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大鼠ACAT的N末端片段(氨基酸1～126)在大肠杆菌中的融合表达及纯化
1
作者 张春妮 垮田秀树 +2 位作者 宫崎章 松田浩史 堀内正公 《医学研究生学报》 CAS 1999年第4期251-253,共3页
目的： 重组法制备纯化乙酰辅酶Ａ：胆固醇酰基转移酶（ＡＣＡＴ）Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）。　方法：经ＰＣＲ扩增得到的ＡＣＡＴ的Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）用ＥｃｏＲＩ酶解，插入到表达载体ｐＧＥＸ－２... 目的： 重组法制备纯化乙酰辅酶Ａ：胆固醇酰基转移酶（ＡＣＡＴ）Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）。　方法：经ＰＣＲ扩增得到的ＡＣＡＴ的Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）用ＥｃｏＲＩ酶解，插入到表达载体ｐＧＥＸ－２ＴＫ中，得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－２ＴＫ／ＡＣＡＴ（氨基酸１～１２６）。阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－Ａ－ＣＡＴ（氨基酸１～１２６），重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ亲和柱纯化。　结果：ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 分析显示得到了纯的ＧＳＴ－ＡＣＡＴ（氨基酸１～１２６）融合蛋白。　结论：ＡＣＡＴ的Ｎ末端膜外结构域（氨基酸１～１２６）的分离纯化为抗ＧＳＴ－ＡＣＡＴ（Ｎ 末端片段）抗体的制备及其ＡＣＡＴ结构和功能关系的进一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 乙酰辅酶A 胆固醇酰基转移酶(ACAT) 融合表达 大肠杆菌 动脉粥样硬化
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载脂蛋白AI结构中个别氨基酸置换或缺失对促细胞内胆固醇流出能力的影响
2
作者 张春妮 田秀树 +2 位作者 黄伟 庄一义 堀内正公 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 1998年第3期202-205,共4页
载脂蛋白AI促进胆固醇从外周细胞流出，在高密度脂蛋白对胆固醇的逆向运输中起关键作用。为探讨载脂蛋白AI介导胆固醇流出功能的结构特征，观察了天然存在的氨基酸置换：载脂蛋白AI结构中第156位上的缬氨酸由谷氨酸置换，和氨基酸缺失：... 载脂蛋白AI促进胆固醇从外周细胞流出，在高密度脂蛋白对胆固醇的逆向运输中起关键作用。为探讨载脂蛋白AI介导胆固醇流出功能的结构特征，观察了天然存在的氨基酸置换：载脂蛋白AI结构中第156位上的缬氨酸由谷氨酸置换，和氨基酸缺失：第235位上的谷氨酸缺失对载脂蛋白AI促胆固醇从鼠腹腔巨噬细胞流出能力的影响。以体外培养的鼠腹腔巨噬细胞为对象，用氚标油酸酯标记的乙酰化低密度脂蛋白作泡沫细胞诱导物，巨噬细胞与载脂蛋白AI孵育一段时间后．测定由细胞释放入培养基中的3H标记胆固醇量。结果发现载脂蛋白AI结构中第156位的缬氨酸由谷氨酸置换不影响载脂蛋白AI的促细胞胆固醇流出能力，而第235位上的谷氨酸缺失可使胆固醇流出能力降低50％，差异有极显著性意义（P＜0．01）。此结果提示，载脂蛋白AI的C末端残基第235位谷氨酸对胆固醇流出功能起重要作用。 展开更多
关键词 载脂蛋白AI 胆固醇流出 鼠腹腔巨噬细胞
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以日本珠算顶峰为目标(连载四)——实业界人士学珠心算尤其有用
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作者 风田秀树 金朝美 《珠算》 2001年第1期28-29,共2页
对实业界的人士来说,学珠算——尤其是学珠心算特别有好处,下面介绍四个具体事例: 例一、在生产、销售会上 我工作的松下电池工业。营业部门与我们制作部门有分别单设的,每月有一次事业部与有关人员会聚一堂,召开生产经销会议,对今后一... 对实业界的人士来说,学珠算——尤其是学珠心算特别有好处,下面介绍四个具体事例: 例一、在生产、销售会上 我工作的松下电池工业。营业部门与我们制作部门有分别单设的,每月有一次事业部与有关人员会聚一堂,召开生产经销会议,对今后一个季度的销售预测,各营业部门要进行商讨。 展开更多
关键词 日本 珠算 珠心算 松下电器 实业界人土 企业组织 珠算活动
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