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里氏木霉内切葡萄糖苷酶Ⅳ在毕赤酵母中的表达 被引量:20
1
作者 汤新 刘刚 +2 位作者 张煜 邢苗 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期47-51,共5页
进行了内切葡萄糖苷酶Ⅳ(EGⅣ)在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中的表达。采用RT-PCR的方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)中分离到eg4基因。将eg4基因与毕赤酵母表达载体pPICZαA连接,得到重组质粒pPICZαA-eg4。将该重组质粒线... 进行了内切葡萄糖苷酶Ⅳ(EGⅣ)在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中的表达。采用RT-PCR的方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)中分离到eg4基因。将eg4基因与毕赤酵母表达载体pPICZαA连接,得到重组质粒pPICZαA-eg4。将该重组质粒线性化后转化毕赤酵母GS115,eg4基因通过同源重组被整合到毕赤酵母的染色体上,并处于酵母α因子的下游,得到重组菌株P.pastoris-EGⅣ1。在甲醇诱导下,重组菌株P.pastoris-EGⅣ1可以合成并分泌EGⅣ,培养液的CMC活力达到2.11 U/mL。 展开更多
关键词 纤维素酶 内切葡萄糖苷酶Ⅳ 里氏木霉 毕赤酵母
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一种高活性人新型TNF的研制 被引量:22
2
作者 刘丽 +3 位作者 冯彪 王国志 谢宝树 冷爱军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期254-258,共5页
肿瘤坏死因子(TNF)除抗肿瘤活性外,还具有其它广泛的生物学活性,但因其严重的毒副作用极大地限制了它的临床应用。在TNP结构与功能关系研究的基础上,该文作者利用PCR技术构建了一种新型人TNF的编码基因,并使其在大肠... 肿瘤坏死因子(TNF)除抗肿瘤活性外,还具有其它广泛的生物学活性,但因其严重的毒副作用极大地限制了它的临床应用。在TNP结构与功能关系研究的基础上,该文作者利用PCR技术构建了一种新型人TNF的编码基因,并使其在大肠杆菌中进行了高效表达。活性测定结果表明,新型TNF对L929细胞的细胞毒活性较天然型人TNP增高了约714倍。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 突变体 PCR 高活性
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人参多糖对X射线照射小鼠骨髓细胞染色体畸变和造血干、祖细胞的影响 被引量:15
3
作者 邴文贵 李健超 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1992年第3期230-232,共3页
本实验观察了人参多糖对X射线照射小鼠骨髓细胞染色体和造血干、祖细胞的影响。结果表明:人参多糖对受不同剂量X射线照射小鼠骨髓CFU—S和CFU—GM均有显著的保护作用,3.0Gy X射线照射后7天,人参多糖组小鼠骨髓CFU—S和CFU-GM仍高于对照... 本实验观察了人参多糖对X射线照射小鼠骨髓细胞染色体和造血干、祖细胞的影响。结果表明:人参多糖对受不同剂量X射线照射小鼠骨髓CFU—S和CFU—GM均有显著的保护作用,3.0Gy X射线照射后7天,人参多糖组小鼠骨髓CFU—S和CFU-GM仍高于对照组。同时发现,人参多糖对X射线诱发的染色体畸变率有明显的降低作用。 展开更多
关键词 人参多糖 X射线照射 染色体畸变
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Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色技术检测神经细胞凋亡的对比研究 被引量:14
4
作者 杨细飞 贺春娥 +3 位作者 汤瑞华 刘建军 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2014年第3期180-184,共5页
