.6在膀胱癌和癌旁组织中的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反... 目的探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)AP000892.6对膀胱癌细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化进程的影响及相关分子机制。方法应用GEPIA数据集分析AP000892.6在膀胱癌和癌旁组织中的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测膀胱癌细胞株647V、T24、UMUC3、5637、RT4和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中AP000892.6的表达水平。将AP000892.6过表达质粒或阴性对照质粒转染到T24细胞,实验分为AP000892.6组和NC组,RT-qPCR法验证质粒转染效率。细胞划痕法和Transwell实验分别检测转染T24细胞的迁移和侵袭能力。应用生物信息学方法预测以及双荧光素酶报告基因实验验证AP000892.6的下游靶基因。RT-qPCR法检测AP000892.6下游靶基因的表达。Western blot法检测上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1和间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist的表达。结果与癌旁组织比较,AP000892.6在膀胱癌组织中表达降低(P<0.01)。与SV-HUC-1细胞比较,AP000892.6在膀胱癌细胞株中表达降低(P<0.05),T24细胞中AP000892.6的相对表达水平最低(P<0.01)。与NC组比较,过表达AP000892.6抑制膀胱癌T24细胞的迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因分析证明miR-616-5p是AP000892.6的靶基因(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6对miR-616-5p表达具有负调控作用(P<0.01)。与NC组比较,AP000892.6组T24细胞中上皮表型蛋白E-cadherin、ZO-1表达上调,间充质表型蛋白Vimentin、N-cadherin、Twist表达下调。结论AP000892.6通过靶向miR-616-5p抑制膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭和上皮间充质转化进程。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 AP000892.6 miR-616-5p 上皮间充质转化
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草酸降解酶对肠源性高草酸尿症大鼠肾草酸钙结石形成的影响研究 被引量：4
6
作者 盖强强 陈忠 +6 位作者 汪成合 鲁文红 吴文起 曾国华 陈志强 杨为民 叶章群 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期930-934,共5页
目的 观察草酸降解酶对肠源性高草酸尿症大鼠模型肾草酸钙结石形成的影响.方法 2014年5-6月,以8只健康大鼠为空白对照组（A组）,将24只肠源性高草酸尿症大鼠按完全随机设计随机分为阳性对照组（B组）、低剂量酶灌胃组（C组）和高剂量酶... 目的 观察草酸降解酶对肠源性高草酸尿症大鼠模型肾草酸钙结石形成的影响.方法 2014年5-6月,以8只健康大鼠为空白对照组（A组）,将24只肠源性高草酸尿症大鼠按完全随机设计随机分为阳性对照组（B组）、低剂量酶灌胃组（C组）和高剂量酶灌胃组（D组）,每组8只.其中A组采用牛理盐水3 ml/d灌胃,B组采用4％草酸铵溶液3 ml/d灌胃,C、D组分别在B组的基础上加用20、40 U/d草酸降解酶灌胃.4组大鼠连续观察28 d,第0、7、14、21、28天测定24 h尿草酸盐浓度,第0及28天检测肾功能及尿Ca^2＋、血Ca^2＋浓度.第28天对A、B、D组大鼠行肾脏能谱CT扫描后,取4组大鼠肾组织切片染色观察草酸钙结晶形成情况.结果 第0天,A、B、C和D组大鼠尿草酸盐浓度分别为（0.61±0.06）、（1.58±0.15）、（1.59±0.10）、（1.64±0.20） mmol/L,后3组组间差异无统计学意义（P＞0.05）,且均高于A组（P＜0.01）.开始灌胃干预后,C、D组大鼠尿草酸盐浓度呈明显下降趋势,且D组下降更明显.第28天,4组大鼠尿草酸盐浓度分别为（0.61±0.11）、（1.64 ±0.12）、（1.17±0.12）、（0.87 ±0.11） mmol/L,C组和D组较B组均明显降低,D组较C组下降更明显,组间差异均有统计学意义（P＜0.01）.各组大鼠肾功能及血Ca^2＋浓度均未明显改变（P＞0.05）.大鼠肾脏影像结果经CT后处理工作站数据分析提示,B组CT值明显高于D组（P＜0.01）,且两组均高于A组（P＜0.01）,3组的差异在低千伏能量条件下更明显.肾切片染色结果显示,B、C、D3组大鼠肾小管内均见草酸钙结晶沉积,B组最多,C组较少,D组更少,A组无明显结晶形成.结论 草酸降解酶能有效减少肠源性高草酸尿症大鼠肾草酸钙结石的形成. 展开更多
关键词 肾结石 草酸降解酶 高草酸尿症 草酸钙结石 大鼠
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不同启动子相关双链小分子RNA介导激活p21 Waf1/Cip1 基因研究 被引量：3
7
作者 龚化 陈忠 +3 位作者 盖强强 汪成合 李凡 叶章群 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2990-2992,共3页
