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小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：10
1
作者 邱文英 李刚 +1 位作者 田康乐 黄华欣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期483-487,共5页
为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建... 为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中抗小反刍兽疫病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释倍数、血清孵育时间等反应条件进行了优化。Western-blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的反应原性。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的小反刍兽疫病毒抗体和牛瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达98.4%。证实,本研究建立的检测血清中抗PPRV抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 N蛋白 间接酶联免疫吸附试验
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纳米金标记核酸探针检测小反刍兽疫病毒核酸的研究 被引量：9
2
作者 陶春爱 邱文英 +1 位作者 李刚 田康乐 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期89-94,共6页
试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到... 试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳米金颗粒上。靶核酸两端分别与两条探针结合,形成"生物素化探针-靶核酸-纳米金探针"复合物,该复合物通过生物素-亲和素系统,固定在固相载体上,最后银染放大信号。通过肉眼观察法、光镜观察法、分光光度法分析银染灰度,从而间接测定靶核酸的量。初步检测PPRV核酸最低浓度达10fmol/L,所需时间约为1.5h。该方法灵敏度高、操作简单,为临床检测小反刍兽疫病毒核酸提供实验数据和技术支持。 展开更多
关键词 纳米金 PPRV 核酸探针 银染
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小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：5
3
作者 田康乐 李刚 +1 位作者 邱文英 程朝飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第9期1185-1189,共5页
目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体。方法根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆... 目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体。方法根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并初步应用于PPRV的检测。结果重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPRV-F经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组F蛋白相对分子质量约59 000,诱导6 h表达量最高,且主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%以上;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,抗体效价高于1∶64 000;间接免疫荧光试验显示,制备的多抗能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。结论原核表达了PPRVF蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为其进一步研究及小反刍兽疫临床快速检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 F蛋白 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
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公司治理、财务状况与信息披露质量的关系 被引量：3
4
作者 余杰 田康乐 《财会通讯（下）》 北大核心 2015年第12期89-91,共3页
本文以深交所2010-2012年上市公司为样本,采用多元有序Logistic回归的方法研究公司治理、财务状况与信息披露之间的关系,研究结果表明公司股权集中度、机构投资者持股比例、监事会规模以及财务状况能够显著影响信息披露质量,而两职分离... 本文以深交所2010-2012年上市公司为样本,采用多元有序Logistic回归的方法研究公司治理、财务状况与信息披露之间的关系,研究结果表明公司股权集中度、机构投资者持股比例、监事会规模以及财务状况能够显著影响信息披露质量,而两职分离、独立董事比例对信息披露质量的影响并不显著。 展开更多
关键词 公司治理 财务状况 信息披露质量 多元有序Logistic回归
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挤压及热处理对原位合成(Al_3Zr+ZrB_2)_p/6063Al复合材料力学性能的影响规律 被引量：3
5
作者 曾一达 赵玉涛 +1 位作者 焦雷 田康乐 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第19期19128-19133,共6页