目的:利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法(TUNEL染色检测纳米二氧化硅(nm-SiO2)对神经细胞凋亡的影响,比较两种检测方法的优缺点。方法:以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象,15和30 nm粒径的nm-SiO2(剂量为2.5... 目的:利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法(TUNEL染色检测纳米二氧化硅(nm-SiO2)对神经细胞凋亡的影响,比较两种检测方法的优缺点。方法:以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象,15和30 nm粒径的nm-SiO2(剂量为2.5、5、10μg/mL)分别处理细胞24 h,另设1-5 m SiO2组和溶剂对照组,采用Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色检测各处理组对SK-N-SH细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,两种检测方法分析均显示了nm-SiO2处理组SK-N-SH细胞凋亡率显著增加(P〈0.05),且具有尺寸、剂量依赖性,而微米级SiO2对凋亡的影响不显著(P〉0.05)。结论:nm-SiO2能诱导SK-N-SH细胞凋亡。Hoechst33342/PI双染法特异性高,简单易行;TUNEL法灵敏度高,能检测少量的细胞凋亡,但成本较高,两种方法可结合使用以便更加准确的检测神经细胞的凋亡。 展开更多
关键词 纳米二氧化硅 神经细胞 凋亡 HOECHST33342 PI双染 TUNEL
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碱性纤维素酶基因在巴氏毕赤酵母中的表达及重组酵母菌发酵工艺的优化 被引量:13
5
作者 邵睿 +1 位作者 刘刚 孔舒 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期425-430,437,共7页
目的克隆碱性纤维素酶基因,构建酵母整合型表达质粒,在巴氏毕赤酵母中表达,并对重组菌的发酵工艺进行优化。方法应用PCR技术从嗜碱性芽孢杆菌ATCC21833中扩增碱性纤维素酶基因,克隆至酵母整合型表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒pGAP... 目的克隆碱性纤维素酶基因,构建酵母整合型表达质粒,在巴氏毕赤酵母中表达,并对重组菌的发酵工艺进行优化。方法应用PCR技术从嗜碱性芽孢杆菌ATCC21833中扩增碱性纤维素酶基因,克隆至酵母整合型表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒pGAPZαA-ATCC21833,并转化至巴氏毕赤酵母GS115。通过单因素实验及正交实验,确定重组酵母的最佳发酵培养基。在20L发酵罐中进行高密度发酵,观察碳源对批式发酵的影响,并检测在4种流加方式(连续恒速流加、间歇匀速流加、间歇递减流加、维持底物浓度流加)下的菌体干重及发酵液中的酶活性。结果重组表达质粒pGAPZαA-ATCC21833经酶切及DNA测序证明构建正确,其基因序列与嗜碱性芽孢杆菌KSM-635的碱性纤维素酶基因序列一致。最佳发酵培养基组成为6%葡萄糖、2%硫酸铵、12g/L磷酸二氢钾。碳源浓度对于重组酵母菌体生长及产酶至关重要。SDS-PAGE表明表达产物的相对分子质量约为103000。维持底物浓度的流加方式可获得最高的菌体干重(29.8g/L)及酶活力(24U/ml)。结论已成功构建了表达碱性纤维素酶的巴氏毕赤酵母工程菌,并确定了维持底物浓度的流加方式为最佳发酵方式。 展开更多
关键词 碱性纤维素酶 巴氏毕赤酵母 发酵
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人参多糖对X射线照射小鼠脾脏自由基含量的影响 被引量:6
6
作者 冯彪 +2 位作者 张启先 董凤霞 郑莹光 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期246-248,共3页
采用电子自旋共振(ESR)方法测定了照射前给予人参多糖3d,对X射线照后小鼠脾脏自由基含量的影响。结果表明,(1)人参多糖可使3GyX射线照射后小鼠脾脏自由基含量明显降低。(2)不同浓度(12、250、500mg·... 采用电子自旋共振(ESR)方法测定了照射前给予人参多糖3d,对X射线照后小鼠脾脏自由基含量的影响。结果表明,(1)人参多糖可使3GyX射线照射后小鼠脾脏自由基含量明显降低。(2)不同浓度(12、250、500mg·kg-1·d-1)人参多糖对3Gy照射小鼠脾脏自由基含量均有明显的降低作用。(3)人参多糖对3Gy照射后6h小鼠脾脏自由基含量降低最明显。提示,人参多糖可降低中等剂量X射线照射后早期小鼠脾脏中的自由基含量。 展开更多
关键词 X射线 人参多糖 自由基 脾脏 辐射损伤
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分子生物学实验教学模式的多样性探索 被引量:11
7
作者 宋国丽 +1 位作者 李辉 张建华 《教育教学论坛》 2011年第15期221-222,共2页