目的探讨针对p21基因启动子序列不同转录起始位点设计的小双链RNA（dsRNA）对p21基因表达的正向调控作用。方法针对p21基因启动子DNA序列设计合成4对dsRNA分子dsP21．382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21—625，转染人体外培养的人膀胱肿... 目的探讨针对p21基因启动子序列不同转录起始位点设计的小双链RNA（dsRNA）对p21基因表达的正向调控作用。方法针对p21基因启动子DNA序列设计合成4对dsRNA分子dsP21．382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21—625，转染人体外培养的人膀胱肿瘤细胞株5637细胞及T24细胞中，并以具有激活功能的dsRNA分子dsP21—322作为阳性对照，以未转染的5637和T24细胞为空白对照，以dsControl为阴性对照。采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot等观察各dsRNA转染后，细胞内p21基因mRNA及蛋白表达量的差异，以及dsRNA转染对肿瘤细胞株生长的影响。结果PCR结果显示，与空白对照组比较，dsP21—382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21-625分别上调5637细胞中p21mRNA的表达1．56、1．88、2．41和1．74倍（P〈0．05），dsP21-382、dsP21-436、dsP21-484、dsP21-625分别上调T24细胞中021mRNA的表达1．71、1．69、2．62和1．85倍（P〈0．05）。Westernblot结果显示，与空白对照组比较，p21蛋白表达的升高与021mRNA水平的升高一致。4对dsRNA均能显著抑制膀胱肿瘤细胞株的生长。结论dsRNA对基因表达正向调控作用可能是一种普遍现象。 展开更多
关键词 RNA激活 小激活RNA P21基因 启动子相关
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p53表达下调对saRNA介导p21基因激活的影响研究 被引量：1
8
作者 吴嘉 陈忠 +3 位作者 杨为民 汪成合 盖强强 胡嘏 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2015年第6期350-353,共4页
目的研究抑制p53基因的表达是否影响小双链RNA(dsRNA)分子dsP21-322对p21基因表达的激活效应。方法体外培养人肾癌ACHN细胞(p53野生型)和膀胱癌5637细胞(p53突变型)。采用RT-PCR方法筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子dsP53-3。人工... 目的研究抑制p53基因的表达是否影响小双链RNA(dsRNA)分子dsP21-322对p21基因表达的激活效应。方法体外培养人肾癌ACHN细胞(p53野生型)和膀胱癌5637细胞(p53突变型)。采用RT-PCR方法筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子dsP53-3。人工合成具有激活效应的dsRNA分子dsP21-322,以及与人体已知RNA序列无同源性的阴性对照小dsRNA分子dsCon。将上述dsRNA分子转染到两种肿瘤细胞中,每种细胞均分为5组,即:1空白组;2阴性对照组;3dsP21-322单转染组;4dsP53单转染组;5dsP21-322与dsP53共转染组。通过荧光染色检测转染效率,采用Real-time PCR和Western-blot技术检测各组细胞中p53和p21转录和翻译水平上的表达差异。结果 1在单转染组中,dsP21-322能够激活ACHN细胞、5637细胞中p21基因表达;2dsP53-3能够抑制ACHN细胞、5637细胞中p53基因表达;3在共转染组中ACHN细胞、5637细胞中p53基因下调,而dsP21-322依然能够激活p21基因表达。结论外源合成的saRNA分子dsP21-322能激活ACHN细胞、5637细胞中p21基因表达,该激活效应不受p53蛋白表达量的影响。 展开更多
关键词 SIRNA saRNA RNA干扰 RNA激活
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肾上腺髓样脂肪瘤58例临床分析
9
作者 盖强强 陈忠 +4 位作者 王涛 宋晓东 杜广辉 杨为民 叶章群 《医学新知》 CAS 2014年第6期375-377,F0004,共4页
目的 探讨肾上腺髓样脂肪瘤的诊断、鉴别诊断及外科治疗。方法 回顾性分析2004年10月-2014年8月在我院治疗的58例肾上腺髓样脂肪瘤患者的临床资料。58例患者术前均行肾上腺皮、髓质激素检测及腹部超声、CT检查，14例行MRI检查。58例均... 目的 探讨肾上腺髓样脂肪瘤的诊断、鉴别诊断及外科治疗。方法 回顾性分析2004年10月-2014年8月在我院治疗的58例肾上腺髓样脂肪瘤患者的临床资料。58例患者术前均行肾上腺皮、髓质激素检测及腹部超声、CT检查，14例行MRI检查。58例均手术治疗并行病理检查，其中51例行后腹腔镜肾上腺肿瘤切除术，7例行开放。肾上腺肿瘤切除术。结果 58例患者肾上腺皮、髓质激素无明显异常，CT检查均提示肾上腺髓样脂肪瘤，肿瘤均完整切除，术后病理诊断均为。肾上腺髓样脂肪瘤。多数患者术前有相关症状，术后消失。42例术后获得随访，随访时间为3个月～7年，均未见复发。结论 肾上腺髓样脂肪瘤的术前诊断及鉴别诊断主要依赖于影像学检查及肾上腺皮、髓质激素的检查。对有手术指证的患者，后腹腔镜肾上腺肿瘤切除术为首选手术方法。 展开更多
关键词 肾上腺髓样脂肪瘤 影像学检查 后腹腔镜
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肾盂尿路上皮癌伴肾静脉瘤栓1例报告并文献复习
10
作者 马俊 徐浩 +4 位作者 盖强强 陈忠 胡志全 刘继红 李震 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2017年第1期43-44,共2页
肾盂癌是一种病因不明的上尿路肿瘤,以尿路上皮癌最常见。其组织分型多样,需与肾细胞癌、肾脏感染性病变以及肾梗死等疾病相鉴别。转移方式亦有多种,包括直接侵犯肾实质或周围组织、淋巴转移、血行转移和上皮种植,但在极其少见的情况下... 肾盂癌是一种病因不明的上尿路肿瘤,以尿路上皮癌最常见。其组织分型多样,需与肾细胞癌、肾脏感染性病变以及肾梗死等疾病相鉴别。转移方式亦有多种,包括直接侵犯肾实质或周围组织、淋巴转移、血行转移和上皮种植,但在极其少见的情况下,可直接侵入静脉或下腔静脉。我院近期收治肾盂癌伴右肾静脉瘤栓患者1例,现报告如下并进行相关文献复习。患者,女,50岁,因＂右侧腰部胀痛1月余. 展开更多
关键词 尿路上皮癌 瘤栓 肾盂癌 肾静脉 肾细胞癌 转移方式 肾实质 组织分型 淋巴转移 血行转移
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