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不同启动子和MAR组合对重组CHO细胞转基因表达的影响 被引量：1
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作者 李琴 王小引 +4 位作者 赵春澎 田政伟 徐丹华 王天云 张俊河 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期18-23,共6页
目的分析不同启动子与核基质结合区(MAR)组合对中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中转基因表达的影响。方法将β-珠蛋白MAR(gMAR)与人巨细胞病毒早期启动子(CMV-IE)、猿猴空泡病毒40(SV40)启动子组合,构建两种不同启动子与gMAR组合的表达载体。转染... 目的分析不同启动子与核基质结合区(MAR)组合对中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中转基因表达的影响。方法将β-珠蛋白MAR(gMAR)与人巨细胞病毒早期启动子(CMV-IE)、猿猴空泡病毒40(SV40)启动子组合,构建两种不同启动子与gMAR组合的表达载体。转染CHO细胞,48h后观察增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的瞬时表达情况;G418筛选稳定转化的细胞株,流式细胞术分析稳定CHO细胞eGFP基因的表达水平,实时荧光定量PCR(qPCR)分析eGFP基因的相对拷贝数。结果不含gMAR的表达载体,CMV-IE启动子eGFP表达明显强于SV40启动子;gMAR能提高CMV-IE启动子eGFP表达水平,但在SV40启动子中并未表现出提高作用。两侧含gMAR的表达载体比一侧含有gMAR的表达载体CMV-IE启动子eGFP表达荧光强;G418加压筛选后,含SV40启动子的gMAR表达载体eGFP基因表达不稳定,荧光逐渐减弱,因此,后期只对稳定表达eGFP基因的CMV-IE启动子表达载体进行流式细胞术和qPCR分析。流式细胞术检测结果显示,一侧含有与两侧含有gMAR的CMV-IE启动子表达载体eGFP基因表达量比不含gMAR的表达载体分别提高9.85倍和12.94倍;qPCR结果显示,以不含gMAR的载体的eGFP基因拷贝数为1,一侧含有与两侧含有gMAR的CMV-IE启动子表达载体eGFP基因相对拷贝数为3.68和9.25。结论 CMV-IE启动子活性强于SV40启动子;gMAR能提高CMV-IE启动子外源基因的表达水平,其机制可能与增加基因拷贝数相关。 展开更多
关键词 核基质结合区 CMV启动子 SV40启动子 CHO细胞
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CHO细胞重组抗体表达载体的构建策略及进展
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作者 李艳梅 田政伟 +4 位作者 徐丹华 王稳 王小引 张贵虎 王天云 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第11期1958-1964,共7页
近年来,重组蛋白被用来治疗多种不同的疾病,其中重组单克隆抗体是增长最快速的一类生物治疗性重组蛋白。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞是目前最常用的重组抗体生产的宿主细胞。表达载体是重组抗体表达的重要部分,直接... 近年来,重组蛋白被用来治疗多种不同的疾病,其中重组单克隆抗体是增长最快速的一类生物治疗性重组蛋白。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞是目前最常用的重组抗体生产的宿主细胞。表达载体是重组抗体表达的重要部分,直接影响抗体表达的水平和质量。目前, CHO细胞重组抗体表达载体的构建策略主要有单顺反子表达载体、多启动子表达载体、IRES连接载体、Furin-2A连接载体、抗体融合蛋白等。其中, Furin-2A连接载体由于具有多种优点而逐渐成为表达重组抗体的一种重要策略,尤其是其具有较高的自剪切效率、连接的两个基因表达较为平衡、基因序列短小等优点。该文概括了目前构建CHO细胞重组抗体表达载体的策略、优缺点及其进展。 展开更多
关键词 重组蛋白 CHO细胞 单克隆抗体 IRES Furin-2A
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