为了适应本科教学的大众化教育和培养高水平人才的需要,提高学生实验动手操作能力、综合分析能力和创新能力是分子生物学实验教学中的关键。本文介绍了我们对分子生物学实验教学实施的教学改革,建立了分子生物学基础实验、分子生物学综... 为了适应本科教学的大众化教育和培养高水平人才的需要,提高学生实验动手操作能力、综合分析能力和创新能力是分子生物学实验教学中的关键。本文介绍了我们对分子生物学实验教学实施的教学改革,建立了分子生物学基础实验、分子生物学综合实验和分子生物学创新(研究探索)实验教学模式的多样性教学。这不仅对于保障大多数学生能够接受良好的分子生物学实验教学训练外,而且对于少数学生培养他们的强烈科研探索意识和提高自身科研素质具有重要意义。 展开更多
关键词 分子生物学实验 教学改革 教学模式 多样性
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人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析 被引量:7
8
作者 刘丽 +5 位作者 芦兴武 孟岩 谢宝树 刘立忠 王颖 冷爱军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第4期358-364,共7页
外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母(Pichiapastoris)染色体上,获得遗传性稳定分泌表达株.利用酵母信号肽MFα,对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计,使天然人TPO成熟肽在毕赤酵母系统中分... 外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母(Pichiapastoris)染色体上,获得遗传性稳定分泌表达株.利用酵母信号肽MFα,对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计,使天然人TPO成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功.表达产物经Western-blot进行分析,分子量约为66kD处蛋白条带可被TPO抗体识别;表达量约为0.1g/L;N端氨基酸序列分析结果与设计的一致;表达产物对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位(megakary-ocytecolonyformingunit,CFU-Meg)具有明显的刺激作用. 展开更多
关键词 血小板生成素 毕赤酵母 分泌表达 活性测定
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细胞周期素与细胞周期的调控 被引量:4
9
作者 冯彪 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1995年第3期109-112,共4页
本文综述了不同细胞周期素的分子结构和对细胞周期的调控作用。在细胞周期的不同时期,周期素与P34^(cdc2)及其相关激酶相作用,产生特定的激酶活性,使细胞通过细胞周期特定的调控点。周期素的累积与降解对细胞周期进程的调控起着重要的... 本文综述了不同细胞周期素的分子结构和对细胞周期的调控作用。在细胞周期的不同时期,周期素与P34^(cdc2)及其相关激酶相作用,产生特定的激酶活性,使细胞通过细胞周期特定的调控点。周期素的累积与降解对细胞周期进程的调控起着重要的作用。 展开更多
关键词 细胞周期素 细胞分裂周期 调控
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丝状真菌中的RNA干扰及其应用技术 被引量:6
10
作者 王绍文 刘刚 +1 位作者 邢苗 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期77-83,共7页
RNA干扰是真核生物中相对保守的一种基因转录后表达调控机制,它通过双链RNA介导细胞内mRNA发生特异性降解或翻译抑制,从而调控靶基因的表达。对丝状真菌中RNA压制和减数分裂沉默等现象的研究表明,与动、植物一样,丝状真菌中也存在RNA干... RNA干扰是真核生物中相对保守的一种基因转录后表达调控机制,它通过双链RNA介导细胞内mRNA发生特异性降解或翻译抑制,从而调控靶基因的表达。对丝状真菌中RNA压制和减数分裂沉默等现象的研究表明,与动、植物一样,丝状真菌中也存在RNA干扰现象。通过对RNA压制缺失突变株和减数分裂沉默缺失突变株的一系列分子生物学研究,获得了与之密切相关的一系列蛋白,而这些蛋白在结构和功能上与动、植物RNA干扰途径的蛋白高度相似,这些结果证明了丝状真菌中的RNA存在干扰现象。RNA干扰技术作为丝状真菌分子生物学研究或遗传改造的工具具有特殊的意义,因为丝状真菌具有多核和发生非同源重组频率高的特点,难以用基因敲除手段进行改造。系统地介绍丝状真菌中的RNA干扰途径以及使用RNA干扰对真菌进行遗传改造的方法。 展开更多
