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绵羊肺炎支原体贵州临床分离株GZ1 p109基因序列分析与原核表达
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作者 曾庆行 申艳娟 +7 位作者 冉芳菲 杨鹏 成虹松 韦秒粘 李英 余潆 朱二鹏 程振涛 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第5期61-65,共5页
为了探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)贵州临床分离株GZ1 p109基因生物信息及重组蛋白p109的免疫原性,试验采用PCR扩增Mo p109部分基因并克隆至T克隆载体pMD-19T中,经DNA测序后进行生物信息学分析;将双酶切后的p109基... 为了探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)贵州临床分离株GZ1 p109基因生物信息及重组蛋白p109的免疫原性,试验采用PCR扩增Mo p109部分基因并克隆至T克隆载体pMD-19T中,经DNA测序后进行生物信息学分析;将双酶切后的p109基因片段与原核表达载体pColdⅠ连接,然后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,用IPTG诱导重组蛋白表达,然后进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明:扩增得到的Mo贵州临床分离株GZ1 p109部分基因片段大小为576 bp,编码蛋白的分子量为21.33 ku,由192个氨基酸组成;p109蛋白的二级结构主要有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,第1~17,24~35,52~63,72~122,138~148,150~153,161~173,182~192位的氨基酸区段抗原指数相对较高;Mo贵州临床分离株GZ1与Mo 274株(登录号为CP079199)的亲缘关系很近;试验成功构建了pColdⅠ-p109原核表达重组质粒,表达的目的蛋白大小为27 ku,该重组蛋白p109能够与抗Mo阳性血清发生特异性结合。说明试验制备的重组蛋白p109具备良好的免疫原性。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 p109基因 原核表达 免疫原性 序列分析 生物信息学分析
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牛支原体重组融合膜蛋白基因M27-498原核表达载体的构建
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作者 冉芳菲 成虹松 +10 位作者 朱二鹏 胡茜 杨利利 申艳娟 赵依琳 李广松 胡鹏飞 黄荣生 何玲 郝明祥 程振涛 《贵州畜牧兽医》 2024年第3期25-29,共5页
为构建牛支原体融合膜蛋白原核表达载体,使用SOE-PCR技术融合M27、M498基因并扩增融合基因M27-498,利用基因克隆技术构建pMD19-T-M27-498双基因克隆载体,通过亚克隆技术将融合基因M27-498克隆至表达载体pColdⅠ,构建pColdⅠ-M27-498原... 为构建牛支原体融合膜蛋白原核表达载体,使用SOE-PCR技术融合M27、M498基因并扩增融合基因M27-498,利用基因克隆技术构建pMD19-T-M27-498双基因克隆载体,通过亚克隆技术将融合基因M27-498克隆至表达载体pColdⅠ,构建pColdⅠ-M27-498原核表达载体。结果:SOE-PCR产物的电泳条带约1167 bp,与融合基因M27-498片段相符;经PCR、双酶切、测序鉴定,重组质粒pMD19-T-M27-498、pColdⅠ-M27-498的DNA均包含融合基因M27-498。结论:pColdⅠ-M27-498原核表达载体构建成功,可为牛支原体亚单位疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 牛支原体 融合基因 SM27 M498 原核表达
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基于模糊数学方法的水利风景资源评价 被引量：5
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作者 丁阳梅 徐慧 +1 位作者 李晓红 申艳娟 《水资源保护》 CAS 2013年第1期77-81,共5页
以河北省围场县为例,选取其中水利风景资源优异的13条支沟及水库塘坝作为评价对象,采用模糊数学方法进行水利风景资源评价,以主观感受及客观衡量相结合,综合考虑研究区内景观资源的特点,确定模糊数学评价所需要的评价指标、权重、评分... 以河北省围场县为例,选取其中水利风景资源优异的13条支沟及水库塘坝作为评价对象,采用模糊数学方法进行水利风景资源评价,以主观感受及客观衡量相结合,综合考虑研究区内景观资源的特点,确定模糊数学评价所需要的评价指标、权重、评分标准及隶属度,通过多层次计算得到评价对象的综合得分,从而确定其级别分类。获得了研究区不同水利风景资源的景源级别,使景观评价的客观性有所提高。 展开更多
关键词 水利风景 资源评价 模糊数学方法 评价指标 河北省
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