采用Al-KBF4-K2ZrF6剂体系,通过熔体反应法成功制备(Al3Zr+ZrB2)p/6063Al复合材料。对复合材料进行热挤压和热处理,并利用正交试验的方法综合分析挤压和热处理参数(固溶温度、时效时间、时效温度)对铝基复合材料的抗拉强度的影响,采用SE... 采用Al-KBF4-K2ZrF6剂体系,通过熔体反应法成功制备(Al3Zr+ZrB2)p/6063Al复合材料。对复合材料进行热挤压和热处理,并利用正交试验的方法综合分析挤压和热处理参数(固溶温度、时效时间、时效温度)对铝基复合材料的抗拉强度的影响,采用SEM等分析方法于各阶段分析了复合材料的相组成,探讨了热处理对复合材料拉伸性能的影响的微观机制。结果表明,热挤压和热处理均对复合材料的微观形貌和抗拉强度有较大影响,分别提升了6%和20%。正交试验计算所得热处理参数对抗拉强度影响的大小顺序为固溶温度、时效温度、时效时间。优选出最大抗拉强度热处理工艺为固溶温度723 K,固溶时间4 h;时效温度423 K,时效时间4 h。 展开更多
关键词 铝基复合材料 热挤压 热处理 正交试验
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低烟无卤阻燃光伏电缆的制造 被引量：4
6
作者 周俊民 王松显 +2 位作者 刘秀敏 宋会芳 田康乐 《光纤与电缆及其应用技术》 2011年第2期22-25,共4页
光伏电缆适用于直流线—线最高电压DC 1.8 kV的光伏系统,具有最佳的耐风雨性、耐紫外线和耐臭氧侵蚀性,而且能承受更大范围的温度变化,因此生产光伏电缆必须严格控制好生产工艺,在质量上确保万无一失。
关键词 光伏电缆 低烟无卤 生产工艺 辐照
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我国制造业上市公司财务危机预警研究 被引量：2
7
作者 余杰 田康乐 《会计之友》 北大核心 2014年第30期73-75,共3页
文章以制造业上市公司为例,选取2010—2012年首次被ST的公司及其配对公司作为样本,前两年样本用于建模,第三年用于检验,设计从财务和公司治理两个角度出发的财务危机预警指标,并从中筛选出预警能力较强的指标,通过因子分析提取公共因子... 文章以制造业上市公司为例,选取2010—2012年首次被ST的公司及其配对公司作为样本,前两年样本用于建模,第三年用于检验,设计从财务和公司治理两个角度出发的财务危机预警指标,并从中筛选出预警能力较强的指标,通过因子分析提取公共因子后构建Logistic回归模型,其回代与预测准确率分别为79.41%和78.57%。 展开更多
关键词 制造业上市公司 财务危机预警指标 因子分析 LOGISTIC回归 预警模型
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Pro/E中主控件在模具设计中的应用 被引量：1
8
作者 吕建强 田康乐 +2 位作者 胡玉军 高红 吴海霞 《铸造技术》 CAS 北大核心 2012年第4期487-489,共3页
以Pro/Engineer Wildfire 5.0软件为平台,运用主控件法,对某型号拖拉机提升器壳体主体芯盒进行了设计。结果表明,在复杂的脱落式组合芯盒的设计中,主控件设计法较骨架模型法等方法更简洁清晰,适用性更好。模具设计中针对不同部分的特点... 以Pro/Engineer Wildfire 5.0软件为平台,运用主控件法,对某型号拖拉机提升器壳体主体芯盒进行了设计。结果表明,在复杂的脱落式组合芯盒的设计中,主控件设计法较骨架模型法等方法更简洁清晰,适用性更好。模具设计中针对不同部分的特点,采用不同的方法,能进一步提高设计的效率和准确性。 展开更多
关键词 自顶向下 主控件 模具设计 复制几何 合并/继承
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关于企业应收账款管理问题的探讨
9
作者 陈彦霖 田康乐 《财政监督》 2014年第33期49-51,共3页
在当今市场竞争日益激烈的情况下,赊销作为企业常用的一种营销策略,使得应收账款的管理更加成为现行财务管理的重要组成部分。该文从促进企业加强应收账款管理出发,分析了应收账款对于企业生产运营的正负面影响,并在结合具体案例的基础... 在当今市场竞争日益激烈的情况下,赊销作为企业常用的一种营销策略,使得应收账款的管理更加成为现行财务管理的重要组成部分。该文从促进企业加强应收账款管理出发,分析了应收账款对于企业生产运营的正负面影响,并在结合具体案例的基础上进一步提出了加强应收账款管理的建议。 展开更多
关键词 应收账款 产生原因 弊端对策
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基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究
10
作者 程朝飞 宫苗苗 +4 位作者 田康乐 王勇 赵占中 史利军 李刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1925-1930,共6页
原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和Not... 原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点,经RT-PCR扩增得到目的基因,连接pCR 2.1载体,构建重组质粒pCR-RV-M,重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶切,酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-RV-M。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大,且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot表明融合蛋白具有良好的反应原性,使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清,同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P(RV-His-P)建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清。结果表明:与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比,使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率,能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 基质蛋白M 原核表达 间接ELISA 磷蛋白P
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