关键词 RNA干扰 RNA压制 减数分裂沉默 SIRNA 丝状真菌
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RNA干扰的研究进展 被引量:6
11
作者 何洁凝 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期265-268,274,共5页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制。RNAi广泛存在于真菌、植物和动物中,这种调控可以由siRNA、shRNA及miRNA等小分子RNA参与。在此主要对RNAi的研... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制。RNAi广泛存在于真菌、植物和动物中,这种调控可以由siRNA、shRNA及miRNA等小分子RNA参与。在此主要对RNAi的研究进展如背景、分子调控机制、存在的问题和应用前景等进行了综述。 展开更多
关键词 RNA干扰 小分子RNA 研究进展
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5-氮杂-2-脱氧胞苷对里氏木霉产纤维素酶的影响 被引量:5
12
作者 周娇娇 佘炜怡 +2 位作者 王浩入 谢宁 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期122-131,共10页
为探究脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)甲基化修饰对丝状真菌里氏木霉(Trichoderma reesei,T.reesei)产纤维素酶基因表达的表观遗传调控机制,利用不同浓度(0~1.0 mmol/L)的化学修饰剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycyti... 为探究脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)甲基化修饰对丝状真菌里氏木霉(Trichoderma reesei,T.reesei)产纤维素酶基因表达的表观遗传调控机制,利用不同浓度(0~1.0 mmol/L)的化学修饰剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza)培养T.reesei QM9414.通过测定滤纸酶活性(filter paper enzymatic activities,FPA)和羧甲基纤维素钠酶活性(carboxymethyl cellulose-Na enzymatic activities,CMCA)确定纤维素酶活性的变化;利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测0.1 mmol/L 5'-Aza培养的T.reesei QM9414中纤维素酶基因cbh1、egl1、酶激活因子xyr1基因以及分解代谢阻遏因子cre1与ace1基因的表达水平;通过甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MS-PCR)分析cre1、ace1、cbh1、egl1和xyr1基因上游序列的甲基化状态;利用Western blot和DNA甲基化定量测定分析了DNA甲基转移酶和DNA的甲基化水平.结果显示,0.1mmol/L 5'-Aza处理后的T.reesei QM9414菌株的FPA和CMCA最高,比出发菌株T.reesei QM9414分别高30%和53%;RT-q PCR结果显示,处理后的T.reesei QM9414菌株中纤维素酶基因cbh1、egl1与酶激活因子xyr1基因的相对表达量均高于出发菌株,而分解代谢阻遏因子cre1和ace1基因的相对表达量与出发菌株无明显差异;MS-PCR结果显示,cbh1、egl1和xyr1基因的非甲基化状态高于出发菌株,而分解代谢阻遏因子cre1与ace1基因的非甲基化状态也无明显差异;Western blot和DNA甲基化定量测定结果分别显示,5'-Aza处理后菌株的DNA甲基转移酶表达比出发菌株明显降低,全基因组DNA甲基化程度也有下降.研究结果表明,5'-Aza处理T.reesei QM9414菌株后,纤维素酶活性明显增加,纤维素酶基因cbh1、egl1和激活因子xyr1基因表达水平的增加可能是通过DNA甲基转移酶影响DNA甲基化水平,最终调控基因的表达. 展开更多
关键词 丝状真菌 里氏木霉 5-氮杂-2-脱氧胞苷 DNA甲基化 DNA甲基化转移酶 甲基化特异性PCR
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人转化生长因子β_1对肿瘤细胞恶性表型的抑制作用 被引量:4
13
作者 宋丽华 白淑清 +4 位作者 杨伟力 张宏权 王会信 刘及 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期348-350,共3页
探讨人转化生长因子β1对肿瘤细胞的影响。方法通过构建人转化生长因子β1(hTGFβ1)基因表达载体,利用基因转染技术,将基因导入HL-60细胞中,经G418选择获得可稳定表达人转化生长因子β1的HL-60细胞,对该细... 探讨人转化生长因子β1对肿瘤细胞的影响。方法通过构建人转化生长因子β1(hTGFβ1)基因表达载体,利用基因转染技术,将基因导入HL-60细胞中,经G418选择获得可稳定表达人转化生长因子β1的HL-60细胞,对该细胞进行了一系列恶性表型变化的研究。结果表达人转化生长因子β1mRNA的HL-60细胞其生长速度下降,在软琼脂中集落形成能力降低,在裸鼠体内的成瘤性下降,与对照组比较,转染组裸鼠没有发生肝转移。结论hTGFβ1对肿瘤细胞HL-60的恶性表型具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 生长因子 β 肿瘤细胞 表型 恶性 抑制作用
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PEEK/HA生物复合材料的热稳定性 被引量:4
14
作者 倪卓 王应 +3 位作者 华文语 刘士德 王淼 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS 北大核心 2012年第6期521-526,共6页
缩聚合成聚醚醚酮,与纳米羟基磷灰石混合,制成聚醚醚酮/羟基磷灰石生物复合材料,用热重分析法研究其热稳定性.研究表明,该材料热分解起始温度在500℃以上,热稳定性好;升温速率对热重曲线有重要影响,随着升温速率加快,热失重曲线向高温... 缩聚合成聚醚醚酮,与纳米羟基磷灰石混合,制成聚醚醚酮/羟基磷灰石生物复合材料,用热重分析法研究其热稳定性.研究表明,该材料热分解起始温度在500℃以上,热稳定性好;升温速率对热重曲线有重要影响,随着升温速率加快,热失重曲线向高温区平移,起始分解温度和最大热分解速率温度提高,反应临近结束的拐点温度也提高;随着羟基磷灰石含量的增大,该复合材料的最大分解速率逐渐降低,热稳定性优于聚醚醚酮.细胞毒性试验显示,该复合材料对Hela细胞无明显毒性,对细胞生长有促进作用,生物相容性良好. 展开更多
关键词 复合材料 聚醚醚酮 热稳定性 分解动力学 细胞毒性 生物相容性
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PEEK/HA复合材料热稳定性及细胞毒性试验 被引量:4
15
作者 倪卓 +4 位作者 王应 李文广 张琪瑶 苏瑶 黄民慧 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2012年第4期9-12,19,66,共6页
目的制备PEEK/HA生物复合材料,研究该材料的热性能和生物相容性。方法在缩聚合成聚醚醚酮的基础上,与10%、20%、30%的纳米羟基磷灰石混合,制成聚醚醚酮/羟基磷灰石﹙PEEK/HA﹚生物复合材料。用热重分析法研究复合材料热稳定性。采用差... 目的制备PEEK/HA生物复合材料,研究该材料的热性能和生物相容性。方法在缩聚合成聚醚醚酮的基础上,与10%、20%、30%的纳米羟基磷灰石混合,制成聚醚醚酮/羟基磷灰石﹙PEEK/HA﹚生物复合材料。用热重分析法研究复合材料热稳定性。采用差示扫描量热仪﹙DSC﹚研究纳米羟基磷灰石对PEEK结晶动力学的影响。GFP、RFP荧光蛋白转化的大肠杆菌,与材料一起培养,观察材料对荧光蛋白表达影响。WST-1试剂盒检测该材料对Hela细胞毒性。结果 PEEK/HA复合材料热分解起始温度在500℃以上,热稳定性好。在加入20%纳米羟基磷灰石时,聚醚醚酮复合材料的结晶活化能﹙E﹚低,易于形成结晶。PEEK/HA复合材料对原核细胞和Hela细胞无明显毒性。结论 PEEK/HA生物复合材料的热性能和生物相容性良好。 展开更多
关键词 PEEK/HA复合材料 热稳定性 结晶动力学 生物相容性
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人参多糖对X射线照射小鼠免疫功能的影响 被引量:4
16
作者 赵勇 +1 位作者 李健超 张晓光 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期160-164,共5页
观察了人参多糖对X射线照射小鼠免疫功能的影响。结果表明,人参多糖组小鼠受一定剂量X射线照射后,脾脏有核细胞数、脾脏淋巴细胞对ConA诱导的增殖反应和ConA诱导脾细胞产生白细胞介素2(IL-2)的能力在不同程度上明显高于对照组。发现在... 观察了人参多糖对X射线照射小鼠免疫功能的影响。结果表明,人参多糖组小鼠受一定剂量X射线照射后,脾脏有核细胞数、脾脏淋巴细胞对ConA诱导的增殖反应和ConA诱导脾细胞产生白细胞介素2(IL-2)的能力在不同程度上明显高于对照组。发现在照射后第3d这种现象仍然存在。同时发现,人参多糖组小鼠脾脏NK细胞的活性也明显高于对照组。 展开更多
关键词 人参多糖 X射线 辐照 免疫 动物
全文增补中
根癌农杆菌介导里氏木霉转化体系的建立和条件优化 被引量:4
17
作者 刘刚 杨长得 +2 位作者 康康 邢苗 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期44-48,共5页
目的:采用根癌农杆菌介导的转化方法实现丝状真菌里氏木霉的遗传转化,并优化转化条件。方法:构建含潮霉素抗性基因(hph)的双元载体pCAM-hph后,转化根癌农杆菌LBA4404获得转化菌株。将根癌农杆菌的转化菌株和里氏木霉的分生孢子共培养后... 目的:采用根癌农杆菌介导的转化方法实现丝状真菌里氏木霉的遗传转化,并优化转化条件。方法:构建含潮霉素抗性基因(hph)的双元载体pCAM-hph后,转化根癌农杆菌LBA4404获得转化菌株。将根癌农杆菌的转化菌株和里氏木霉的分生孢子共培养后在含100μg/mL潮霉素的抗性平板上筛选里氏木霉转化子,并采用PCR扩增和序列测定对转化子中的插入片段进行了分析。结果:使用根癌农杆菌介导的转化方法转化里氏木霉,每106个分生孢子可获得25.8个转化子。最佳的转化条件为:农杆菌初始浓度为OD660约为0.8,孢子数为106个,共培养时间为48h,pH为5.0~5.5,培养温度为28℃。结论:建立了根癌农杆菌介导的里氏木霉转化方法,并获得了最佳的转化条件。 展开更多
关键词 里氏木霉 根癌农杆菌 分生孢子 潮霉素磷酸转移酶 双元载体
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里氏木霉组成型表达siRNA干扰cre1基因对纤维素酶表达的调控作用 被引量:5
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作者 高云雨 钟路遥 +4 位作者 董冠园 佘伟怡 周娇娇 刘思远 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期12-19,共8页
使用组成型siRNA干扰载体对里氏木霉碳阻遏抑制因子CRE1进行siRNA干扰以研究其对里氏木霉纤维素酶基因表达的调控作用。根据里氏木霉cre1基因序列设计siRNA干扰片段。利用里氏木霉组成型表达载体将干扰片段分别构建至里氏木霉cre1干扰... 使用组成型siRNA干扰载体对里氏木霉碳阻遏抑制因子CRE1进行siRNA干扰以研究其对里氏木霉纤维素酶基因表达的调控作用。根据里氏木霉cre1基因序列设计siRNA干扰片段。利用里氏木霉组成型表达载体将干扰片段分别构建至里氏木霉cre1干扰载体并将其转化里氏木霉QM9414。分别在48和144 h对各转化子进行纤维素酶酶活力测试(CMC酶活力测试和滤纸酶活力测试)及利用qPCR检测相关基因的表达。在诱导144 h时转化子的两种酶活力平均约比出发菌株高出1倍。qPCR检测cre1基因的表达结果表明,转化子的cre1表达量比出发菌株平均降低约50%,而ace1基因表达量变化不大。其他纤维素酶相关基因的表达水平也均高于出发菌株。通过组成型表达siRNA干扰里氏木霉cre1基因可以明显调控纤维素酶基因的表达,为研究纤维素酶的基因表达与调控提供参考。 展开更多
关键词 里氏木霉 RNA干扰 cre1 纤维素酶
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T载体的应用及研究进展 被引量:2
19
作者 梁秀怡 梁志成 《科学技术与工程》 北大核心 2014年第30期102-108,118,共8页
T载体可直接用于克隆PCR产物,因此应用于大规模的基因克隆中,具有快速、高效、操作简单等优点。对T载体进行了综述,介绍了T载体在生物学众多领域的广泛应用,总结了当今T载体的技术创新和改良,特别介绍了目前最新的新型多功能T载体——... T载体可直接用于克隆PCR产物,因此应用于大规模的基因克隆中,具有快速、高效、操作简单等优点。对T载体进行了综述,介绍了T载体在生物学众多领域的广泛应用,总结了当今T载体的技术创新和改良,特别介绍了目前最新的新型多功能T载体——定向克隆表达型T载体,并且探讨了T载体未来的发展趋势。 展开更多
关键词 T载体 TA克隆 定向克隆 表达型T载体
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电离辐射对免疫活性细胞及白细胞介素产生的影响 被引量:1
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作者 李健超 刘及 《国外医学(放射医学核医学分册)》 北大核心 1990年第4期148-151,共4页
介绍了电离辐射对免疫活性细胞及白细胞介素产生的影响,认为参与机体免疫反应的细胞及白细胞介素产生细胞对辐射的敏感性不同.探讨辐射对它们的影响,对于了解辐射免疫调节有一定意义.
关键词 电离辐射 免疫活性细胞 白细胞介素
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